[PDF] GB 4789.40-2010 - 中国标准 英文版
| 标准号码 | 美元 | 购买PDF | 工期 | 标准名称(英文版) |
| GB 4789.40-2010 | 399 | GB 4789.40-2010 | <=3 | 食品安全国家标准 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验 |
| 基本信息 | |
|---|---|
| 标准编号 | GB 4789.40-2010 (GB4789.40-2010) |
| 中文名称 | 食品安全国家标准 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验 |
| 英文名称 | National food safety standard -- Food microbiological examination: Enterobacter sakazakii |
| 行业 | 国家标准 |
| 中标分类 | C53 |
| 国际标准分类 | 07.100.30 |
| 字数估计 | 10,140 |
| 发布日期 | 2010-03-26 |
| 实施日期 | 2010-06-01 |
| 旧标准 (被替代) | GB/T 4789.40-2008 |
| 标准依据 | 卫通(2010)7号;国家卫生和计划生育委员会公告2016年第17号 |
| 发布机构 | 中华人民共和国卫生部 |
| 范围 | 本标准规定了食品中阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)的检验方法。本标准适用于婴幼儿配方食品, 乳和乳制品及其原料中阪崎肠杆菌的检验。 |
GB 4789.40-2010: 食品安全国家标准 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验
GB 4789.40-2010 英文名称: National food safety standard -- Food microbiological examination: Enterobacter sakazakii
中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准
食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验
1 范围
本标准规定了食品中阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）的检验方法。
本标准适用于婴幼儿配方食品、乳和乳制品及其原料中阪崎肠杆菌的检验。
5 操作步骤
5.1 前增菌和增菌
取检样 100 g（mL）加入已预热至 44 ℃装有 900 mL 缓冲蛋白胨水的锥形瓶中，用手缓缓地摇动至
充分溶解，36 ℃±1 ℃培养 18 h±2 h。移取 1 mL 转种于 10 mL mLST-Vm 肉汤，44 ℃±0.5 ℃培养 24 h±2h。
5.2 分离
5.2.1 轻轻混匀 mLST-Vm 肉汤培养物，各取增菌培养物 1 环，分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色
5.2.2 挑取 1 个～5 个可疑菌落，划线接种于 TSA 平板。25 ℃±1 ℃培养 48 h±4 h。
5.3 鉴定
自 TSA 平板上直接挑取黄色可疑菌落，进行生化鉴定。阪崎肠杆菌的主要生化特征见表 1。可选
择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。
6 结果与报告
综合菌落形态和生化特征，报告每 100 g（mL）样品中检出或未检出阪崎肠杆菌。
第二法 阪崎肠杆菌的计数
7 操作步骤
7.1 样品的稀释
7.1.1 固体和半固体样品：无菌称取样品 100 g、10 g、1 g 各三份，加入已预热至 44 ℃分别盛有 900 mL、
90 mL、9 mL BPW 中，轻轻振摇使充分溶解，制成 1:10 样品匀液，置 36 ℃±1 ℃培养 18 h±2 h。分别
移取 1 mL 转种于 10 mL mLST-Vm 肉汤，44 ℃±0.5 ℃培养 24 h±2 h。
7.1.2 液体样品：以无菌吸管分别取样品 100 mL、10 mL、1 mL 各三份，加入已预热至 44 ℃分别盛
有 900 mL、90 mL、9 mL BPW 中，轻轻振摇使充分混匀，制成 1:10 样品匀液，置 36 ℃±1 ℃培养 18h±2h。
