路径: 主页 > GB > 第142页 > GB 29684-2013 | 标准编号 | GB 29684-2013 (GB29684-2013) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 水产品中红霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 | | 英文名称 | Determination of Erythromycin residues in aquatic products by Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometric method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | C53 | | 国际标准分类 | 67.020 | | 字数估计 | 11,163 | | 引用标准 | GB/T 6682; GB/T 1.1-2000; SC/T 3016 | | 采用标准 | GB/T 6682; GB/T 1.1-2000; SC/T 3016 | | 标准依据 | 农业部公告第1927号 | | 发布机构 | 中华人民共和国农业部、中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | | 范围 | 本标准规定了水产品中红霉素残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于水产品可食性组织中红霉素残留量的检测。 | GB 29684-2013
Determination of Erythromycin residues in aquatic products by Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometric method
中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准
水产品中红霉素残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
2013-09-16发布
2014-01-01实施
中 华 人 民 共 和 国 农 业 部
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布
食品安全国家标准
水产品中红霉素残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
1 范围
本标准规定了水产品中红霉素残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。
本标准适用于水产品可食性组织中红霉素残留量的检测。
2 规范性引用文件
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GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
SC/T 3016 水产品抽样方法
3 原理
试料中残留的红霉素,用乙腈提取,正己烷除脂,HLB柱净化,液相色谱-串联质谱测定,内标法
定量。
4 试剂和材料
以下所用试剂,除特别注明外均为分析纯试剂;水为符合GB/T 6682规定的一级水。
4.1 红霉素标准品:含量≥97%。
4.2 红霉素同位素内标物标准品:红霉素同位素(erythromycinA,N,N-Dimethyl-13C2)含量≥90%。
4.3 乙腈:色谱纯。
4.4 正己烷:色谱纯。
4.5 甲醇:色谱纯。
4.6 乙酸。
4.7 氯化钠。
4.8 十二水磷酸氢二钠。
4.9 磷酸。
4.10 HLB固相萃取柱:200mg/6mL,或相当者。
4.11 0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液:取十二水磷酸氢二钠17.92g,用水溶解并稀释至500mL,用磷酸调
pH值至8.0,现配现用。
4.12 40%甲醇溶液:取甲醇40mL,用水溶解并稀释至100mL。
4.13 30%甲醇溶液:取甲醇30mL,用水溶解并稀释至100mL。
4.14 0.01‰乙酸水溶液:取乙酸10μL,用水溶解并稀释至1000mL。
4.15 100μg/mL红霉素标准贮备液:精密称取红霉素标准品10mg,于100mL量瓶中,用甲醇溶解并
稀释至刻度,配制成浓度为100μg/mL的红霉素标准贮备液。-18℃以下避光保存,有效期6个月。
4.16 5μg/mL红霉素标准工作液:精密量取100μg/mL红霉素标准贮备液500μL,于10mL量瓶
中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为5μg/mL的红霉素标准工作液。-18℃以下避光保存,有效期
3个月。
4.17 100μg/mL红霉素同位素内标物标准贮备液:精密称取红霉素同位素内标物标准品10mg,于
100mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,配制成浓度为100μg/mL红霉素同位素内标物标准贮备
液。-18℃以下避光保存,有效期6个月。
4.18 200ng/mL红霉素同位素内标物标准工作液:精密量取100μg/mL红霉素同位素内标物标准贮
备液200μL,于100mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为200ng/mL的红霉素同位素内标物
