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| 标准编号 | GB 5009.33-2025 (GB5009.33-2025) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定 | | 英文名称 | National food safety standard - Determination of nitrite and nitrate in foods | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | C53 | | 字数估计 | 22,217 | | 发布日期 | 2025-09-02 | | 发布机构 | National Health Commission; State Administration for Market Regulation | GB 5009.33-2025: 食品安全国家标准 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定
中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准
食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定
2025-09-02发布
2026-03-02实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局 发 布
前言
本标准代替GB 5009.33-2016《食品安全国家标准 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》。
本标准与GB 5009.33-2016相比,主要变化如下:
---增加了连续流动分析-分光光度法为第三法,将原第三法修改为第四法;
---第一法修改了样品的前处理方法;
---第二法修改了样品的前处理方法、标准溶液的配制方法和还原效率的计算方法;
---修改了方法的检出限和定量限。
食品安全国家标准
食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定
1 范围
本标准规定了食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定方法。
本标准第一法适用于食品(乳蛋白部分水解配方、乳蛋白深度水解配方、氨基酸配方及氨基酸代谢
障碍配方的特殊医学用途配方食品除外)中亚硝酸盐和硝酸盐的测定。
本标准第二法和第三法适用于食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定。
本标准第四法适用于新鲜蔬菜、水果中硝酸盐的测定。
第一法 离子色谱法
2 原理
试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后,经提取和净化,以氢氧化钾溶液或氢氧化钠溶液为淋洗液,阴离子
交换柱分离,电导检测器或紫外检测器检测。以保留时间定性,外标法定量。
3 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1 乙酸(CH3COOH):色谱纯。
3.1.2 氢氧化钾(KOH)。
3.1.3 氢氧化钠(NaOH)。
3.1.4 α-淀粉酶:酶活力≥1.5U/mg。
3.2 试剂配制
3.2.1 乙酸溶液(3%):量取乙酸3mL于100mL容量瓶中,用水稀释至刻度,混匀。
3.2.2 氢氧化钾溶液(1mol/L):称取5.6g氢氧化钾,加入新煮沸过的冷水溶解,稀释至100mL,
混匀。
3.2.3 氢氧化钠溶液(1mol/L):称取4.0g氢氧化钠,加入新煮沸过的冷水溶解,稀释至100mL,
混匀。
3.3 标准品
3.3.1 亚硝酸钠标准品(NaNO2,CAS号:7632-00-0):纯度≥99%。或经国家认证并授予标准物质证
书的亚硝酸盐标准品。
3.3.2 硝酸钠标准品(NaNO3,CAS号:7631-99-4):纯度≥99%。或经国家认证并授予标准物质证书
的硝酸盐标准品。
3.4 标准溶液的制备
3.4.1 亚硝酸钠标准储备液(100mg/L):准确称取0.1000g于110℃~120℃干燥至恒重的亚硝酸
钠,用水溶解并稀释至1000mL,混匀,于2℃~6℃冰箱保存。有效期为3个月。
3.4.2 硝酸钠标准储备液(100mg/L):准确称取0.1000g于110℃~120℃干燥至恒重的硝酸钠,用
