搜索结果: GB/T 23741-2025, GB/T23741-2025, GBT 23741-2025, GBT23741-2025
| 标准编号 | GB/T 23741-2025 (GB/T23741-2025) | | 中文名称 | 饲料中巴比妥类药物的测定 | | 英文名称 | Determination of barbiturates in feeds | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | B46 | | 国际标准分类 | 65.120 | | 字数估计 | 18,124 | | 发布日期 | 2025-08-01 | | 实施日期 | 2026-02-01 | | 旧标准 (被替代) | GB/T 20363-2006,GB/T 23741-2009 | | 发布机构 | 国家市场监督管理总局、国家标准化管理委员会 | GB/T 23741-2025: 饲料中巴比妥类药物的测定
ICS 65.120
CCSB46
中华人民共和国国家标准
代替GB/T 20363-2006、GB/T 23741-2009
饲料中巴比妥类药物的测定
2025-08-01发布
2026-02-01实施
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
本文件代替GB/T 20363-2006《饲料中苯巴比妥的测定》、GB/T 23741-2009《饲料中4种巴比妥
类药物的测定》,与GB/T 20363-2006、GB/T 23741-2009相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技
术变化如下:
a) 更改了适用范围、液相色谱-串联质谱法的定量限(见第1章,GB/T 20363-2006的第1章、
GB/T 23741-2009的第1章);
b) 删除了GC-MS法(见GB/T 20363-2006的第4章);
c) 更改了原理(见4.1和5.1,GB/T 20363-2006的3.1、GB/T 23741-2009的第3章);
d) 更改了试验步骤(见4.5和5.5,GB/T 20363-2006的3.5、GB/T 23741-2009的第7章);
e) 更改了试验数据处理(见4.6和5.6,GB/T 20363-2006的3.6、GB/T 23741-2009的8.4和
9.8)。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。
本文件起草单位:山东省畜产品质量安全中心、国粮武汉科学研究设计院有限公司、梅里埃检测技
术(青岛)有限公司。
本文件主要起草人:孙延军、张芸、兰凤洁、王博媛、杜言、李俊玲、陈贝贝、张坤、王暖霞、张玮、张超、
张博文、晁娟娟、赵学峰、吴立国、刘霄飞、李会荣、王英英。
本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为:
---GB/T 20363,2006年首次发布为GB/T 20363-2006;
---GB/T 23741,2009年首次发布为GB/T 23741-2009;
---本次为第一次修订。
饲料中巴比妥类药物的测定
1 范围
本文件描述了饲料中巴比妥类药物的液相色谱-串联质谱和高效液相色谱测定方法。
本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料和混合型饲料添加剂中巴比妥、
苯巴比妥、仲丁巴比妥、戊巴比妥、异戊巴比妥和司可巴比妥的测定。
本文件液相色谱-串联质谱法的检出限为0.01mg/kg,定量限为0.03mg/kg;高效液相色谱法的检
出限为0.5mg/kg,定量限为1mg/kg。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文
件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于
本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 20195 动物饲料 试样的制备
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 液相色谱-串联质谱法
4.1 原理
试样中的待测物经乙腈提取,固相萃取柱净化,液相色谱串联质谱仪测定,内标法定量。
