路径: 主页 > GB > 第142页 > GB 29682-2013 | 标准编号 | GB 29682-2013 (GB29682-2013) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 水产品中青霉素类药物多残留的测定 高效液相色谱法 | | 英文名称 | Determination of Penicillin residues in aquatic products by High Performance Liquid Chromatographic method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | C53 | | 国际标准分类 | 67.020 | | 字数估计 | 10,167 | | 引用标准 | GB/T 6682; GB/T 1.1-2000 | | 采用标准 | GB/T 6682; GB/T 1.1-2000 | | 标准依据 | 农业部公告第1927号 | | 发布机构 | 中华人民共和国农业部、中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | | 范围 | 本标准规定了水产品中4种青霉素类药物残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。本标准适用于鱼可食性组织中青霉素G、苯唑西林、双氯青霉素和乙氧萘青霉素单个或多个药物残留量的检测。 | GB 29682-2013: 食品安全国家标准 水产品中青霉素类药物多残留的测定 高效液相色谱法
GB 29682-2013 英文名称: Determination of Penicillin residues in aquatic products by High Performance Liquid Chromatographic method
中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准
水产品中青霉素类药物多残留的测定
高效液相色谱法
1 范围
本标准规定了水产品中4种青霉素类药物残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。
本标准适用于鱼可食性组织中青霉素G、苯唑西林、双氯青霉素和乙氧萘青霉素单个或多个药物残留量的检测。
2 规范性引用文件
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GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 原理
试料中残留的青霉素类药物,用乙腈提取,HLB柱净化,1,2,4-三氮唑和氯化汞溶液衍生,高效液
相色谱-紫外测定,外标法定量。
4 试剂与材料
以下所用的试剂,除特别注明外均为分析纯试剂,水应符合GB/T 6682规定的一级水。
4.1 青霉素G、苯唑西林、双氯青霉素和乙氧萘青霉素标准品:含量≥98%。
4.2 甲醇。
4.3 乙腈。
4.4 五水硫代硫酸钠。
4.5 二水磷酸二氢钠。
4.6 无水磷酸氢二钠。
4.7 硫酸铵。
4.8 氢氧化钠。
4.9 正己烷。
4.10 1,2,4-三氮唑。
4.11 氯化汞(Ⅱ)。
4.12 HLB固相萃取柱:60mg/3mL,或相当者。
4.13 流动相A:取五水硫代硫酸钠3.9g,用水溶解,再加入二水磷酸二氢钠10.2g、无水磷酸氢二钠
4.9g、硫酸铵6.8g,用水溶解,并稀释至1000mL,滤膜过滤。
4.14 氯化汞(Ⅱ)溶液:取氯化汞(Ⅱ)0.27g,用水溶解并稀释至10mL,现配现用。
4.15 5mol/L氢氧化钠溶液:取氢氧化钠20g,用水溶解并稀释至100mL。
4.16 衍生化试剂:取1,2,4-三氮唑13.78g,用水60mL溶解,加氯化汞溶液10mL,用5mol/L氢氧
化钠溶液调节pH至9.0,用水稀释到100mL。2℃~8℃避光保存,有效期3个月。
4.17 1mg/mL青霉素类药物标准贮备液:精密称取青霉素G、苯唑西林、双氯青霉素和乙氧萘青霉素
的标准品各10mg,分别于10mL量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,配制成浓度为1mg/mL的青霉素
G、苯唑西林、双氯青霉素和乙氧萘青霉素标准贮备液,分装,立刻于-20℃以下避光保存,有效期1个
月。使用时不得反复冻融。
4.18 10μg/mL青霉素G标准工作液:精密量取1mg/mL青霉素G标准贮备液1.0mL,于100mL
量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,配制成浓度为10μg/mL的青霉素G标准工作液,分装,立刻于-20℃以
下避光保存,有效期1个月。使用时不得反复冻融。
4.19 10μg/mL苯唑西林、双氯青霉素和乙氧萘青霉素混合标准工作液:精密量取1mg/mL苯唑西
林、双氯青霉素和乙氧萘青霉素标准贮备液各1.0mL,于100mL量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,配制
成浓度为10μg/mL的苯唑西林、双氯青霉素和乙氧萘青霉素混合标准工作液,分装,立刻于-20℃以
下避光保存,有效期1个月。使用时不得反复冻融。
5 仪器和设备
5.1 高效液相色谱仪:配紫外检测器。
5.2 分析天平:感量0.00001g。
5.3 天平:感量0.01g。
5.4 冷冻高速离心机。
5.5 恒温水浴锅。
5.6 旋涡混合器。
5.7 固相萃取装置。
5.8 组织匀浆机。
5.9 氮气吹干装置。
5.10 离心管:50mL。
5.11 滤膜:0.45μm。
6 试料的制备与保存
6.1 试料的制备
鱼去鳞、去皮,沿背部取肌肉组织,或取鱼肌肉+皮组织,绞碎,并使均质。
---取均质后的供试样品,作为供试试料。
---取均质后的空白样品,作为空白试料。
---取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料。
6.2 试料的保存-20℃以下保存。
7 测定步骤
7.1 标准曲线的制备
分别精密量取10μg/mL青霉素G标准工作液及10μg/mL苯唑西林、双氯青霉素和乙氧萘青霉素混
合标准工作液适量,用流动相稀释,配制成青霉素G浓度为20、50、100、200、400、800和1600μg/L,苯唑西
林、双氯青霉素和乙氧萘青霉素浓度为100、200、400、800、1600、3200和6400μg/L的系列青霉素类药物
混合标准溶液,各取500μL,按衍生化步骤操作,供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标,对应的标
准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
7.2 提取
称取试料5g±0.05g,于50mL离心管中,加乙腈15mL,混匀,加正己烷5mL,旋涡混匀,
6000r/min离心15min,弃正己烷层液,取下层液,于另一离心管中。残渣中再加乙腈10mL、
正己烷5mL,旋涡混匀,6000r/min离心15min,弃正己烷层液,合并两次下层液,于40℃水浴旋转蒸
干,用水5mL溶解残余物,备用。
7.3 净化
HLB柱依次用甲醇3mL和水3mL活化,取备用液过柱,用水1mL淋洗,乙腈3mL洗脱,收集
洗脱液,于45℃~50℃水浴氮气吹干。用流动相1.0mL溶解残余物,旋涡混匀,备用。
7.4 衍生化
准确量取备用液500μL,于1.5mL聚丙烯离心管中,加衍生化试剂500μL,旋涡混匀,于65℃水
浴反应10min,快速冰浴冷却,于4℃10000r/min离心10min,取上清液,供高效液相色谱测定。
7.5 测定
7.5.1 色谱条件
7.5.1.1 色谱柱:C18(250mm×4.6mm,粒径5μm),或相当者。
7.5.1.2 流动相:流动相A+乙腈(65+35,体积比)。
7.5.1.3 流速:1mL/min。
7.5.1.4 紫外检测波长:325nm。
7.5.1.5 柱温:30℃。
7.5.1.6 进样量:50μL。
7.5.2 测定法
取试样溶液和相应的标准溶液,作单点或多点校准,按外标法,以峰面积计算。标准溶液及试样溶
液中青霉素类药物响应值应在仪器检测的线性范围之内。在上述色谱条件下,标准溶液和空白添加试
样溶液的高效液相色谱图见附录A。
7.6 空白试验
除不加试料外,采用完全相同的步骤进行平行操作。
8 结果计算和表述
9 检验......
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