水溶解并稀释至1000mL,混匀,于2℃~6℃冰箱保存。有效期为3个月。
3.4.3 亚硝酸钠和硝酸钠混合标准中间液(2.00mg/L):准确移取亚硝酸钠和硝酸钠的标准储备液各
2.00mL于100mL容量瓶中,用水稀释至刻度。临用现配。
3.4.4 亚硝酸钠和硝酸钠混合标准使用液:移取亚硝酸钠和硝酸钠混合标准中间液,加水逐级稀释,制
成系列标准溶液,质量浓度分别为0mg/L、0.0100mg/L、0.0200mg/L、0.0500mg/L、0.100mg/L、
0.200mg/L、0.500mg/L、1.00mg/L和2.00mg/L。临用现配。
注:可根据样品中目标分析物的含量情况,调整标准曲线的范围,至少包含5个浓度水平(不含零点)。
3.5 材料
3.5.1 滤膜针头滤器:水性,0.22μm。
3.5.2 C18净化柱:1mL,或等效柱。使用前依次用10mL甲醇、15mL水活化。
3.5.3 Ag净化柱:柱容量2.0离子当量~2.2离子当量,或等效柱。使用前用10mL水活化。
3.5.4 Na净化柱:柱容量2.0离子当量~2.2离子当量,或等效柱。使用前用10mL水活化。
4 仪器和设备
4.1 离子色谱仪:配电导检测器及抑制器,或紫外检测器。
4.2 食物粉碎机。
4.3 超声波清洗器。
4.4 电子天平:感量为0.1mg和0.01g。
4.5 离心机:转速≥10000r/min。
5 分析步骤
5.1 试样制备与贮存
5.1.1 试样制备
5.1.1.1 液体或半固体样品:取适量样品通过搅拌或振摇使样品充分混匀。
5.1.1.2 固体粉状样品:取适量样品通过振摇等手段使样品充分混匀。
5.1.1.3 干酪:取适量样品研磨成均匀的泥浆状。为避免水分损失,研磨过程中避免产生过多的热量。
5.1.1.4 其他固体样品:取适量样品粉碎至均匀粉末或制成匀浆,备用。
5.1.2 试样贮存
5.1.2.1 水果、蔬菜、肉类、水产品等易腐试样应于-18℃及以下温度保存。
5.1.2.2 其他样品按照产品的贮存条件保存。
5.2 试样提取
5.2.1 乳及乳制品、婴幼儿配方食品、特殊医学用途婴儿配方食品、特殊医学用途配方食品、燕窝及其
制品:称取液体试样10g、其他试样1g~2.5g(精确至0.01g),置于150mL具塞锥形瓶中,加水
80mL,摇匀,超声30min(必要时加热使之溶解或充分溶胀),取出放置至室温,定量转移至100mL容
量瓶中,加入3%乙酸溶液2mL(可根据沉淀效果适当调整用量),加水稀释至刻度,混匀。转移入
250mL具塞碘量瓶,于4 ℃放置20 min,取出放置至室温,取部分溶液经滤纸过滤,滤液于
10000r/min离心15min,上清液备用。
5.2.2 易糊化的高淀粉含量样品:称取试样2.5g(精确至0.01g),置于150mL具塞锥形瓶中,加入α-
淀粉酶0.2g(可根据淀粉含量调整酶用量),加水80mL,摇匀,于55℃下酶解30min。从“取出放置至
室温”开始同5.2.1操作。
5.2.3 其他样品:称取试样2g~10g(精确至0.01g),置于150mL具塞锥形瓶中,加入80mL水,超
声提取30min,每隔5min振摇1次,保持试样完全分散。于75℃水浴中放置5min,从“取出放置至室
温”开始同5.2.1操作。
5.3 试样净化
取5.2.1~5.2.3备用溶液约15mL,通过0.22μm水性滤膜针头滤器、C18柱,弃去前面3mL(如果
氯离子大于100mg/L或目标物有干扰时,则需要依次通过针头滤器、C18柱、Ag柱和Na柱,弃去前面
7mL),收集后面洗脱液待测。
5.4 空白试验
除不加试样外,其他操作与试样的操作一致。
5.5 仪器参考条件
5.5.1 色谱柱:具有氢氧化物选择性,可兼容梯度洗脱的二乙烯基苯-乙基苯乙烯共聚物基质,烷醇基季
铵盐功能团的高容量阴离子交换柱,4mm×250mm(带保护柱4mm×50mm),或性能相当的离子色
谱柱。
5.5.2 淋洗液:氢氧化钾溶液或氢氧化钠溶液,浓度为6mmol/L~70mmol/L。洗脱梯度为
6mmol/L30min,70mmol/L5min,6mmol/L5min;流速1.0mL/min。
当色谱存在干扰时可选用以下淋洗方式:
氢氧化钾溶液或氢氧化钠溶液,浓度为5 mmol/L~50 mmol/L。洗脱梯度为5 mmol/L
33min,50mmol/L5min,5mmol/L5min;流速1.3mL/min。
5.5.3 检测器:电导检测器,检测池温度为35℃;或紫外检测器,检测波长为226nm。
5.5.4 进样体积:50μL(可根据试样中被测离子含量进行调整)。
