路径: 主页 > GB > 第29页 > GB 31657.2-2021 | 标准编号 | GB 31657.2-2021 (GB31657.2-2021) | | 中文名称 | | | 英文名称 | (National Food Safety Standard Determination of Multiple Residues of Quinolones in Bee Products Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry) | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X04 | | 字数估计 | 11,166 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31657.2-2021: 食品安全国家标准 蜂产品中喹诺酮类药物多残留的测定 液相色谱-串联质谱法
食品安全国家标准
蜂产品中喹诺酮类药物多残留的测定
液相色谱-串联质谱法
中华人民共和国国家标准
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
代替 GB/T 20757-2006、GB/T 23411-2009、GB/T 23412-2009
1 范围
本文件规定了蜂蜜和蜂王浆中喹诺酮类药物残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱检测方法。本文件适用于蜂蜜和蜂王浆中噁喹酸、萘啶酸、氟甲喹、西诺沙星、二氟沙星、沙拉沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、洛美沙星、培氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、依诺沙星、达氟沙星、马波沙星、氟罗沙星、加替沙星、奥比沙星、吡哌酸和司帕沙星单个或多个药物残留量的测定。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3术语与定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 原理
试料中残留的喹诺酮类药物经磷酸盐缓冲液提取，HLB固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱测定，基质匹配标准曲线校正，外标法定量。
5试剂和材料
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。
5.1 试剂
5.1.1 乙腈(CH₃CN):色谱纯。
5.1.2甲醇(CH₃OH):色谱纯。
5.1.3甲酸(CHOOH):色谱纯。
5.1.4乙酸乙酯(C₄H₈O₂)。
5.1.5磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O)。
5.1.6磷酸二氢钠(NaH₂PO₄·2H₂O)。
5.1.7磷酸(H₃PO₄)。
5.2 溶液配制
5.2.1 磷酸盐缓冲液：取磷酸氢二钠7.16 g、磷酸二氢钠3.12 g,加水800 mL使溶解，用磷酸调pH至
3.0±0.05,用水稀释至1000mL。
5.2.2 5%甲酸甲醇溶液：取甲酸5mL,加甲醇95mL,混匀。
5.2.30.1%甲酸溶液：取甲酸0.5mL,加水稀释至500 mL,混匀。
5.2.4 20%乙腈甲酸溶液：取乙腈20mL,加入0.1%甲酸溶液80mL,混匀。
5.3标准品
噁喹酸、氟甲喹、西诺沙星、二氟沙星、沙拉沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、洛美沙星、培氟沙星、诺氟沙星、
环丙沙星、萘啶酸、依诺沙星、达氟沙星、马波沙星、氟罗沙星、加替沙星、奥比沙星、吡哌酸和司帕沙星，含量均≥95%,具体信息见附录A。
5.4标准溶液制备
5.4.1 标准储备液(1mg/mL):取噁喹酸、氟甲喹、西诺沙星、二氟沙星、沙拉沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、洛美沙星、培氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、萘啶酸、依诺沙星、达氟沙星、马波沙星、氟罗沙星、加替沙星、奥比沙星、吡哌酸和司帕沙星对照品各10mg,精密称定，用0.5 mL氨水溶解后，用甲醇稀释定容至10mL容量瓶，配制成浓度为1mg/mL的标准储备液。-18℃避光保存，有效期6个月。
5.4.2混合标准工作液(10μg/mL):准确量取上述标准储备液各1mL,于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度为10μg/mL的混合标准工作液。4℃避光保存，有效期1个月。
5.5材料
