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| 标准编号 | GB/T 22338-2008 (GB/T22338-2008) | | 中文名称 | 动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定 | | 英文名称 | Determination of multi-residues of chloramphenicol in animal-original food | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | X22 | | 国际标准分类 | 67.120 | | 字数估计 | 17,166 | | 发布日期 | 2008-09-01 | | 实施日期 | 2008-12-01 | | 标准依据 | 国家标准批准发布公告2008年第14号(总第127号) | | 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会 | | 范围 | 本标准规定了动物源性食品中氯霉素类残留量的气相色谱-质谱和液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于水产品、蓄禽产品和蓄禽副产品中氯霉素、氟甲砜酶素和甲砜酶素残留的定性确证和定量测定。 | GB/T 22338-2008: 动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定
GB/T 22338-2008 英文名称: Determination of multi-residues of chloramphenicol in animal-original food
ICS ６７．１２０
X２２
中华人民共和国国家标准
１ 范围
本标准规定了动物源性食品中氯霉素类残留量的气相色谱-质谱和液相色谱-质谱／质谱测定方法。
本标准适用于水产品、畜禽产品和畜禽副产品中氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素残留的定性确证和定量测定。
２ 气相色谱-质谱法
２．１ 原理样品用乙酸乙酯提取，４％氯化钠溶液和正己烷液-液分配净化，再经弗罗里硅土（Ｆｌｏｒｉｓｉｌ）柱净化
后，以甲苯为反应介质，用Ｎ，Ｏ双（三甲基硅基）三氟乙酰胺-三甲基氯硅烷（ＢＳＴＦＡ＋ＴＭＣＳ，９９＋１）
于７０℃硅烷化，用气相色谱／负化学电离源质谱测定，内标工作曲线法定量。
２．２ 试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和二次去离子水或相当纯度的水。
２．３ 仪器和设备
２．４ 测定步骤
２．４．１ 提取称取１０ｇ（精确到０．０１ｇ）粉碎的组织样品于５０ｍＬ具塞离心管中，加入１．０ｍＬ内标溶液
（２．２．１１）和３０ｍＬ乙酸乙酯，振荡３０ｍｉｎ，于４０００ｒ／ｍｉｎ离心２ｍｉｎ，上层清液转移至圆底烧瓶中，残
渣用３０ｍＬ乙酸乙酯再提取一次，合并提取液，３５℃旋转蒸发至１ｍＬ～２ｍＬ，待净化。
２．４．２ 净化
２．４．２．１ 液-液萃取
提取液浓缩物（２．４．１）加１ｍＬ甲醇溶解，用２０ｍＬ氯化钠溶液（２．２．９）和２０ｍＬ正己烷液-液萃
取，弃去正己烷层，水相用４０ｍＬ乙酸乙酯分两次萃取，合并乙酸乙酯相于心形瓶中，３５℃旋转蒸发至
近干，用氮气缓慢吹干。
２．４．２．２ 弗罗里硅土柱净化
弗罗里硅土柱依次用５ｍＬ甲醇、５ｍＬ甲醇-乙醚（３＋７）溶液和５ｍＬ乙醚淋洗备用。将残渣
（２．４．２．１）用５．０ｍＬ乙醚溶解上样，用５．０ｍＬ乙醚淋洗Ｆｌｏｒｉｓｉｌ柱，５．０ｍＬ甲醇-乙醚溶液（３＋７）洗
脱，洗脱液用氮气缓慢吹干，待硅烷化。
２．４．３ 硅烷化净化后的试样（２．４．２．２）用０．２ｍＬ甲苯溶解，加入０．１ｍＬ硅烷化试剂（２．２．１３）混合，于７０℃衍
生化６０ｍｉｎ。氮气缓慢吹干，用１．０ｍＬ正己烷定容，待测定。
２．４．４ 测定
２．４．４．１ 气相色谱-质谱条件
ａ） 色谱柱：ＤＢ-５ＭＳ毛细管柱，３０ｍ×０．２５ｍｍ（内径）×０．２５μｍ，或与之相当者；
ｂ） 色谱柱温度：５０℃保持１ｍｉｎ，２５℃／ｍｉｎ升至２８０℃，保持５ｍｉｎ；
ｃ） 进样口温度：２５０℃；
ｄ） 进样方式：不分流进样，不分流时间０．７５ｍｉｎ；
ｅ） 载气：高纯氦气，纯度≥９９．９９９％；
ｆ） 流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；
ｇ） 进样量：１．０μＬ；
ｈ） 接口温度：２８０℃；
ｉ） 离子源：化学电离源负离子模式ＮＣＩ；
ｊ） 扫描方式：选择离子监测；
ｋ） 离子源温度：１５０℃；
ｌ） 四级杆温度：１０６℃；
ｍ） 反应气：甲烷，纯度≥９９．９９９％；
ｎ） 选择监测离子参见表１。
２．４．４．２ 定性测定
