路径: 主页 > GB > 第29页 > GB 31658.1-2021 | 标准编号 | GB 31658.1-2021 (GB31658.1-2021) | | 中文名称 | | | 英文名称 | National food safety standard - Determination of ceftiofur residues in animal tissues by high performance liquid chromatography method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X04 | | 字数估计 | 12,141 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31658.1-2021: 食品安全国家标准 动物性食品中头孢噻呋残留量的测定 高效液相色谱法
食品安全国家标准
动物性食品中头孢噻呋残留量的测定
高效液相色谱法
中华人民共和国国家标准
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前言
本文件按照GB/T １１-２０２０«标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定
起草.
食品安全国家标准
动物性食品中头孢噻呋残留量的测定 高效液相色谱法
方法一 动物性可食组织中头孢噻呋残留量测定
高效液相色谱法
１ 范围
本文件规定了动物性可食组织中头孢噻呋残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法.
本文件适用于猪、牛肌肉、脂肪、肝脏和肾脏中头孢噻呋残留量的测定.
２ 规范性应用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文
件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于
本文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试料中残留的头孢噻呋,经二硫赤藓醇(DTE)作用,使头孢噻呋及去呋喃甲酰头孢噻呋(DFC)有关
代谢物从蛋白或含硫化合物中分离,与碘乙酰胺反应,生成稳定的乙酰胺衍生物(DCA),经提取、纯化、净
化,高效液相色谱测定,外标法定量.
５ 试剂和材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５１ 试剂
５１１ 乙腈(CH３CN):色谱纯.
５１２ 甲醇(CH３OH).
５１３ 二硫赤藓醇(C４H１０O２S２,DTE).
５１４ 碘乙酰胺(C２H４INO).
５１５ 无水氯化钙(CaCl２).
５１６ 冰醋酸(CH３COOH).
５１７ 磷酸(H３PO４):８５％.
５１８ 氯化钾(KCl).
５１９ 氢氧化钾(NaOH).
５１１０ 磷酸二氢钾(KH２PO４).
５１１１ 四硼酸钠(Na２B４O７１０H２O).
５１１２ 氯化钠(NaCl).
５１１３ 氢氧化钠(NaOH).
５１１４ 三氟乙酸(CF３COOH,TFA).
５２ 标准品
或相当者.
５３ 溶液配制
５３１ 硼酸缓冲液(００５mol/L):取四硼酸钠１９g、氯化钾３７g,加水使溶解并稀释至１０００mL.
５３２ 磷酸盐缓冲液(００２５mol/L):取磷酸二氢钾３４g,加水溶解并稀释至１０００mL,用４５％氢氧化
钾溶液调pH至７０.
５３３ 提取液(０４％DTE):取DTE１g,加硼酸缓冲液适量使溶解并稀释至２５０mL,现用现配.
５３４ 碘乙酰胺溶液(１４％):取碘乙酰胺７g溶于５０mL磷酸盐缓冲液中,现用现配.
５３５ 氢氧化钠溶液(００１mol/L):取氢氧化钠０４g,加水使溶解并稀释至１０００mL.
５３６ 氯化钠溶液(０１mol/L):取氯化钠５９g,加水溶解并稀释至１０００mL.
５３７ 氯化钙溶液(０１mol/L):取无水氯化钙１１１g,加水溶解并稀释至１０００mL.
５３８ 磷酸溶液(２５％):取磷酸２５mL,加水溶解并稀释至１００mL.
５３９ 醋酸溶液(５％):取冰醋酸５mL,加水溶解并稀释至１００mL.
５３１０ C１８洗脱液:乙腈Ｇ水(１５∶８５)
５３１１ SAX预洗液:甲醇Ｇ氯化钠溶液(２５∶７５).
５３１２ SAX洗脱液:乙腈Ｇ醋酸溶液(５∶９５).
５３１３ SCX预洗液:甲醇Ｇ氯化钙溶液(２５∶７５).
５３１４ SCX洗脱液:乙腈Ｇ氯化钠溶液(５∶９５).
５３１５ 流动相:
A(０１％TFA水溶液):取１mL三氟乙酸,加水至１０００mL.
B(０１％TFA乙腈溶液):取１mL三氟乙酸,加乙腈至１０００mL.
