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GB/T 18204.3-2013 相关标准英文版PDF, 自动发货

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GB/T 18204.3-2013 英文版 70 GB/T 18204.3-2013 3分钟内自动发货[PDF] 公共场所卫生检验方法 第3部分:空气微生物 GB/T 18204.3-2013 有效
GB/T 18204.3-2000 英文版 185 GB/T 18204.3-2000 3分钟内自动发货[PDF] 公共场所茶具微生物检验方法 大肠菌群测定 GB/T 18204.3-2000 作废
   
基本信息
标准编号 GB/T 18204.3-2013 (GB/T18204.3-2013)
中文名称 公共场所卫生检验方法 第3部分:空气微生物
英文名称 Examination methods for public places. Part 3: Airborne microorganism
行业 国家标准 (推荐)
中标分类 C51
国际标准分类 13.060
字数估计 12,148
旧标准 (被替代) GB/T 18204.1-2000; GB/T 17220-1998
起草单位 中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所
归口单位 中华人民共和国卫生部
标准依据 国家标准公告2013年第27号
提出机构 中华人民共和国卫生部
发布机构 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会
范围 GB/T 18204的本部分规定了公共场所空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌和嗜肺军团菌的现场采样与实验室培养方法。本部分适用于公共场所空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌以及嗜肺军团菌的测定, 其他场所可参照执行。

GB/T 18204.3-2013 Examination methods for public places.Part 3: Airborne microorganism ICS 13.060 C51 中华人民共和国国家标准 代替GB/T 18204.1-2000 部分代替GB/T 17220-1998 公共场所卫生检验方法 第3部分:空气微生物 2013-12-31发布 2014-12-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布 目次 前言 Ⅲ 1 范围 1 2 术语和定义 1 3 细菌总数 1 4 真菌总数 3 5 β-溶血性链球菌 4 6 嗜肺军团菌 5 附录A(规范性附录) 现场采样检测布点要求 8 前言 GB/T 18204《公共场所卫生检验方法》分为六个部分: ---第1部分:物理因素; ---第2部分:化学污染物; ---第3部分:空气微生物; ---第4部分:公共用品用具微生物; ---第5部分:集中空调通风系统; ---第6部分:卫生监测技术规范。 本部分为GB/T 18204的第3部分。 本部分按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本部分代替GB/T 18204.1-2000《公共场所空气微生物检验方法 细菌总数测定》,部分代替 GB/T 17220-1998《公共场所卫生监测技术规范》中的空气微生物采样要求。 本标准与GB/T 18204.1-2000和GB/T 17220-1998相比,主要变化如下: ---增加了真菌总数检验方法; ---增加了β-溶血性链球菌检验方法; ---增加了嗜肺军团菌检验方法。 本部分由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本部分由中华人民共和国卫生部负责解释。 