5.6 测定
5.6.1 标准曲线的制作
将标准系列使用液分别注入离子色谱仪中(标准色谱图见附录A图A.1),以标准使用液的浓度为
横坐标,以峰高或峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。
5.6.2 试样溶液的测定
将空白和试样溶液注入离子色谱仪中,得到空白和试样溶液的峰高或峰面积,根据标准曲线得到待
测液中亚硝酸钠或硝酸钠的质量浓度。
6 分析结果的表述
试样中亚硝酸盐(以亚硝酸钠计)或硝酸盐(以硝酸钠计)的含量按公式(1)计算:
X=
(ρ-ρ0)×V×f×1000
m×1000
(1)
式中:
X ---试样中亚硝酸盐(以亚硝酸钠计)或硝酸盐(以硝酸钠计)的含量,单位为毫克每千克
(mg/kg);
ρ ---测定用试样溶液中的亚硝酸盐(以亚硝酸钠计)或硝酸盐(以硝酸钠计)质量浓度,单位
为毫克每升(mg/L);
ρ0 ---空白液中亚硝酸盐(以亚硝酸钠计)或硝酸盐(以硝酸钠计)质量浓度,单位为毫克每升
(mg/L);
V ---试样溶液体积,单位为毫升(mL);
f ---试样溶液稀释倍数;
1000 ---换算系数;
m ---试样质量,单位为克(g)。
结果大于或等于1.00mg/kg时,保留3位有效数字;结果小于1.00mg/kg时,保留2位有效数字。
7 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
8 其他
8.1 检出限
亚硝酸盐(以亚硝酸钠计):液体样品(称样量为10g时)0.05mg/kg,其他样品(称样量为5g时)
0.1mg/kg。
硝酸盐(以硝酸钠计):液体样品(称样量为10g时)0.1mg/kg,其他样品(称样量为5g时)
0.2mg/kg。
8.2 定量限
亚硝酸盐(以亚硝酸钠计):液体样品(称样量为10g时)0.1mg/kg,其他样品(称样量为5g时)
0.2mg/kg。
硝酸盐(以硝酸钠计):液体样品(称样量为10g时)0.2mg/kg,其他样品(称样量为5g时)
0.4mg/kg。
第二法 分光光度法
9 原理
试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后,在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后,再与盐酸萘乙
二胺偶合形成紫红色化合物,测得亚硝酸盐含量。采用镉柱将硝酸盐还原成亚硝酸盐,测得亚硝酸盐总
量,由此总量减去亚硝酸盐含量,即得试样中硝酸盐含量。
10 试剂和材料
除非另有规定,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的三级水。
10.1 试剂
10.1.1 三水亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]。
10.1.2 二水乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]。
10.1.3 乙酸(CH3COOH)。
10.1.4 十水硼酸钠(Na2B4O7·10H2O)。
10.1.5 盐酸(HCl,ρ=1.19g/mL)。
10.1.6 氨水(NH3·H2O,25%)。
10.1.7 对氨基苯磺酸(C6H7NO3S)。
10.1.8 盐酸萘乙二胺(C12H14N2·2HCl)。
10.1.9 α-淀粉酶:酶活力≥1.5U/mg。
10.2 试剂配制
10.2.1 亚铁氰化钾溶液(106g/L):称取106g三水亚铁氰化钾,加水溶解并稀释至1000mL。
10.2.2 乙酸锌溶液(220g/L):称取220g二水乙酸锌,加30mL冰乙酸和约500mL水,加热或超声
至其完全溶解,冷却后用水稀释至1000mL。
10.2.3 硼酸钠溶液(50g/L):称取50g十水硼酸钠,加热水溶解,冷却后稀释至1000mL备用。
10.2.4 氨缓冲溶液(pH9.6~9.7):量取30mL盐酸,加500mL水,混匀后加65mL氨水,调pH至
9.6~9.7,再加水稀释至1000mL,混匀。避光保存。
10.2.5 氨缓冲溶液稀释液:量取50mL氨缓冲溶液,加水稀释至500mL,混匀。临用现配。
10.2.6 盐酸溶液(0.1mol/L):移取8.3mL盐酸,加水稀释至1000mL。
10.2.7 盐酸溶液(2mol/L):量取167mL盐酸,加水稀释至1000mL。
10.2.8 盐酸溶液(20%):量取20mL盐酸,加水稀释至100mL。