５４ 标准溶液制备
５４１ 标准储备液(１００μg/mL):取盐酸头孢噻呋标准品约１１mg,精密称定,加甲醇使溶解并稀释定容
至１００mL容量瓶,摇匀,即得.-１８℃保存,有效期６个月.
５４２ 标准工作液(１０μg/mL):精密量取标准储备液５mL于５０mL容量瓶,加磷酸盐缓冲液至刻度,
摇匀,即得.２℃~８℃保存,有效期１个月.
５５ 材料
５５１ C１８固相萃取柱:１g/６mL,或相当者.
５５２ SAX固相萃取柱:５００mg/１０mL,或相当者.
５５３ SCX固相萃取柱:１００mg/１０mL,或相当者.
６ 仪器和设备
６１ 高效液相色谱仪:配紫外检测器.
６２ 分析天平:感量０００００１g和００１g.
６３ 恒温水浴振荡器.
６４ 匀浆机.
６５ 涡旋混合器.
６６ 冷冻离心机
６７ 固相萃取装置.
６８ pH计.
６９ 离心管:５０mL.
７ 试样的制备与保存
７１ 试样的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎,并使均质.
a) 取均质后的供试样品,作为供试试料;
b) 取均质后的空白样品,作为空白试料;
c) 取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料.
７２ 试样的保存
-１８℃以下保存.
８ 测定步骤
８１ 提取
取试料２g(准确至±００２g),加提取液３００mL,中速振荡５min,４０００r/min离心５min.取
１５０mL于另一５０mL离心管,２０r/min~３０r/min转速、５０℃恒温水浴振摇１５min,备用.
８２ 衍生
在上述备用液加碘乙酰胺溶液３mL,混匀,室温下放置３０min.４℃、１００００r/min离心２０min.取
上清液,备用.
８３ 净化
８３１ 取C１８固相萃取柱,依次用甲醇４mL、磷酸盐缓冲液５mL预洗柱.取８２中衍生后备用液过柱.
依次用磷酸缓冲液５mL、氢氧化钠溶液３mL洗柱,挤干.加入C１８洗脱液３mL,洗脱,收集洗脱液.加
水１５mL稀释至总体积为１８mL,混匀,备用.
８３２ 取SAX固相萃取柱,依次用甲醇、SAX预洗液和水各２mL预洗柱.取８３１备用液过柱,加水
１mL洗柱,挤干.加SAX洗脱液３mL,洗脱,收集洗脱液.加水１０mL使总体积为１３mL,混匀,备用.
注:脂肪组织稀释提取液经SAX固相萃取柱净化后,用１mL水洗,挤干.加SAX固相萃取柱洗脱液２０mL,收集洗
脱液,混匀,供高效液相色谱进行分析.
８３３ 取SCX固相萃取柱,依次用甲醇１mL、SCX预洗液２mL和水２mL预洗柱.取８３２备用液,
过柱,用水１mL淋洗,挤干或真空抽干.加SCX洗脱液２０mL,洗脱,挤干,收集洗脱液,供高效液相色
谱测定.
８４ 标准曲线的制备
精密量取标准储备液适量,用磷酸盐缓冲液稀释制成浓度为０１μg/mL、０２μg/mL、０４μg/mL、
２０μg/mL、１００μg/mL和２００μg/mL的溶液,分别精密量取０５mL,按衍生及净化步骤同法处理制
成头孢噻呋浓度为２５ng/mL、５０ng/mL、１００ng/mL、５００ng/mL、２５００ng/mL和５０００ng/mL的标准
溶液,供高效液相色谱测定.以峰面积为纵坐标、对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线.求回归
方程和相关系数.
注:用于脂肪组织检测的标准曲线的制备:经过SAX固相萃取柱净化后,加入水１mL洗柱,挤干.加SAX洗脱液
２０mL,收集洗脱液,混匀,供高效液相色谱测定.
８５ 测定
８５１ 色谱条件
a) 色谱柱:C１８柱(２５０mm×４６mm,５μm),或相当者;
b) 检测波长:２６６nm;
c) 柱温:３０℃;
d) 进样量:４０μL;
e) 流速:１０mL/min;
f) 流动相:A为０１％三氟乙酸水溶液,B为０１％三氟乙酸乙腈溶液;
GB ３１６５８１-２０２１
g) 流......
|