本部分负责起草单位:中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所。 本部分参加起草单位:江苏省疾病预防控制中心、深圳市疾病预防控制中心、马鞍山市卫生局卫生 监督所。 本部分主要起草人:金银龙、刘凡、王俊起、陈晓东、余淑苑、潘力军、陈健、张宝莹、张琦、周连、 赵至荣。 本部分参加起草人:孙群露、林弈芝、张大伟、董坤、刘洋。 自本部分实施之日起,GB/T 18204.1-2000全部内容和 GB/T 17220-1998中相应内容同时 废止。 GB/T 18204.1-2000的历次版本发布情况为: ---GB/T 18204.1-2000。 GB/T 17220-1998的历次版本发布情况为: ---GB/T 17220-1998。 公共场所卫生检验方法 第3部分:空气微生物 1 范围 GB/T 18204的本部分规定了公共场所空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌和嗜肺军团菌 的现场采样与实验室培养方法。 本部分适用于公共场所空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌以及嗜肺军团菌的测定,其他 场所可参照执行。 注:本部分中同一个指标如果有2个或2个以上检验方法时,可根据技术条件选择使用。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 细菌总数 totalbacterialcount 公共场所空气中采集的样品,计数在营养琼脂培养基上经35℃~37℃、48h培养所生长发育的嗜 中温性需氧和兼性厌氧菌落的总数。 2.2 真菌总数 totalfungicount 公共场所空气中采集的样品,计数在沙氏琼脂培养基上经28℃、5d培养所形成的菌落数。 2.3 公共场所空气中采集的样品,经35℃~37℃、24h~48h培养,在血琼脂平板上形成的典型菌落。 2.4 嗜肺军团菌 legionelapneumophila 样品经培养在GVPC琼脂平板上生成典型菌落,并在BCYE琼脂平板上生长而在L-半光氨酸缺失 的BCYE琼脂平板不生长,进一步经生化实验和血清学实验鉴定确认的菌落。 2.5 撞击法 impactingmethod 采用撞击式空气微生物采样器,使空气通过狭缝或小孔产生高速气流,从而将悬浮在空气中的微生 物采集到营养琼脂平板上,经实验室培养后得到菌落数的测定方法。 2.6 自然沉降法 naturalsinkingmethod 将营养琼脂平板暴露在空气中,微生物根据重力作用自然沉降到平板上,经实验室培养后得到菌落 数的测定方法。 3 细菌总数 3.1 原理 采用撞击法或自然沉降法采样、营养琼脂培养基培养计数的方法测定公共场所空气中的细菌总数。 3.2 撞击法 3.2.1 仪器和设备 3.2.1.1 六级筛孔撞击式微生物采样器。 3.2.1.2 高压蒸汽灭菌器。 3.2.1.3 恒温培养箱。 3.2.1.4 平皿:ϕ90mm。 3.2.2 培养基 3.2.2.1 营养琼脂培养基成分: 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 肉膏 5g 琼脂 20g 蒸馏水 1000mL 3.2.2.2 制法:将蛋白胨、氯化钠、肉膏溶于蒸馏水中,校正pH为7.2~7.6,加入琼脂,121℃,20min灭 菌备用。 3.2.3 采样 3.2.3.1 采样点:见附录A。 3.2.3.2 采样环境条件:采样时关闭门窗15min~30min,记录室内人员数量、温湿度与天气状况等。 3.2.3.3 采样方法:以无菌操作,使用撞击式微生物采样器(3.2.1.1)以28.3L/min流量采集5min~ 15min。采样器使用按照说明书要求进行。 3.2.4 检验步骤 将采集细菌后的营养琼脂平皿置35℃~37℃培养48h,菌落计数。 3.2.5 结果报告 3.2.5.1 采样点细菌总数结果计算:菌落计数,记录结果并按稀释比与采气体积换算成CFU/m3(每立 方米空气中菌落形成单位)。 3.2.5.2 一个区域细菌总数测定结果:一个区域空气中细菌总数的测定结果按该区域全部采样点中细 菌总数测定值中的最大值给出。 