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| 标准编号 | GB 31658.4-2021 (GB31658.4-2021) | | 中文名称 | | | 英文名称 | National food safety standard - Determination of cephalosporins residues in animal derived food by liquid chromatography-tandem mass spectrometry method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X04 | | 字数估计 | 9,983 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31658.4-2021: 食品安全国家标准 动物性食品中头孢类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
食品安全国家标准
动物性食品中头孢类药物残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
中华人民共和国国家标准
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前言
本文件按照GB/T １１-２０２０«标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定
起草.
本文件系首次发布.
食品安全国家标准
动物性食品中头孢类药物残留量的测定
液相色谱Ｇ串联质谱法
１ 范围
本文件规定了猪、牛肌肉、肝脏、肾脏和脂肪以及牛奶中头孢类药物残留量检测的制样和液相色谱Ｇ串
联质谱测定方法.
本文件适用于猪、牛肌肉、肝脏、肾脏和脂肪以及牛奶中头孢类药物(头孢氨苄、头孢拉定、头孢唑林、
头孢哌酮、头孢乙腈、头孢匹林、头孢洛宁、头孢喹肟、头孢噻肟)残留量的检测.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试料中残留的头孢类药物,经乙腈Ｇ水、磷酸盐缓冲液提取,固相萃取柱净化,液相色谱Ｇ串联质谱法测
定,外标法定量.
５ 试剂与材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５１ 试剂
５１１ 甲醇(CH３OH):色谱纯.
５１２ 乙腈(CH３CN):色谱纯.
５１３ 甲酸(HCOOH):色谱纯.
５１４ 磷酸二氢钾(KH２PO４).
５１５ 氢氧化钠(NaOH).
５１６ 氯化钠(NaCl).
５２ 溶液配制
５２１ 氢氧化钠溶液:取氢氧化钠５０g,加水溶解并稀释至５００mL.
５２２ 乙腈Ｇ水溶液(１５∶２,V/V).
５２３ ３０％乙腈溶液:取乙腈３０mL,用水稀释至１００mL.
５２４ ００５mol/L磷酸盐缓冲液(pH＝８５):取磷酸二氢钾６８g,用水溶解并稀释至１０００mL,用氢氧
化钠溶液调节pH至８５±０１.
５２５ ０１％甲酸溶液:取甲酸１mL,用水溶解并稀释至１０００mL,混匀.
５３ 标准品
头孢氨苄、头孢拉定、头孢唑林、头孢哌酮、头孢乙腈、头孢匹林、去乙酰基头孢匹林,头孢洛宁、头孢喹
肟、头孢噻肟标准品,含量均≥９５０％,见附录A.
５４ 标准溶液的制备
５４１ 混合标准储备液:取头孢氨苄、头孢拉定、头孢唑林、头孢哌酮、头孢乙腈、头孢匹林、去乙酰基头孢
匹林、头孢洛宁、头孢喹肟、头孢噻肟标准品各１０mg,精密称定,用３０％乙腈溶液溶解并稀释定容至
２５mL容量瓶,配制成浓度为４００μg/mL的溶液.-１８℃避光保存,有效期１个月.
５４２ 混合标准工作液:精密量取混合标准储备液适量,分别于１０mL容量瓶,用水稀释至刻度.配制
成浓度均为００５μg/mL、０５０μg/mL、２０μg/mL和２０μg/mL的混合标准工作液.４℃避光保存,有
效期７d.
５５ 材料
５５１ HLB固相萃取柱,５００mg/６mL,或相当者.
５５２ 滤膜:尼龙材质,孔径０２２μm,或性能相当者.
６ 仪器和设备
６１ 液相色谱Ｇ串联质谱仪:配电喷雾离子源.
６２ 分析天平:感量０００００１g和００１g.
６３ 旋转蒸发仪.
６４ 固相萃取装置.
６５ 均质器.
６６ 涡旋混合器.
６７ 聚丙烯塑料离心管:１０mL、５０mL.
６８ 离心机:５０００r/min或以上.
６９ 鸡心瓶:５０mL.
７ 试料的制备与保存
７１ 试料的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎,并使均质.
a) 取均质后的供试样品,作为供试试料;
b) 取均质后的空白样品,作为空白试料;
c) 取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料.
７２ 试料的保存
-１８℃以下保存,３个月内进行分析检测.
８ 测定步骤
８１ 提取
取试料２g(准确到±００２g),于５０mL离心管,加乙腈Ｇ水溶液１０mL或乙腈１０mL(仅适用于牛
奶),１００００r/min匀质１min,５０００r/min离心２min,收集上清液,于鸡心瓶中.残渣用上述溶液１０mL
重复提取１次,合并提取液,４０℃水浴中旋转蒸发,除去乙腈(如有泡沫,加饱和氯化钠水溶液４mL),立
即加磷酸盐缓冲溶液２５mL,备用.
８２ 净化
取固相萃取柱,用甲醇５mL、磷酸盐缓冲液１０mL活化.备用液过柱,待液面到达柱床表面时用磷
酸盐缓冲溶液３mL淋洗,用水２mL淋洗,乙腈３mL洗脱于１０mL离心管中,４０℃水浴氮气吹干,加水
１０mL溶解,过０２２μm滤膜,供液相色谱Ｇ串联质谱测定.
８３ 基质匹配标准曲线的制备
精密量取混合标准工作液适量,用经提取净化后的空白样品溶液稀释配制浓度为５μg/L、１０μg/L、
２０μg/L、５０μg/L、１００μg/L和２００μg/L的系列基质校准工作溶液,过０２２μm滤膜,供液相色谱Ｇ串联
质谱测定.以定量离子对峰面积为纵坐标、标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线.求回归方程和相关
系数.
８４ 测定
８４１ 液相色谱参考条件
a) 色谱柱:C１８色谱柱(５０mm×２０mm,１７μm)或相当者;
b) 流动相:A为０１％的甲酸溶液,B为甲醇,梯度洗脱条件见表１;
c) 流速:０３mL/min;
d) 柱温:３５℃;
e) 进样量:１０μL.
８４２ 质谱参考条件
a) 离子源:电喷雾(ESI)离子源;
b) 扫描方式:正离子扫描;
c) 检测方式:多反应监测(MRM);
d) 毛细管电压:２０００V;
e) RF透镜电压:０５V;
f) 离子源温度:１５０℃;
g) 脱溶剂气温度:５００℃;
h) 锥孔气流速:５０L/h;
i) 脱溶剂气流速:１０００L/h;
j) 二级碰撞气:氩气;
k) 定性离子对、定量离子对、碰撞能量和锥孔电压见表２.
８４３ 测定法
取试料溶液和基质匹配标准溶液,作单点或多点校准,按外标法以色谱峰面积定量.基质匹配标准溶
液及试料溶液中目标药物的特征离子质量色谱峰峰面积均应在仪器检测的线性范围之内.试料液中头孢
类药物的保留时间与基质匹配标准工作液中头孢类药物的保留时间之比,偏差在±２５％以内,且试料溶
液中的相对离子丰度与基质匹配标准溶液中的相对离子丰度相比,符合表３的要求.基质匹配标准溶液
多反应监测色谱图见附录B.
８５ 空白试验
取空白试料,除不加标准溶液外,采用相同的测定步骤进行平行操作.
９ 结果计算和表述
试样中待测药物的残留量按标准曲线或公式(......
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