[PDF] GB 4789.38-2012 - 中国标准 英文版

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GB 4789.38-2012 70 GB 4789.38-2012 9秒内 食品安全国家标准　食品微生物学检验　大肠埃希氏菌计数
   
基本信息
标准编号 GB 4789.38-2012 (GB4789.38-2012)
中文名称 食品安全国家标准　食品微生物学检验　大肠埃希氏菌计数
英文名称 National Food Safety Standard -- Microbiological Examination of Food Hygiene -- Enumeration of Escherichia Coli
行业 国家标准
中标分类 C53
国际标准分类 07.100.30
字数估计 17,195
旧标准 (被替代) GB/T 4789.38-2008
标准依据 卫生部公告2012年第9号;
发布机构 中华人民共和国卫生部
范围 本标准规定了食品中大肠埃希氏菌(Escherichia coli)计数的方法。本标准适用于食品中大肠埃希氏菌的计数, 其中大肠埃希氏菌平板计数法(第二法)不适用于贝类产品。

GB 4789.38-2012: 食品安全国家标准　食品微生物学检验　大肠埃希氏菌计数 GB 4789.38-2012 英文名称: National Food Safety Standard -- Microbiological Examination of Food Hygiene -- Enumeration of Escherichia Coli 中华人民共和国国家标准 1 范围 本标准规定了食品中大肠埃希氏菌（Escherichia coli）计数的方法。 本标准适用于食品中大肠埃希氏菌的计数，其中大肠埃希氏菌平板计数法（第二法）不适用于贝类产品。。 5 大肠埃希氏菌 MPN 计数（第一法） 5.1 检验程序 大肠埃希氏菌MPN计数的检验程序见图1。 5.2 操作步骤 5.2.1 样品的稀释 5.2.1.1 固体和半固体样品：称取 25 g样品，放入盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内，8 000 r/min～10 000 r/min 均质 1 min～2 min，制成 1:10样品匀液，或放入盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液的无菌均质 袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min制成 1:10的样品匀液。 5.2.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶（瓶内预置适 当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10的样品匀液。 5.2.1.3 样品匀液的 pH值应在 6.5～7.5之间，必要时分别用 1 mol/L NaOH 或 1 mol/L HCl 调节。 5.2.1.4 用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10样品匀液 1 mL，沿管壁缓缓注入 9 mL 磷酸盐缓冲液 的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1支 1 mL 无菌吸管或吸头反复 吹打，使其混合均匀，制成 1:100的样品匀液。 5.2.1.5 根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1 次，换用1支1 mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min。 5.2.2 初发酵试验 每个样品，选择 3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种 3管 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种 1 mL（如接种量超过 1 mL，则用双料 LST肉汤），36℃±1 ℃培养 24 h±2 h，观察小倒管内是否有气泡产生，24 h±2 h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养 48 h±2 h。产气者进行复发酵试验。如所有 LST 肉汤管均未产气，即可报告大肠埃希氏菌MPN结果。 5.2.3 复发酵试验 用接种环从产气的 LST 肉汤管中分别取培养物 1环，移种于已提前预温至 45℃的 EC 肉汤管中，放 入带盖的 44.5℃±0.2℃水浴箱内。水浴的水面应高于肉汤培养基液面，培养 24 h±2 h，检查小倒管内是否 有气泡产生，如未有产气则继续培养至 48 h±2 h。记录在 24 h和 48 h内产气的 EC肉汤管数。如所有 EC 肉汤管均未产气，即可报告大肠埃希氏菌MPN 结果；如有产气者，则进行 EMB平板分离培养。 5.2.4 伊红美蓝平板分离培养 轻轻振摇各产气管，用接种环取培养物分别划线接种于 EMB 平板，36℃±1℃培养 18 h～24 h。观察 平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落。 5.2.5 营养琼脂斜面或平板培养 从每个平板上挑 5个典型菌落，如无典型菌落则挑取可疑菌落。用接种针接触菌落中心部位，移种到 营养琼脂斜面或平板上，36℃±1℃，培养 18 h～24 h。取培养物进行革兰氏染色和生化试验。 5.2.6 鉴定 取培养物进行靛基质试验、MR-VP试验和柠檬酸盐利用试验。大肠埃希氏菌与非大肠埃希氏菌的生化鉴别见表 1。 5.3 大肠埃希氏菌 MPN 计数的报告 大肠埃希氏菌为革兰氏阴性无芽胞杆菌，发酵乳糖、产酸、产气，IMViC生化试验为＋＋――或-＋ --。只要有 1个菌落鉴定为大肠埃希氏菌，其所代表的 LST 肉汤管即为大肠埃希氏菌阳性。依据 LST 肉汤阳性管数查MPN 表（见附录 B），报告每 g（mL）样品中大肠埃希氏菌MPN值。 6 大肠埃希氏菌平板计数法（第二法） 6.1 检验程序 大肠埃希氏菌平板计数法的检验程序见图2。 6.2 操作步骤 6.2.1 样品的稀释 按5.2.1进行。 6.2.2 平板计数检样 6.2.2.1 选取 2个～3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种 2个无菌平皿，每皿 1 mL。同时 取 1 mL 稀释液加入无菌平皿做空白对照。 6.2.2.2 将10 mL～15 mL 冷至45 ℃±0.5 ℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）倾注于每个平皿中。小心 旋转平皿，将培养基与样品匀液充分混匀。待琼脂凝固后，再加3 mL～4 mL VRBA-MUG覆盖平板表层。 凝固后翻转平板，36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。 6.3 平板菌落数的选择 选择菌落数在10 CFU～100 CFU之间的平板，暗室中360 nm～366 nm 波长紫外灯照射下，计数平板 上发......

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