4.2 试剂或材料
除非另有规定,仅使用分析纯试剂。
4.2.1 水:GB/T 6682,一级。
4.2.2 甲醇:色谱纯。
4.2.3 乙腈:色谱纯。
4.2.4 甲酸:色谱纯。
4.2.5 乙酸铵:色谱纯。
4.2.6 硫酸钠。
4.2.7 氯化钠。
4.2.8 乙酸铵溶液(0.005mol/L):称取0.19g乙酸铵(4.2.5),用水溶解,转移至500mL容量瓶中,定
容,混匀。
4.2.9 复溶液:移取200mL乙腈(4.2.3)于1000mL容量瓶中,加入2mL甲酸(4.2.4),用水稀释、定
容,混匀。
4.2.10 标准储备溶液(1mg/mL):准确称取巴比妥、苯巴比妥、戊巴比妥、异戊巴比妥、司可巴比妥和
仲丁巴比妥标准品(CAS号等信息见附录A,纯度均不低于99.0%)各10mg(精确至0.01mg),分别置
于10mL容量瓶中,用甲醇(4.2.2)溶解、定容,混匀。-18℃以下保存,有效期6个月。或购买有证标
准溶液。
4.2.11 混合标准中间溶液Ⅰ(10μg/mL):分别准确移取标准储备溶液(4.2.10)各0.1mL于10mL容
量瓶中,用甲醇(4.2.2)稀释、定容,混匀。-18℃以下保存,有效期1个月。
4.2.12 混合标准中间溶液Ⅱ(1μg/mL):准确移取1mL混合标准中间溶液Ⅰ(4.2.11)于10mL容量
瓶中,用甲醇(4.2.2)稀释、定容,混匀。临用现配。
4.2.13 内标混合储备溶液(1mg/mL):准确称取戊巴比妥-d5、苯巴比妥-d5和异戊巴比妥-d5标准品
(CAS号等信息见附录A,纯度均不低于99.0%)各10mg(精确至0.01mg),置于10mL容量瓶中,用
甲醇(4.2.2)溶解、定容,混匀。-18℃以下保存,有效期6个月。
4.2.14 内标混合中间溶液(10μg/mL):准确移取0.1mL内标混合储备溶液(4.2.13)于10mL容量瓶
中,用甲醇(4.2.2)稀释、定容,混匀。-18℃以下保存,有效期1个月。
4.2.15 内标混合工作溶液(1μg/mL):准确移取1mL内标混合中间溶液(4.2.14)于10mL容量瓶
中,用甲醇(4.2.2)稀释、定容,混匀。临用现配。
4.2.16 混合标准系列溶液:准确移取适量混合标准中间溶液Ⅱ(4.2.12)及100μL内标混合工作溶液
(4.2.15)于10mL容量瓶中,用复溶液(4.2.9)稀释、定容,混匀,配制成质量浓度分别为0.01μg/mL、
0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL和内标质量浓度均为0.01μg/mL的混合标准系列溶
液。临用现配。
4.2.17 固相萃取小柱:填料为N-丙基乙二胺(PSA),硅胶键合三官能十八烷基(C18)、合成石墨化炭
黑(CarbonS)和增强型脂肪去除吸附剂(EMR-Lipid),595mg/6mL,或性能相当者。
4.2.18 微孔滤膜:0.22μm,有机系。
4.3 仪器设备
4.3.1 液相色谱-串联质谱仪:配电喷雾离子源(ESI)。
4.3.2 分析天平:精度0.01g和0.01mg。
4.3.3 涡旋混合器。
4.3.4 高速离心机:转速不低于10000r/min。
4.3.5 固相萃取装置。
4.3.6 氮吹仪。
4.4 试样制备
按GB/T 20195制备样品,至少200g,粉碎使其全部通过0.425mm孔径的试验筛,混合均匀,装入
密闭容器中,备用。
4.5 试验步骤
4.5.1 提取
平行做两份试验。称取试样2g(精确至0.01g)于50mL离心管中,准确加入0.02mL内标混合工
作溶液(4.2.15)和10mL(V1)乙腈(4.2.3),涡旋5min,10000r/min离心5min,上清液备用。
4.5.2 净化
取全部上清液(4.5.1)于50mL离心管中,加入3mL水,涡旋1min。加入4g硫酸钠(4.2.6)、1g
氯化钠(4.2.7),涡旋1min,10000r/min离心5min。准确取上清液5mL(V2)过固相萃取小柱
(4.2.17),收集滤液,于40℃氮吹至近干,准确加入1mL(V3)复溶液(4.2.9),涡旋1min,过微孔滤膜
(4.2.18),滤液待测。
4.5.3 测定
4.5.3.1 液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下:
