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| 标准编号 | GB 31659.4-2022 (GB31659.4-2022) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 奶及奶粉中阿维菌素类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 | | 英文名称 | (National Food Safety Standard Determination of Abamectin Drug Residues in Milk and Milk Powder by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry) | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X16 | | 字数估计 | 9,952 | | 发布日期 | 2022-09-20 | | 实施日期 | 2023-02-01 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31659.4-2022: 食品安全国家标准 奶及奶粉中阿维菌素类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
GB 31659.4-2022 英文名称: (National Food Safety Standard Determination of Abamectin Drug Residues in Milk and Milk Powder by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry)
中华人民共和国国家卫生健康委员会
食品安全国家标准
奶及奶粉中阿维菌素类药物残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
中华人民共和国国家标准
发 布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
代替 GB/T 22968-2008
前 言
本文件按照GB/T １１-２０２０«标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定
起草.
本文件代替GB/T ２２９６８-２００８«牛奶和奶粉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素
残留量的测定 液相色谱Ｇ串联质谱法»,与GB/T ２２９６８-２００８相比,除结构调整和编辑性改动外,主要
变化如下:
---标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式;
---标准范围中增加了羊奶的检测;
---标准测定物质改为各药物的残留标志物;
---标准灵敏度进一步提高.
本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为:
---GB/T ２２９６８-２００８.
食品安全国家标准
奶及奶粉中阿维菌素类药物残留量的测定 液相色谱Ｇ串联质谱法
１ 范围
本文件规定了奶及奶粉中阿维菌素类药物残留检测的制样和液相色谱Ｇ串联质谱测定方法.
本文件适用于牛奶、羊奶和奶粉中阿维菌素(以阿维菌素B１a计)、伊维菌素(以２２,２３Ｇ二氢阿维菌素
B１a计)、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素(以乙酰氨基阿维菌素B１a计)单个或多个药物的残留检测.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅
该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试料中残留的阿维菌素类药物,用乙腈提取,C１８固相萃取柱净化,液相色谱Ｇ串联质谱测定,基质匹配
标准溶液外标法定量.
５ 试剂和材料
５１ 试剂
以下所用试剂,除特别注明外均为分析纯试剂,水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５１１ 乙腈(CH３CN):色谱纯.
５１２ 甲醇(CH３OH):色谱纯.
５１３ 甲酸(CH２O２):色谱纯.
５１４ 三乙胺(C６H１５N).
５１５ 异辛烷(C８H１８).
５２ 溶液配制
５２１ ０１％甲酸乙腈溶液:取甲酸１mL,用乙腈稀释至１０００mL.
５２２ ０１％甲酸溶液:取甲酸１mL,用水稀释至１０００mL.
５２３ 淋洗溶液:取乙腈３０mL、水７０mL和三乙胺２０μL,混匀.
５２４ ５０％乙腈溶液:取乙腈５０mL,用水稀释至１００mL.
５３ 标准品
阿维菌素(Avermectin,C４８H７２O１４C４７H７０O１４,CAS号:７１７５１Ｇ４１Ｇ２),含量≥９８０％;伊维菌素(IverＧ
mectin,C４８H７４O１４,CAS号:７０２８８Ｇ８６Ｇ７),含量≥９８０％;多拉菌素(Doramectin,C５０H７４O１４,CAS号:
１１７７０４Ｇ２５Ｇ３),含量≥９４３％;乙酰氨基阿维菌素(Eprinomectin,C５０H７５NO１４,CAS号:１２３９９７Ｇ２６Ｇ２),含量
≥９８０％.
５４ 标准溶液的制备
５４１ 阿维菌素类药物标准储备液:精密称取阿维菌素(以阿维菌素B１a计)、伊维菌素(以２２,２３Ｇ二氢
GB ３１６５９４-２０２２
阿维菌素B１a计)、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素(以乙酰氨基阿维菌素B１a计)标准品各约１０mg,于不
同的１０mL容量瓶中,用乙腈溶解并定容至刻度,配制成浓度为１mg/mL的阿维菌素B１a、２２,２３Ｇ二氢阿
维菌素B１a、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素B１a标准储备液.-１８℃以下保存,有效期１２个月.
５４２ 阿维菌素类药物标准工作液:精密量取１mg/mL的阿维菌素B１a、２２,２３Ｇ二氢阿维菌素B１a、多拉
菌素和乙酰氨基阿维菌素B１a标准储备液１００μL,于不同的１０mL容量瓶中,用乙腈稀释至刻度,配制成
浓度为１０μg/mL的阿维菌素B１a、２２,２３Ｇ二氢阿维菌素B１a、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素B１a标准工
作液.-１８℃以下保存,有效期６个月.