标准工作液。-18℃以下避光保存,有效期3个月。
5 仪器和设备
5.1 液相色谱-串联质谱仪:配电喷雾离子源。
5.2 分析天平:感量0.00001g。
5.3 天平:感量0.01g。
5.4 振荡器。
5.5 均质机。
5.6 离心机。
5.7 酸度计。
5.8 旋转蒸发仪。
5.9 茄形瓶:100mL。
5.10 离心管:50mL。
5.11 滤膜:0.22μm。
6 试料的制备与保存
6.1 试料的制备
取水产品空白或供试可食性组织,绞碎,并使均质。
---取均质后的供试样品,作为供试试料。
---取均质后的空白样品,作为空白试料。
---取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料。
6.2 试料的保存
-20℃以下保存,保存期3个月。
7 测定步骤
7.1 提取
称取试料5g±0.05g,于50mL离心管中,加200ng/mL红霉素同位素内标物标准工作液50μL,
加乙腈15mL,立即搅拌使其分散,超声5min,振荡5min,4000r/min离心10min,取上清液,于另一
离心管中,残渣中加乙腈5mL,重复提取一次,合并两次上清液,加氯化钠2g和正己烷15mL,振荡
5min,4000r/min离心10min,弃上层正己烷液,取下层液,于100mL茄形瓶中,于40℃旋转蒸发至
干,用磷酸盐缓冲溶液5mL,溶解残余物,加正己烷5mL,混合1min,转至离心管中,6000r/min离心
5min,弃正己烷层,再加正己烷5mL,重复操作一次,取下层溶液,备用。
7.2 净化
HLB柱依次用甲醇5mL、水5mL和磷酸盐缓冲溶液5mL活化,取备用液过柱,用磷酸盐缓冲液
5mL洗涤离心管,洗涤液过柱,流干,依次用水5mL和40%甲醇溶液5mL淋洗,抽干,用甲醇8mL
洗脱,收集洗脱液,于茄形瓶中,于40℃旋转蒸发至干,用30%甲醇溶液1.0mL溶解残余物,滤膜过
滤,供液相色谱-串联质谱测定。
7.3 标准曲线的制备
精密量取5μg/mL红霉素标准工作液和200ng/mL红霉素同位素内标物标准工作液适量,用
30%甲醇溶液溶解并稀释,配制成红霉素同位素内标物浓度为10ng/mL以及红霉素浓度为1、5、10、
25、50、100和500ng/mL的系列标准溶液,供液相色谱-串联质谱测定。以特征离子质量色谱峰面积为
纵坐标,标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
7.4 测定
7.4.1 液相色谱条件
7.4.1.1 色谱柱:C18(150mm×2.1mm,粒径5μm),或相当者。
7.4.1.2 流动相:A:甲醇,B:0.01‰乙酸水溶液。
7.4.1.3 梯度洗脱:0.0min~1.0min,30%A;1.01min~7min,95%A;7.01min~17min;30%A。
7.4.1.4 流速:0.3mL/min。
7.4.1.5 柱温:25℃。
7.4.1.6 进样量:25μL。
7.4.2 质谱条件
7.4.2.1 离子源:电喷雾离子源。
7.4.2.2 扫描方式:正离子扫描。
7.4.2.3 检测方式:多反应监测。
7.4.2.4 喷雾电压:4700V。
7.4.2.5 离子传输毛细管温度:300℃。
7.4.2.6 源内碰撞诱导解离电压:8V。
7.4.2.7 雾化气流速:12.3L/h。
7.4.2.8 辅助气流速:1.7L/h。
7.4.2.9 定性、定量离子对和碰撞能量见表1。
表1 定性、定量离子对和碰撞能量
目标化合物
定性离子对
m/z
定量离子对
m/z
碰撞能量
eV
红霉素 734.4 >157.9
734.4 >576.0
734.4 >157.9
红霉素同位
素内标物 736.5 >159.9 736.5 >159.9 30
7.4.3 测定法
7.4.3.1 定性测定
通过试样色谱图的保留时间与相应标准品的保留时间、色谱峰的特征离子与相应浓度标准溶液色
谱峰的特征离子相对照定性。试样与标准品保留时间的相对偏差不大于5%;试样特征离子的相对丰
度与浓度相当标准溶液的相对丰度一致,相对丰度偏差不超过±20%,则可判断试样中存在相应的被
测物。
7.4.3.2 定量测定
取试样溶液和标准溶液,按外标法,以峰面积定量,标准溶液及试样溶液中的红霉素响应值均应在
仪器检测的线性范围内。在上述色谱-质谱条件下,红霉素标准溶液和空白添加试样溶液中特征离子质
量色谱图见附录A。
7.5 空白试验
除不加试料外,采用完全相同的步骤进行平行操作。
8 结果计算和表述
试料中对红霉素的残留量按式(1)计算:
X=
c×V
(1)
式中:
X ---供试试料中红霉素的残留量,单位为微克每千克(μg/kg);
c ---试样溶液中红霉素的浓度,单位为纳克每毫升(ng/mL);
V ---溶解残余物所用体积,单位为毫升(mL);
m ---供试试料质量,单位为克(g)。
注:计算结果需扣除空白值。测定结果用两次平行测定的算术平均值表示,保留三位有效数字。
9 检测方法灵敏度、准确度和精密度
9.1 灵敏度
本方法的检测限为0.5μg/kg,定量限为1μg/kg。
9.2 准确度
本方法在1μg/kg~400μg/kg添加浓度水平上的回收率为70%~120%。
9.3 精密度
本方法的批内相对标准偏差≤15%,批间相对标准偏差≤15%。
附 录 A
特征离子质量色谱图
说明:
1---红霉素特征离子质量色谱图(734.4 >575.9);
2---红霉素特征......
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