a) 色谱柱:C18柱,柱长100mm,内径2.1mm,粒径1.8μm,或性能相当者;
b) 柱温:40℃;
c) 进样量:2μL;
d) 流速:0.3mL/min;
e) 流动相:A相为0.005mol/L乙酸铵溶液(4.2.8),B相为乙腈(4.2.3),梯度洗脱程序见表1。
表1 梯度洗脱程序
时间
min
A相(体积分数)
B相(体积分数)
0.00 75 25
7.00 70 30
7.01 0 100
8.50 0 100
8.51 75 25
9.50 75 25
4.5.3.2 质谱参考条件
质谱参考条件如下:
a) 离子源:电喷雾离子源;
b) 扫描方式:负离子扫描;
c) 检测方式:多反应监测(MRM);
d) 离子源温度:450℃。
多反应监测(MRM)离子对及碰撞能量见表2。
表2 多反应监测(MRM)离子对及碰撞能量
被测物名称
定性离子对
m/z
定量离子对
m/z
碰撞能量
eV
巴比妥
183.0 >42.0
183.0 >140.0
183.0 >42.0
苯巴比妥
231.0 >42.1
231.0 >85.1
231.0 >42.1
表2 多反应监测(MRM)离子对及碰撞能量 (续)
被测物名称
定性离子对
m/z
定量离子对
m/z
碰撞能量
eV
戊巴比妥
225.2 >42.1
225.2 >182.2
225.2 >42.1
异戊巴比妥
225.2 >42.1
225.2 >182.2
225.2 >42.1
司可巴比妥
237.1 >42.1
237.1 >194.3
237.1 >42.1
仲丁巴比妥
211.2 >168.2
211.2 >42.1
211.2 >168.2
苯巴比妥-d5 236.2 >193.1 236.2 >193.1 20
异戊巴比妥-d5 230.2 >42.1 230.2 >42.1 42
戊巴比妥-d5 230.2 >42.1 230.2 >42.1 42
4.5.3.3 混合标准系列溶液和试样溶液测定
在仪器的最佳条件下,分别取混合标准系列溶液(4.2.16)和试样溶液(4.5.2)上机测定。待测物和
内标标准溶液的定量离子色谱图见附录B。
4.5.3.4 定性
在相同试验条件下,试样溶液中待测物的保留时间与标准工作液(质量浓度相当)中的保留时间相
对偏差在±2.5%之内,并且色谱图中定性离子对的相对丰度,与浓度接近的标准工作液中相应定性离
子对的相对丰度进行比较,若相对偏差不超过表3规定的范围,则可判断为样品中存在对应的待测物。
表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许误差
相对离子丰度/% >50 >20~50 >10~20 ≤10
最大允许偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50
4.5.3.5 定量
以待测化合物浓度与内标浓度的比值为横坐标、待测化合物峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标
绘制标准工作曲线,其相关系数应不低于0.99。试样溶液中待测物的质量浓度应在标准曲线的线性范
围内。如超出线性范围,应调整称样量后重新测定。单点校准定量时,试样溶液中待测物的质量浓度与
标准溶液的质量浓度相差不超过30%。巴比妥、仲丁巴比妥、戊巴比妥和司可巴比妥用戊巴比妥-d5定
量,异戊巴比妥用异戊巴比妥-d5定量,苯巴比妥用苯巴比妥-d5定量。
4.6 试验数据处理
试样中待测物的含量以质量分数wi 计,数值以毫克每千克(mg/kg)表示,多点校准按公式(1)计
算;单点校准按公式(2)计算:
wi=ρ
×V1×V3×1000
V2×m×1000
(1)
式中:
ρ ---由标准曲线得到的试样溶液中待测物的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);
V1 ---提取溶液的体积,单位为毫升(mL);
V3 ---复溶液的体积,单位为毫升(mL);
V2 ---上柱溶液的体积,单位为毫升(mL);
m ---试样的质量,单位为克(g);
1000---换算系数。
wi=
A×Asi×ρs×ρi×V1×V3×1000
As×Ai×ρsi×V2×m×1000
(2)
式中:
A ---试样溶液待测物色谱峰面积;
Asi ---标准溶液内标物色谱峰面积;
ρs ---标准溶液待测物的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);