10.2.9 对氨基苯磺酸溶液(4g/L):称取0.4g对氨基苯磺酸,溶于100mL盐酸溶液(20%)中,加热或
超声使其溶解,冷却后置棕色瓶中,2℃~6℃避光保存。有效期1个月。
10.2.10 盐酸萘乙二胺溶液(2g/L):称取0.2g盐酸萘乙二胺,溶于100mL水,置于棕色瓶中,2℃~
6℃避光保存。有效期1个月。
10.2.11 乙酸溶液(3%):同3.2.1。
10.3 标准品
10.3.1 亚硝酸钠标准品(NaNO2,CAS号:7632-00-0):同3.3.1。
10.3.2 硝酸钠标准品(NaNO3,CAS号:7631-99-4):同3.3.2。
10.4 标准溶液配制
10.4.1 亚硝酸盐标准储备液(200mg/L):准确称取0.1000g于110℃~120℃干燥恒重的亚硝酸钠
标准品,用水溶解并稀释至500mL。于2℃~6℃冰箱保存。有效期3个月。
10.4.2 硝酸盐标准储备液(200mg/L):准确称取0.1000g于110℃~120℃干燥恒重的硝酸钠标准
品,用水溶解并稀释至500mL。于2℃~6℃冰箱避光保存。有效期3个月。
10.4.3 亚硝酸盐标准使用液(5.00mg/L):吸取2.50mL亚硝酸盐标准储备液于100mL容量瓶中,加
水稀释至刻度。临用现配。
10.4.4 硝酸盐标准使用液(5.00mg/L):吸取2.50mL硝酸盐标准储备液于100mL容量瓶中,加水稀
释至刻度。临用现配。
10.5 材料
椰子壳活性炭固相萃取柱(2g)。使用前依次用5mL甲醇和5mL水活化。
11 仪器和设备
11.1 电子天平:感量为0.1mg和0.01g。
11.2 组织捣碎机或研磨仪。
11.3 超声波清洗器。
11.4 恒温干燥箱:控温精度±2℃。
11.5 恒温水浴锅。
11.6 分光光度计。
11.7 镉柱装置:镉柱装置中可以填充商品化镉粒,也可以按附录B方法制备镉粒。镉柱还原效率的测
定按附录C方法执行。
12 分析步骤
12.1 试样制备与贮存
同5.1。
12.2 提取
12.2.1 乳及乳制品、婴幼儿配方食品、特殊医学用途配方食品:称取液体试样45g~90g(精确至
0.01g),固体试样1g~10g(精确至0.01g),置于250mL具塞锥形瓶中,依次加入12.5mL50g/L硼
酸钠溶液和70℃左右的水至总体积约160mL(对于不易分散的干酪样品,可加热使之完全分散),混
匀,于沸水浴中加热15min,取出置冷水浴中冷却,并放置至室温。定量转移上述提取液至200mL容
量瓶中,加入5.00mL106g/L亚铁氰化钾溶液,摇匀,再加入5.00mL220g/L乙酸锌溶液,以沉淀蛋
白质,加水至刻度,摇匀,放置30min(必要时可增加离心操作使滤液澄清),除去上层脂肪,上清液用滤
纸过滤,弃去初滤液30mL,滤液备用。
12.2.2 易糊化的高淀粉含量样品:称取试样5g(精确至0.01g),置于150mL具塞锥形瓶中,加入
0.5gα-淀粉酶(可根据淀粉含量调整酶用量),加入60mL水,混匀,置于60℃水浴锅保温15min
后,加12.5mL50g/L硼酸钠溶液,再于沸水浴中加热15min,取出置冷水浴中冷却,并放置至室温。
从“定量转移上述提取液至200mL容量瓶中”开始同12.2.1。
12.2.3 其他样品:称取2.5g~5g(精确至0.01g)试样,置于250mL具塞锥形瓶中,加12.5mL
50g/L硼酸钠溶液,加入70℃左右的水约150mL,混匀,于沸水浴中加热15min,取出置于冷水浴中
冷却,并放置至室温。从“定量转移上述提取液至200mL容量瓶中”开始同12.2.1。
注:当出现上清液不透明时,可调整加入亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液的体积;当试样的浊度或色度对检测结果有
干扰时,可将滤液通过椰子壳活性炭固相萃取柱,弃去前面5mL滤液,得到净化后的滤液。如试样颜色较
深,一次净化达不到效果,可再次过椰子壳活性炭固相萃取柱净化或采用柱容量更大的净化柱。
12.3 空白试验
除不加试样外,其他操作与试样的操作一致。
12.4 亚硝酸盐的测定
吸取40.0mL上述滤液(可根据样品含量适当减少吸取滤液的体积)于50mL具塞比色管中。另
吸取0mL、0.200mL、0.400mL、0.600mL、0.800mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL和2.50mL亚硝酸
钠标准使用液(5.00mg/L),分别置于50mL具塞比色管中,加40.0mL水。标准管与试样管中分别加
入2.00mL对氨基苯磺酸溶液,混匀,静置3min~5min,各加入1mL盐酸萘乙二胺溶液,加水至刻