５５ 材料
５５１ C１８固相萃取柱:５００mg/６mL,或相当者.
５５２ 亲水聚四氟乙烯微孔滤膜:０２２μm.
６ 仪器和设备
６１ 液相色谱Ｇ串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI).
６２ 分析天平:感量０００００１g和００１g.
６３ 涡旋混合器.
６４ 高速离心机.
６５ 氮吹仪.
６６ 水平振荡器.
７ 试样的制备与保存
７１ 试样的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试牛奶或羊奶及奶粉,混合均匀.
a) 取均质后的供试样品,作为供试试样;
b) 取均质后的空白样品,作为空白试样;
c) 取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.
７２ 试样的保存
牛奶和羊奶:冷藏避光或-１８℃以下保存.
奶粉:阴凉干燥处保存.
８ 测定步骤
８１ 提取
称取牛奶或羊奶２g(准确至±００５g)或奶粉０５g(准确至±００１g)于５０mL离心管中,加乙腈
８mL,涡旋后２００r/min水平振荡５min,８０００r/min离心８min,转移上清液至另一５０mL离心管中,加
水１０mL、三乙胺２５μL,混匀,备用.
８２ 净化与浓缩
C１８固相萃取柱依次用乙腈５mL和淋洗溶液５mL活化,取备用液过柱,用淋洗溶液５mL淋洗,抽
干;再用异辛烷５mL淋洗,抽干;用乙腈５mL洗脱,收集洗脱液于１０mL试管中,于５０℃下氮气吹干.
残余物中加入５０％乙腈溶液１０mL,充分溶解.过微孔滤膜后供液相色谱Ｇ串联质谱仪测定.
８３ 基质匹配标准曲线的制备
精密量取阿维菌素类标准工作液适量,用５０％乙腈水溶液稀释成含阿维菌素B１a、２２,２３Ｇ二氢阿维
菌素B１a、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素B１a浓度分别为０５ng/mL、１ng/mL、２ng/mL、５ng/mL、
１０ng/mL、２０ng/mL、５０ng/mL、１００ng/mL 和 ４００ng/mL 的系列标准工作液(牛奶或羊奶用
０５ng/mL、１ng/mL、２ng/mL、５ng/mL、１０ng/mL、２０ng/mL和５０ng/mL浓度点,奶粉用２ng/mL、
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５ng/mL、１０ng/mL、２０ng/mL、５０ng/mL、１００ng/mL和４００ng/mL浓度点),从中各取１０mL,分别
加入空白试料经提取、净化和吹干后的残余物中,充分溶解,作为基质匹配标准溶液,过微孔滤膜后上机测
定.以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标、基质匹配标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线.
８４ 测定
８４１ 液相色谱参考条件
a) 色谱柱:C１８(５０mm×２１mm,１７μm),或性能相当者.
b) 流动相:A为０１％甲酸溶液,B为０１％甲酸乙腈溶液.流动相梯度:０min~１min保持７０％
B;１min~３min,７０％B线性变化到１００％B;３min~４min保持１００％B;４min~６min保持
７０％B.
c) 流速:０４mL/min.
d) 进样量:５μL.
e) 柱温:３０℃.
８４２ 串联质谱参考条件
a) 离子源:电喷雾离子源;
b) 扫描方式:正离子扫描;
c) 检测方式:多反应离子监测(MRM);
d) 电喷雾电压:５５００V;
e) 离子源温度:５００℃;
f) 辅助气１:５０psi;
g) 辅助气２:５０psi;
h) 气帘气:３０psi;
i) 碰撞气:Medium.
j) 待测药物定性、定量离子对和对应的去簇电压、碰撞能量参考值见表１.
８４３ 测定法
试样溶液的保留时间在基质匹配标准溶液保留时间的±２５％之内.试样溶液中的离子相对丰度与
基质匹配标准溶液中的离子相对丰度相比,符合表２的要求.
取基质匹配标准溶液和试样溶液,作单点或多点校准,按外标法,以峰面积计算.基质匹配标准溶液
及试样溶液中阿维菌素类药物的峰面积均应在仪器检测的线性范围之内,超出线性范围时进行适当倍数
稀释后再进行分析.基质匹配标准溶液中特征离子质量色谱图见附录A.
８５ 空白试验
取空白试料,除不添加药物外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作.
９ 结果计算和表述
试样中阿维菌素类药物的残留量按标准曲线或公式(１)计算.
１０ 检测方法的灵敏度、准确度和精密度
１０１ 灵敏度
本方法对牛奶或羊奶的检测限为０２μg/kg,定量限为０�......
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