ρi ---试样溶液内标物的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);
V1 ---试样提取液的总体积,单位为毫升(mL);
V3 ---复溶液的体积,单位为毫升(mL);
As ---标准溶液待测物色谱峰面积;
Ai ---试样溶液内标物的色谱峰面积;
ρsi ---标准溶液内标物的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);
V2 ---上柱溶液的体积,单位为毫升(mL);
m ---试样的质量,单位为克(g);
1000 ---换算系数。
测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留3位有效数字。
4.7 精密度
在重复性条件下,两次独立测试结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的20%。
5 高效液相色谱法
5.1 原理
试样中的待测物经乙腈提取,固相萃取柱净化,高效液相色谱仪测定,外标法定量。
5.2 试剂或材料
除非另有说明,仅使用分析纯试剂。
5.2.1 水:GB/T 6682,一级。
5.2.2 甲醇:色谱纯。
5.2.3 乙腈:色谱纯。
5.2.4 硫酸钠。
5.2.5 氯化钠。
5.2.6 磷酸二氢钠溶液(0.01mol/L):称取1.2g无水磷酸二氢钠,加水超声溶解,定容至1000mL,混匀。
5.2.7 20%乙腈溶液:移取20mL乙腈(5.2.3)于100mL容量瓶中,用水稀释、定容,混匀。
5.2.8 标准储备溶液(1mg/mL):准确称取巴比妥、苯巴比妥、戊巴比妥、异戊巴比妥、司可巴比妥和仲
丁巴比妥标准品(CAS号等信息见附录A,纯度均不低于99.0%)各10mg(精确至0.01mg),分别置于
10mL容量瓶中,用甲醇(5.2.2)溶解、定容,混匀。-18℃以下保存,有效期6个月。或购买有证标准
溶液。
5.2.9 混合标准中间溶液(100μg/mL):分别准确移取标准储备溶液(5.2.8)各1mL于10mL容量瓶
中,用甲醇(5.2.2)稀释、定容,混匀。-18℃以下保存,有效期1个月。
5.2.10 混合标准系列溶液:准确移取适量混合标准中间溶液(5.2.9),用20%乙腈溶液(5.2.7)稀释、定
容,混匀,配制成质量浓度分别为0.5μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL和50μg/mL
的混合标准系列溶液。临用现配。
5.2.11 固相萃取小柱:填料为N-丙基乙二胺(PSA),硅胶键合三官能十八烷基(C18)、合成石墨化炭
黑(CarbonS)和增强型脂肪去除吸附剂(EMR-Lipid),595mg/6mL,或性能相当者。
5.2.12 微孔滤膜:0.45μm,有机系。
5.3 仪器设备
5.3.1 高效液相色谱仪:配紫外检测器或二极管阵列检测器。
5.3.2 分析天平:精度0.01g和0.01mg。
5.3.3 涡旋混合器。
5.3.4 高速离心机:转速不低于10000r/min。
5.3.5 固相萃取装置。
5.3.6 氮吹仪。
5.4 试样制备
按GB/T 20195制备样品,至少200g,粉碎使其全部通过0.425mm 孔径的试验筛,混合均匀,装
入密闭容器中,备用。
5.5 试验步骤
5.5.1 提取
平行做两份试验。称取试样2g(精确至0.01g)于50mL离心管中,准确加入10mL(V1)乙腈
(5.2.3),涡旋5min,10000r/min离心5min,取上清液备用。
5.5.2 净化
备用液(5.5.1)中加入3mL水,涡旋1min。加入4g硫酸钠(5.2.4)、1g氯化钠(5.2.5),剧烈振荡
1min,10000r/min离心5min。准确取上清液5mL(V2)过固相萃取小柱(5.2.11),收集滤液,于40℃
氮吹至干,准确加入20%乙腈溶液(5.2.7)1mL(V3)复溶,涡旋1min,过微孔滤膜(5.2.12),滤液待测。
5.5.3 高效液相色谱参考条件
高效液相色谱参考条件如下:
a) 色谱柱:C18柱,柱长150mm,内径4.6mm,粒径2.7μm,或性能相当者;
b) 柱温:30℃;
c) 检测波长:215nm;
d) 流动相:A相为磷酸二氢钠溶液(5.2.6),B相为乙腈(5.2.3),梯度洗脱程序见表4;