5.5.1 HLB固相萃取柱?:200 mg/6 mL,或相当者。
5.5.2微孔尼龙滤膜：0.22μm。
5.5.3玻璃纤维滤纸：1.6μm。
6仪器和设备
6.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。
6.2分析天平：感量0.00001g和0.01g。
6.3 涡旋混合器。
6.4 涡旋振荡器。
6.5高速冷冻离心机：转速可达20000 r/min。
6.6 超声波清洗机。
6.7 固相萃取装置。
6.8氮吹仪，
7试料的制备与保存
7.1 试料的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试蜂产品，将其搅拌均匀。对有结晶的蜂蜜样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中解晶，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。制备好的试料置于样品瓶中，密封，并做上标记。
a) 取均质后的供试样品，作为供试试料；
b) 取均质后的空白样品，作为空白试料；
c) 取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。
7.2试料的保存
蜂蜜样品于室温下避光保存；蜂王浆样品于-18℃下保存。
8测定步骤
8.1 提取
8.1.1 蜂蜜
取试料2g(准确至±0.02g),于50mL聚丙烯离心管中，加磷酸盐缓冲液20mL,涡旋1 min,振荡10 min,10000 r/min离心5 min,取上清液，备用。
1)此处列出HLB固相萃取柱仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的固相萃取柱。
8.1.2蜂王浆
取试料2g(准确至±0.02g),于50mL聚丙烯离心管中，加磷酸盐缓冲液10mL,涡旋1 min,振荡10 min,4℃下10000 r/min离心10 min,移取上清液至另一离心管。残渣加磷酸盐缓冲液10 mL,重复提取，合并2次上清液，玻璃纤维滤纸过滤，备用。
8.2 净化
HLB固相萃取柱分别用甲醇10mL、水10mL活化，备用液过柱，用水5mL淋洗，抽干，依次用5%甲酸甲醇和乙酸乙酯各4mL洗脱，抽干，收集洗脱液，40℃氮气吹干。用20%乙腈甲酸水溶液1.00mL溶解残余物，超声1min,涡旋混匀(蜂王浆样品溶液需在4℃下20000 r/min离心10 min),上清液过微孔尼龙滤膜，供液相色谱-串联质谱测定。
8.3基质匹配标准曲线的制备
准确量取混合标准工作液适量，用20%乙腈甲酸水溶液稀释，配制成浓度为1ng/mL,2 ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL和50ng/mL的系列标准溶液，各取1.00mL,分别加于经提取、净化步骤处理的空白试料中，溶解残余物(蜂王浆基质匹配标准溶液需在4℃下20000 r/min离心10 min),上清液过微孔尼龙滤膜后，供液相色谱-串联质谱测定。以各药物特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制基质匹配标准曲线。求回归方程和相关系数。
8.4 测定
8.4.1 液相色谱参考条件
a) 色谱柱：Cis柱(50mm×2.1mm,1.7μm),或相当者；
b) 柱温：35℃;
c 进样量：10L;
d) 流速：0.3mL/min;
e)流动相：A为0.1%甲酸水溶液，B为甲醇，梯度洗脱条件见表1。
8.4.2质谱参考条件
a) 离子源：电喷雾离子源；
b) 扫描方式：正离子扫描；
c) 检测方式：多反应监测；
d) 毛细管电压：1.0kV;
e) 源温：150℃;
f) 雾化温度：500℃;
g) 锥孔气流速：50 L/h;
h)雾化气流速：1000 L/h;
i) 测试药物保留时间、定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量参考值见表2。
在同样测试条件下，试料溶液中喹诺酮类药物峰的保留时间与基质匹配标准溶液相应峰的保留时间
相对偏差在±2.5%以内，且检测到的相对离子丰度，应当与浓度相当的基质匹配标准溶液相对丰度一致。其允许偏差应符合表3的要求。
8.4.3.2 定量测定
取试料溶液和相应的基质匹配标准溶液，作单点或多点校准，以特征离子质量色谱峰面积定量，按外标法计算。基质匹配标准工作液及试料溶液中的喹诺酮类药物响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱-质谱条件下，基质匹配标准溶液特征离子质量色谱图见附录B。
8.5 空白试验
取空白试料，除不加标准溶液外，采用相同的测定步骤进行平......
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