3.3 自然沉降法 3.3.1 仪器和设备 3.3.1.1 高压蒸汽灭菌器。 3.3.1.2 恒温培养箱。 3.3.1.3 平皿:ϕ90mm。 3.3.1.4 采样支架。 3.3.2 培养基 见3.2.2。 3.3.3 采样 3.3.3.1 采样点:见附录A。 3.3.3.2 采样环境条件:见3.2.3.2。 3.3.3.3 采样方法:将营养琼脂平板置于采样点处,打开皿盖,暴露5min。 3.3.4 检验步骤 见3.2.4。 3.3.5 结果报告 计数每块平板上生长的菌落数,求出全部采样点的平均菌落数,检验结果以每平皿菌落数(CFU/皿) 给出。 4 真菌总数 4.1 原理 采用撞击法或自然沉降法采样、沙氏琼脂培养基培养计数的方法测定公共场所空气中的真菌总数。 4.2 撞击法 4.2.1 仪器和设备 见3.2.1。 4.2.2 培养基 4.2.2.1 沙氏琼脂培养基成分: 蛋白胨 10g 葡萄糖 40g 琼脂 20g 蒸馏水 1000mL 4.2.2.2 制法:将蛋白胨、葡萄糖溶于蒸馏水中,校正pH 为5.5~6.0,加入琼脂,115℃,15min灭菌 备用。 4.2.3 采样 见3.2.3。 4.2.4 检验步骤 将采集真菌后的沙氏琼脂培养基平皿置28℃培养,逐日观察并于第5天记录结果。若真菌数量过 多可于第3天计数结果,并记录培养时间。 4.2.5 结果报告 4.2.5.1 采样点真菌总数结果计算:菌落计数,记录结果并按稀释比与采气体积换算成CFU/m3(每立 方米空气中菌落形成单位)。 4.2.5.2 一个区域真菌总数测定结果:一个区域空气中真菌总数的测定结果按该区域全部采样点中真 菌总数测定值中的最大值给出。 4.3 自然沉降法 4.3.1 仪器和设备 见3.3.1。 4.3.2 培养基 见4.2.2。 4.3.3 采样 见3.3.3。 4.3.4 检验步骤 见4.2.4。 4.3.5 结果报告 计数每块平板上生长的菌落数,求出全部采样点的平均菌落数,检验结果以每平皿菌落数(CFU/皿) 给出。 5 β-溶血性链球菌 5.1 原理 采用撞击法采样、血琼脂培养基培养计数的方法测定公共场所空气中的β-溶血性链球菌。 5.2 撞击法 5.2.1 仪器和设备 见3.2.1。 5.2.2 培养基 5.2.2.1 血琼脂平板成分: 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 琼脂 20g 脱纤维羊血 5mL~10mL 蒸馏水 1000mL 5.2.2.2 制法:将蛋白胨、氯化钠、肉膏加热溶化于蒸馏水中,校正pH为7.4~7.6,加入琼脂,121℃, 20min灭菌。待冷却至50℃左右,以无菌操作加入脱纤维羊血,摇匀倾皿。 5.2.3 采样 见3.2.3。 5.2.4 检验步骤 5.2.4.1 培养方法:采样后的血琼脂平板在35℃~37℃下培养24h~48h。 5.2.4.2 结果观察:培养后,在血琼脂平板上形成呈灰白色、表面突起、直径0.5mm~0.7mm的细小菌 落,菌落透明或半透明,表面光滑有乳光;镜检为革兰氏阳性无芽孢球菌,圆形或卵圆形,呈链状排列,受 培养与操作条件影响,链的长度在4个~8个细胞至几十个细胞之间;菌落周围有明显的2mm~4mm 界限分明、完全透明的无色溶血环。符合上述特征的菌落为β-溶血性链球菌。 5.2.5 结果报告 5.2.5.1 采样点β-溶血性链球菌结果计算:菌落计数,记录结果并按稀释比与采气体积换算成CFU/m3 (每立方米空气中菌落形成单位)。 5.2.5.2 一个区域β-溶血性链球菌测定结果:一个区域空气中β-溶血性链球菌的测定结果按该区域全 部采样点中β-溶血性链球菌测定值中的最大值给出。 6 嗜肺军团菌 6.1 原理 采用液体冲击法采样、培养法定性测定公共场所空气中的嗜肺军团菌。 6.2 仪器和设备 6.2.1 微生物气溶胶浓缩器:采样流量≥100L/min,对于直径3.0μm以上粒子的捕集效率应≥80% (或浓缩比≥8)。 6.2.2 液体冲击式微生物气溶胶采样器:采样流量7L/min~15L/min,对于0.5μm以上粒子的捕集 效率应≥90%。 6.2.3 离心管:容积50mL。 