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| 标准编号 | SN/T 4876.7-2019 (SN/T4876.7-2019) | | 中文名称 | DNA条形码方法 第7部分：一品红亚属 | | 英文名称 | (DNA barcode method Part 7: Poinsettia subgenus) | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B16 | | 国际标准分类 | | | 字数估计 | 12,132 | | 发布日期 | 2019-09-03 | | 实施日期 | 2020-03-01 | | 标准依据 | 海关总署公告2019年第142号 | | 发布机构 | 海关总署 | SN/T 4876.7-2019: DNA条形码方法 第7部分：一品红亚属
SN/T 4876.7-2019 英文名称: (DNA barcode method Part 7: Poinsettia subgenus)
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN／T４８７６．７-２０１９
DNA条形码方法 第７部分：一品红亚属
中华人民共和国海关总署 发 布
前言
本部分按照GB/T １．１-２００９给出的规则起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布
机构不承担识别这些专利的责任。
本部分由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本部分起草单位：宁波检验检疫科学技术研究院，中华人民共和国南京海关动植物与食品检测中
心，中华人民共和国上海海关动植物与食品检验检疫技术中心，中华人民共和国广州海关，中国检验检
疫科学研究院，中华人民共和国福州海关，中华人民共和国青岛海关。
本部分起草人：徐瑛，伏建国，印丽萍，张吉红，张慧丽，傅艺宁，吴海荣，范晓红，于文涛，宋涛。
SN／T４８７６．７-２０１９
SN/T 4876《DNA条形码方法》分为7个部分：
- - 第 1 部 分 ： 检 疫 性 乳 白 蚁 ；
- - 第 2 部 分 ： 检 疫 性 断 眼 天 牛 ；
- - 第 3 部 分 ： 检 疫 性 卷 蛾 ；
- - 第 4 部 分 ： 检 疫 性 高 粱 属 ；
- - 第 5 部 分 ： 曼 陀 罗 属 ；
- - 第 6 部 分 ： 瘤 背 豆 象 属 ；
- - 第 7 部 分 ： 一 品 红 亚 属 。
本 部 分 为 SN/T 4876的 第7部 分 。
DNA条形码方法 第７部分：一品红亚属
１ 范围
本部分规定了大戟属一品红亚属常见种的ＤＮＡ条形码检测方法。
本部分适用于大戟属一品红亚属常见种的ＤＮＡ条形码的测定、结果的比对分析与判定。
２ 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本
文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T ３２１４２ 齿裂大戟检疫鉴定方法
４ 一品红亚属基本信息
大戟属是被子植物中特大属之一，约２０００种，遍布世界各地，其中以非洲和中南美洲较多；我国检
Ｍａｙｆｉｅｌｄ（１９９７）对大戟属一品红亚属的分类处理，该亚属在全球约２４种，大部分为局部分布，有的甚至
戟、戴维大戟和白苞猩猩草为有害杂草，一品红和猩猩草为园林植物。近似种信息详见GB/T ３２１４２。
５ 方法原理
鉴定。
６ 仪器设备和主要试剂
６．１ 仪器设备与用具
ＰＣＲ仪、电子天平（感量０．００１ｇ）、冷冻混合研磨仪、电泳仪、凝胶成像系统、高速冷冻离心机、解剖
镜、涡旋振荡器、冰箱、水浴锅、测序仪、高压灭菌锅、可调式微量移液器（２μＬ、１０μＬ、２０μＬ、１００μＬ、
２００μＬ，１０００μＬ）及相应吸头、离心管、ＰＣＲ管等。
６．２ 主要试剂
除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。
植物基因组提取试剂盒、超纯水、ＤＮＡＭａｒｋｅｒ、琼脂糖、核酸凝胶染料、液氮、脱氧核糖核苷三磷酸
（ｄＮＴＰｓ）、Ｔａｑ酶、１０×ＰＣＲ缓冲液、１０×加样缓冲液，５０×ＴＡＥ缓冲液、引物（见附录Ｂ．１）。ＣＴＡＢ法
提取试剂（参见附录Ａ．１）。
７ 筛查鉴定方法
７．１ 样品的处理
样品鉴定见GB/T ３２１４２。将需要提取ＤＮＡ的植物材料（种子为１粒-２粒，硅胶干燥的叶片为
１０ｍｇ），放入２ｍＬ圆底离心管中，每个管内加２粒钢珠，加液氮后使用冷冻混合研磨仪研磨３ｍｉｎ
（３０次／秒）。
７．２ DNA制备
使用商品化的植物基因组提取试剂盒或采用改良的ＣＴＡＢ法提取植物基因组总ＤＮＡ。改良的
ＣＴＡＢ法方法参见附录Ａ．２。
７．３ DNA条形码基因片段扩增
条件见附录Ｂ。
７．４ PCR产物的检测
７．５ 测序与序列处理
取剩余的ＰＣＲ扩增产物４５μＬ，经１．５％琼脂糖凝胶电泳分离，目的片段使用ＤＮＡ产物纯化试剂盒纯化并测序。测序引物与ＰＣＲ扩增引物相同。
测序结果利用序列拼接软件进行拼接编辑，对比峰图，判断序列方向，去除测序引物序列，两端测序
质量Ｑ值＜２０的序列去除。
８ 结果判定
８．１ 中国检疫性有害生物DNA条形码鉴定系统判定
登录中国检疫性有害生物ＤＮＡ条形码鉴定系统（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｑｂｏｌ．ｏｒｇ．ｃｎ），点击“物种识别”导航
条，进入物种识别页面。在鉴定框内输入ＦＡＳＴＡ格式 （或纯文本格式）序列后，点击“提交鉴定”，系统
进行ＢＬＡＳＴ后，自动生成鉴定结果（参见附录Ｃ）。当相似度最高的１０条序列为相同物种，最大相似
辅以其他鉴定方法。
８．２ 植物有害生物检疫鉴定系统判定
登陆植物有害生物检疫鉴定系统（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｘｏｔｉｃｏｒｇａｎｉｓｍ．ｃｏｍ），使用基因条码分析软件对查
询序列进行分析比对，对符合该类群鉴定特征的且相似度为１００％的物种判定为该未知种。ＩＴＳ２和
物有害生物检疫鉴定系统”操作方法参见附录Ｄ。
８．３ 国际通用数据库判定
登录ＧｅｎＢａｎｋ数据库ＢＬＡＳＴ鉴定系统（ｈｔｔｐ：／／ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉ）对获得的ＩＴＳ２
该物种。齿裂大戟及常见近似种基因序列信息见参......
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