进行试样测定时，如果检出色谱峰的保留时间与标准物质相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图
中，所选择的离子均出现，而且所选择离子的相对离子丰度比与标准物质一致，相对丰度允许偏差不超
过表１规定的范围，则可判断样品中存在对应的三种氯霉素。如果不能确证，应重新进样，以扫描方式
（有足够灵敏度）或采用增加其他确证离子的方式来确证。
２．４．４．３ 内标工作曲线
用配制的基质标准工作溶液（２．２．１２）按２．４．４．１的气相色谱-质谱条件分别进样，以标准溶液浓度
为横坐标，待测组分与内标物的峰面积之比为纵坐标绘制内标工作曲线。
２．４．４．４ 定量以ｍ／ｚ４６６（ｍ-ＣＡＰ和ＣＡＰ）、３３９（ＦＦ）和４０９（ＴＡＰ）为定量离子，样品溶液中氯霉素类衍生物的响
应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下（２．４．４．１），ｍ-ＣＡＰ、ＣＡＰ、ＦＦ、ＴＡＰ标准物质
衍生物参考保留时间约为１１．４ｍｉｎ、１１．８ｍｉｎ、１２．６ｍｉｎ、１３．６ｍｉｎ。氯霉素类标准物质衍生物总离子
流图和质谱图参见附录Ａ中的图Ａ．１和图Ａ．２。
２．４．５ 平行实验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。
２．４．６ 空白实验除不加试样外，均按上述测定步骤进行。
２．５ 结果计算结果按式（１）计算：
２．６ 测定低限气相色谱-质谱测定低限为：氯霉素０．１μｇ／ｋｇ，氟甲砜霉素和甲砜霉素０．５μｇ／ｋｇ。
２．７ 回收率和精密度参见附录Ｂ。
３ 液相色谱-质谱／质谱法
３．１ 原理
针对不同动物源性食品中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素残留，分别采用乙腈、乙酸乙酯-乙醚或乙
酸乙酯提取，提取液用固相萃取柱进行净化，液相色谱-质谱／质谱仪测定，氯霉素采用内标法定量，甲砜
霉素和氟甲砜霉素采用外标法定量。
３．２ 试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和二次去离子水或相当纯度的水。
３．４．１ 试样的制备
从原始样品中取出部分有代表性样品，经高速组织捣碎机均匀捣碎或混匀，用四分法缩分出适量试
样，均分成两份，装入清洁容器内，加封后作出标记，一份作为试样，一份作为留样。
３．４．２ 试样的保存试样应在 -２０℃条件下保存。
３．５ 测定步骤３．５．１ 提取
３．５．２ 净化
３．５．２．１ 动物组织与水产品
用５ｍＬ丙酮-正己烷（３．２．１２）淋洗ＬＣ-Ｓｉ硅胶小柱，弃去淋洗液，将残渣溶解溶液（３．５．１．１、３．５．１．２）
转移到固相萃取小柱上，弃去流出液，用５ｍＬ丙酮-正己烷（３．２．１３）洗脱，收集洗脱液于心形瓶中，４０℃水
浴中旋转蒸发至近干，氮气吹干，用１ｍＬ水定容，定容液过０．４５μｍ滤膜（３．２．２７）至进样瓶，待测定。
３．５．２．２ 蜂蜜
分别用５ｍＬ甲醇，５ｍＬ水活化ＥＮ固相萃取柱，将提取液（３．５．１．３）转移上柱，用５ｍＬ水淋涤，
用玻璃棒压干１ｍｉｎ，用３ｍＬ乙酸乙酯洗脱，洗脱液用氮气吹干，用１ｍＬ水定容，定容液通过０．４５μｍ
滤膜（３．２．２７）至进样瓶，待测定。
３．５．３．３ 定性测定
按照上述条件测定样品和建立标准工作曲线，如果样品中化合物质量色谱峰的保留时间与标准溶
液的保留时间相比在允许偏差±２．５％之内；待测化合物定性离子对的重构离子色谱峰的信噪比大于或
等于３（Ｓ／Ｎ≥３），定量离子对的重构离子色谱峰的信噪比大于或等于１０（Ｓ／Ｎ≥１０）；定性离子对的相
对丰度与浓度相当的标准溶液相比，相对丰度偏差不超过表３的规定，则可判断样品中存在相应的目标
化合物。氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素混合标准工作溶液的液相色谱-质谱／质谱多反应监测（ＭＲＭ）
总离子流图和重构离子色谱图以及各目标化合物相对保留时间参见附录Ｄ中图 Ｄ．１～图 Ｄ．５和
３．５．３．４ 定量测定氯霉素使用内标法定量；甲砜霉素和氟甲砜霉素使用外标法定量。
３．６ 结果计算试样中目标化合物残留量使用仪器数据处理系统或氯霉素残留量按式（２）计算，
甲砜霉素和氟甲砜霉素按式（３）计算：
３．８ 回收率和精密度
附 录 A（资料性附录）
氯霉素类标准物质衍生物的气相色谱-质谱总离子流色谱图和质谱图
附 录 B（资料性附录）
氯霉素类药物在不同基质中的平均回收率和精密度（GC／MS法）
附 录 C（资料性附录）
液相色谱-质谱／质谱测定参考条件１）
液相色谱-质谱／质谱测定参考条件
ａ） 离子源：电喷雾离子源；
ｂ） 扫描方式：负离子扫描；
ｃ） 检测方式：多重反应监测（ＭＲＭ）；
ｄ） 电喷雾电压：-４５００Ｖ；
ｅ） 雾化气压力：０．２７６ＭＰ......
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