6.2.4 平皿:ϕ90mm。 6.2.5 CO2 培养箱:35℃~37℃。 6.2.6 紫外灯:波长360nm±2nm。 6.2.7 涡旋振荡器。 6.2.8 普通光学显微镜、荧光显微镜。 6.2.9 水浴箱。 6.3 试剂和培养基 6.3.1 采样吸收液1---GVPC液体培养基 6.3.1.1 GVPC添加剂成分: 多黏菌素B硫酸盐 10mg 万古霉素 0.5mg 放线菌酮 80mg 6.3.1.2 BCYE添加剂成分: α-酮戊二酸 1.0g N-2酰胺基-2胺基乙烷磺酸(ACES) 10.0g 氢氧化钾 2.88g L-半胱氨酸盐酸盐 0.4g 焦磷酸铁 0.25g 6.3.1.3 吸收液成分: 活性炭 2g 酵母浸出粉 10g GVPC添加剂 BCYE添加剂 蒸馏水 1000mL 6.3.1.4 制法:将活性炭、酵母浸出粉加水至1000mL,121℃下高压灭菌15min,加入GVPC添加剂 (6.3.1.1)和BCYE添加剂(6.3.1.2),分装于灭菌后的离心管(6.2.3)中备用。 6.3.2 采样吸收液2---酵母提取液 6.3.2.1 吸收液成分: 酵母浸出粉 12g 蒸馏水 1000mL 6.3.2.2 制法:将酵母浸出粉加水至1000mL,121℃下高压灭菌15min,分装于灭菌后的离心管(6.2.3) 中备用。 6.3.3 盐酸氯化钾溶液[c(HCl·KCl)=0.01mol/L] 6.3.3.1 成分: 盐酸(0.2mol/L) 3.9mL 氯化钾(0.2mol/L) 25mL 6.3.3.2 制法:将上述成分混合,用1mol/L氢氧化钾调整pH=2.2±0.2,121℃下高压灭菌15min 备用。 6.3.4 GVPC琼脂平板。 6.3.5 BCYE琼脂平板。 6.3.6 BCYE-CYE琼脂平板。 6.3.7 革兰氏染色液。 6.3.8 马尿酸盐生化反应管。 6.3.9 军团菌分型血清试剂。 6.4 采样 6.4.1 采样点:见附录A。 6.4.2 将采样吸收液1(6.3.1)20mL倒入微生物气溶胶采样器(6.2.2)中,然后用吸管加入矿物油 1滴~2滴。 6.4.3 将微生物气溶胶浓缩器(6.2.1)与微生物气溶胶采样器(6.2.2)连接,按照微生物气溶胶浓缩器和 微生物气溶胶采样器的流量要求调整主流量和浓缩流量。 6.4.4 按浓缩器和采样器说明书操作,每个气溶胶样品采集空气量1m3~2m3。 6.4.5 将采样吸收液2(6.3.2)20mL倒入微生物气溶胶采样器(6.2.2)中,然后用吸管加入矿物油1滴~ 2滴;在相同采样点重复6.4.3、6.4.4步骤。 6.4.6 采集的样品不必冷冻,但要避光和防止受热,4h内送实验室检验。 6.5 检验步骤 6.5.1 样品的酸处理:对采样后的吸收液1(6.3.1)和吸收液2(6.3.2)原液各取1mL,分别加入盐酸氯 化钾溶液(6.3.3)充分混合,调pH至2.2,静置15min。 6.5.2 样品的接种:在酸处理后的两种样品(6.5.1)中分别加入1mol/L氢氧化钾溶液,中和至pH为 6.9,各取悬液0.2mL~0.3mL分别接种GVPC平板(6.3.4)。 6.5.3 样品的培养:将接种平板静置于浓度为5%、温度为35℃~37℃的CO2 培养箱(6.2.5)中,孵育 10d。 6.5.4 菌落观察:从孵育第3天开始观察菌落。军团菌的菌落颜色多样,通常呈白色、灰色、蓝色或紫 色,也能显深褐色、灰绿色、深红色;菌落整齐,表面光滑,呈典型毛玻璃状,在紫外灯下,部分菌落有 荧光。 6.5.5 菌落验证:从平皿上挑取2个可疑菌落,接种BCYE琼脂平板(6.3.5)和L-半光氨酸缺失的 BCYE琼脂平板(6.3.6),35℃~37℃培养2d,凡在BCYE琼脂平板上生长而在L-半光氨酸缺失的 BCYE琼脂平板不生长的则为军团菌菌落。 6.5.6 菌型确定:应进行生化培养与血清学实验确定嗜肺军团菌。生化培养:氧化酶(-/弱+),硝酸 盐还原(-),尿素酶(-),明胶液化(+),水解马尿酸。血清学实验:用嗜肺军团菌诊断血清进行分型。 6.6 结果报告 6.6.1 采样点测定结果:两种采样吸收液中至少有一种吸收液培养出......