度,混匀,标准管中溶液质量浓度分别为0mg/L、0.0200mg/L、0.0400mg/L、0.0600mg/L、
0.0800mg/L、0.100mg/L、0.150mg/L、0.200mg/L和0.250mg/L,静置15min,用1cm比色皿,以标
准溶液第一点(0.0mg/L亚硝酸钠)调节零点,于波长538nm处测定吸光度,绘制标准曲线。以试剂空
白调节零点,测定试样吸光度。
注:可根据样品中目标分析物的含量情况,调整标准曲线的范围,至少包含5个浓度水平(不含零点)。
12.5 硝酸盐的测定
12.5.1 镉柱还原
12.5.1.1 先以25mL氨缓冲溶液稀释液冲洗镉柱,流速控制在3mL/min~5mL/min(以滴定管代替
的可控制在2mL/min~3mL/min)。
12.5.1.2 吸取20.0mL滤液于50mL烧杯中,加10mLpH9.6~9.7氨缓冲溶液,混合后注入贮液漏
斗,使其流经镉柱还原,当贮液杯中的样液流尽后,加10mL水冲洗烧杯,再倒入贮液杯中。冲洗水流
完后,再用15mL水重复1次。当第2次冲洗水快流尽时,将贮液杯装满水,以最大流速过柱。当容量
瓶中的洗提液接近100mL时,取出容量瓶,用水定容刻度,混匀。
12.5.2 亚硝酸钠总量的测定
吸取10mL~20mL还原后的样液于50mL比色管中。以下按12.4自“吸取0mL、0.200mL、
0.400mL、0.600mL、0.800mL、1.00mL”起操作。
注:待测样液中目标物的响应值在标准曲线范围内,超过线性范围可采用比色前稀释或者减少滤液取样量的方法
进行操作。
13 分析结果的表述
13.1 亚硝酸盐含量计算
亚硝酸盐(以亚硝酸钠计)的含量按式(2)进行计算:
X1=ρ
1×1000×V×f1
m1×
V1
V0×1000
(2)
式中:
X1 ---试样中亚硝酸盐(以亚硝酸钠计)的含量,单位为毫克每千克(mg/kg);
ρ1 ---测定用样液中亚硝酸盐(以亚硝酸钠计)的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L);
1000---转换系数;
V ---测定用样液定容体积,单位为毫升(mL);
f1 ---试样溶液稀释倍数;
m1 ---试样质量,单位为克(g);
V1 ---测定用样液体积,单位为毫升(mL);
V0 ---试样处理液总体积,单位为毫升(mL)。
结果大于或等于1.00mg/kg时,保留3位有效数字;结果小于1.00mg/kg时,保留2位有效数字。
13.2 硝酸盐含量的计算
硝酸盐(以硝酸钠计)的含量按式(3)进行计算:
X2=
ρ2×1000×V×f2
m2×
V3
V2×
V5
V4×1000
-X1
÷×1.232 (3)
式中:
X2 ---试样中硝酸盐(以硝酸钠计)的含量,单位为毫克每千克(mg/kg);
ρ2 ---经镉柱还原后测得亚硝酸盐(以亚硝酸钠计)总量的质量浓度,单位为毫克每升(mg/L);
1000---转换系数;
V ---测定用样液定容体积,单位为毫升(mL);
f2 ---试样溶液稀释倍数;
m2 ---试样质量,单位为克(g);
V3 ---测亚硝酸盐总量的测定用样液体积,单位为毫升(mL);
V2 ---试样处理液总体积,单位为毫升(mL);
V5 ---经镉柱还原后样液的测定用体积,单位为毫升(mL);
V4 ---经镉柱还原后样液总体积,单位为毫升(mL);
X1 ---由式(2)计算出的试样中亚硝酸盐(以亚硝酸钠计)的含量,单位为毫克每千克(mg/kg);
1.232 ---亚硝酸钠换算成硝酸钠的系数。
结果大于或等于1.00mg/kg时,保留3位有效数字;结果小于1.00mg/kg时,保留2位有效数字。
14 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
15 其他
15.1 检出限
亚硝酸盐(以亚硝酸钠计):液体样品(称样量为90g时)0.02mg/kg,其他样品(称样量为5g时)
0.3mg/kg。
硝酸盐(以硝酸钠计):液体样品(称样量为90g时)0.2mg/kg,其他样品(称样量为5g时)
3mg/kg。
15.2 定量限
亚硝酸盐(以亚硝酸钠计):液体样品(称样量为90g时)0.06mg/kg,其他样品(称样量为5g时)
1mg/kg。
硝酸盐(以硝酸钠计):液体样品(称样量为90g时)0.6mg/kg,其他样品(称样量为5g......
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