e) 流速:0.45mL/min;
f) 进样量:5μL。
表4 梯度洗脱程序
时间
min
A相(体积分数)
B相(体积分数)
0.0 85 15
3.0 85 15
4.5 75 25
22.0 73 27
22.5 20 80
26.5 20 80
27.0 85 15
30.0 85 15
5.5.4 测定
5.5.4.1 混合标准系列溶液和试样溶液的测定
在仪器的最佳条件下,分别取混合标准系列溶液(5.2.10)和试样溶液(5.5.2)上机测定。待测物标
准溶液的高效液相色谱图见附录C。
5.5.4.2 定性
以保留时间定性,试样溶液中待测物的保留时间应与标准系列溶液(质量浓度相当)中相对应的保
留时间一致,其相对偏差在±2.5%之内。
5.5.4.3 定量
以待测物的浓度为横坐标、色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,其相关系数应不低于0.99。试样
溶液(5.5.2)中待测物的质量浓度应在标准曲线的线性范围内。如超出范围,应将试样溶液(5.5.2)用
20%乙腈溶液(5.2.7)适当稀释后,重新测定。单点校准定量时,试样溶液中待测物的质量浓度与标准
溶液的质量浓度相差不超过30%。
5.6 试验数据处理
试样中待测物的含量以质量分数wi 计,数值以毫克每千克(mg/kg)表示,多点校准按公式(3)计
算,单点校准按公式(4)计算:
wi=ρ
×V1×V3×1000
V2×m×1000 ×f
(3)
式中:
ρ ---由标准曲线查得的试样溶液中待测物的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);
V1 ---提取溶液的体积,单位为毫升(mL);
V3 ---复溶液的体积,单位为毫升(mL);
V2 ---上柱溶液的体积,单位为毫升(mL);
m ---试样的质量,单位为克(g);
f ---超出曲线范围,试样溶液的稀释倍数;
1000---换算系数。
wi=
A×V1×V3×ρs×1000
As×V2×m×1000 ×f
(4)
式中:
A ---试样溶液的待测物色谱峰面积;
V1 ---提取溶液的体积,单位为毫升(mL);
V3 ---复溶液的体积,单位为毫升(mL);
ρs ---标准溶液中待测物的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);
As ---标准溶液待测物色谱峰面积;
V2 ---上柱溶液的体积,单位为毫升(mL);
m ---试样的质量,单位为克(g);
f ---超出曲线范围,试样溶液的稀释倍数;
1000 ---换算系数。
测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留3位有效数字。
5.7 精密度
在重复性条件下,两次独立测试结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的10%。
附 录 A
(资料性)
巴比妥类物质及内标的中文名称、英文名称、CAS号、分子式和相对分子质量
巴比妥类物质及内标的中文名称、英文名称、CAS号、分子式和相对分子质量见表A.1。
表A.1 巴比妥类物质及内标的中文名称、英文名称、CAS号、分子式和相对分子质量
中文名称 英文名称 CAS号 分子式 相对分子质量
巴比妥 Barbital 57-44-3 C8H12N2O3 184.19
苯巴比妥 Phenobarbital 50-06-6 C12H12N2O3 232.24
仲丁巴比妥 Butabarbital 125-40-6 C10H16N2O3 212.25
戊巴比妥 Pentobarbital 76-74-4 C11H18N2O3 226.27
异戊巴比妥 Amobarbital 57-43-2 C11H18N2O3 226.27
司可巴比妥 Secobarbital 76-73-3 C12H18N2O3 238.28
苯巴比妥-d5 Phenobarbital-d5 73738-05-3 C12H7D5N2O3 237.27
戊巴比妥-d5 Pentobarbital-d5 52944-66-8 C11D5H13N2O3 231.30
异戊......
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