分别移取 1 mL 转种于 10 mL mLST-Vm 肉汤，44 ℃±0.5 ℃培养 24 h±2 h。
7.2 分离、鉴定同 5.2，5.3。
8 结果与报告
综合菌落形态、生化特征，根据证实为阪崎肠杆菌的阳性管数，查 MPN 检索表，报告每 100 g（mL）
样品中阪崎肠杆菌的 MPN 值（见附录Ｂ中表 B.1）。
附录A
（规范性附录）
培养基和试剂
A.1 缓冲蛋白胨水（BPW）
A.1.2 制法
加热搅拌至溶解,调节 pH，121 ℃高压灭菌 15 min。
A.2 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素
A.2.1 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨（mLST）肉汤
A.2.1.2 制法
加热搅拌至溶解，调节 pH。分装每管 10 mL，121 ℃高压灭菌 15 min。
A.2.2 万古霉素溶液
A.2.2.2 制法
10.0 mg 万古霉素溶解于 10.0 mL 蒸馏水，过滤除菌。万古霉素溶液可以在 0 ℃～5 ℃保存 15 天。
A.2.3 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素
每 10 mL mLST 加入万古霉素溶液 0.1 mL，混合液中万古霉素的终浓度为 10 µg/ mL。
注：mLST-Vm 必须在 24 h 之内使用。
A.3 胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）
A.3.2 制法
加热搅拌至溶解，煮沸 1 min，调节 pH，121 ℃高压 15 min。
A.4 氧化酶试剂
A.4.1 成分
N,N,N',N'-四甲基对苯二胺盐酸盐 1.0 g
蒸馏水 100 mL
A.4.2 制法
少量新鲜配制，于冰箱内避光保存，在 7 d 之内使用。
A.4.3 试验方法
用玻璃棒或一次性接种针挑取单个特征性菌落，涂布在氧化酶试剂湿润的滤纸平板上。如果滤纸在
10 s 之内未变为紫红色、紫色或深蓝色，则为氧化酶试验阴性，否则即为氧化酶实验阳性。
注：实验中切勿使用镍/铬材料。
A.5 L-赖氨酸脱羧酶培养基
A.5.2 制法将各成分加热溶解，必要时调节 pH。每管分装 5 mL，121 ℃高压 15 min。
A.5.3 实验方法
挑取培养物接种于 L-赖氨酸脱羧酶培养基，刚好在液体培养基的液面下。30 ℃±1 ℃培养 24 h±2 h，
观察结果。L-赖氨酸脱羧酶试验阳性者，培养基呈紫色，阴性者为黄色。
A.6 L-鸟氨酸脱羧酶培养基
A.6.2 制法
将各成分加热溶解，必要时调节 pH。每管分装 5 mL。121 ℃高压 15 min。
A.6.3 实验方法
挑取培养物接种于 L-鸟氨酸脱羧酶培养基，刚好在液体培养基的液面下。30 ℃±1 ℃培养 24 h±2 h，
观察结果。L-鸟氨酸脱羧酶试验阳性者，培养基呈紫色，阴性者为黄色。
A.7 L-精氨酸双水解酶培养基
A.7.2 制法
将各成分加热溶解，必要时调节 pH。每管分装 5 mL。121 ℃高压 15 min。
A.7.3 实验方法
挑取培养物接种于 L-精氨酸脱羧酶培养基，刚好在液体培养基的液面下。30 ℃±1 ℃培养 24 h±2 h，
观察结果。L-精氨酸脱羧酶试验阳性者，培养基呈紫色，阴性者为黄色。
A.8 糖类发酵培养基
A.8.1 基础培养基
A.8.1.2 制法
将各成分加热溶解，必要时调节 pH。每管分装 5 mL。121 ℃高压 15 min。
A.8.2 糖类溶液（D-山梨醇、L-鼠李糖、D-蔗糖、D-蜜二糖、苦杏仁甙）
A.8.2.1 成分
糖 8.0 g
蒸馏水 100 mL
A.8.2.2 制法
分别称取 D-山梨醇、L-鼠李糖、D-蔗糖、D-蜜二糖、苦杏仁甙等糖类成分各 8 g，溶于 100 mL 蒸
馏水中，过滤除菌，制成 80 mg/mL 的糖类溶液。
A.8.3 完全培养基
A.8.3.1 成分
基础培养基 875 mL
糖类溶液 125 mL
A.8.3.2 制法
无菌操作，将每种糖类溶液加入基础培养基，混匀；分装到无菌试管中，每管 10 mL。
A.8.4 实验方法
挑取培养物接种于各种糖类发酵培养基，刚好在液体培养基的液面下。30 ℃±1 ℃培养 24 h±2 h，
观察结果。糖类发酵试验阳性者，培养基呈黄色，阴性者为红色。
A.9 西蒙氏柠檬酸盐培养基
A.9.2 制法
将各成分加热溶解，必要时调节 pH。每管分装 ......