[PDF] GB 4789.40-2010 - 中国标准 英文版

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GB 4789.40-2010 399 GB 4789.40-2010 <=3 食品安全国家标准　食品微生物学检验　阪崎肠杆菌检验
   
基本信息
标准编号 GB 4789.40-2010 (GB4789.40-2010)
中文名称 食品安全国家标准　食品微生物学检验　阪崎肠杆菌检验
英文名称 National food safety standard -- Food microbiological examination: Enterobacter sakazakii
行业 国家标准
中标分类 C53
国际标准分类 07.100.30
字数估计 10,140
发布日期 2010-03-26
实施日期 2010-06-01
旧标准 (被替代) GB/T 4789.40-2008
标准依据 卫通(2010)7号;国家卫生和计划生育委员会公告2016年第17号
发布机构 中华人民共和国卫生部
范围 本标准规定了食品中阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)的检验方法。本标准适用于婴幼儿配方食品, 乳和乳制品及其原料中阪崎肠杆菌的检验。

GB 4789.40-2010: 食品安全国家标准　食品微生物学检验　阪崎肠杆菌检验 GB 4789.40-2010 英文名称: National food safety standard -- Food microbiological examination: Enterobacter sakazakii 中华人民共和国国家标准 食品安全国家标准 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验 1 范围 本标准规定了食品中阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）的检验方法。 本标准适用于婴幼儿配方食品、乳和乳制品及其原料中阪崎肠杆菌的检验。 5 操作步骤 5.1 前增菌和增菌 取检样 100 g（mL）加入已预热至 44 ℃装有 900 mL 缓冲蛋白胨水的锥形瓶中，用手缓缓地摇动至 充分溶解，36 ℃±1 ℃培养 18 h±2 h。移取 1 mL 转种于 10 mL mLST-Vm 肉汤，44 ℃±0.5 ℃培养 24 h±2h。 5.2 分离 5.2.1 轻轻混匀 mLST-Vm 肉汤培养物，各取增菌培养物 1 环，分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色 5.2.2 挑取 1 个～5 个可疑菌落，划线接种于 TSA 平板。25 ℃±1 ℃培养 48 h±4 h。 5.3 鉴定 自 TSA 平板上直接挑取黄色可疑菌落，进行生化鉴定。阪崎肠杆菌的主要生化特征见表 1。可选 择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。 6 结果与报告 综合菌落形态和生化特征，报告每 100 g（mL）样品中检出或未检出阪崎肠杆菌。 第二法 阪崎肠杆菌的计数 7 操作步骤 7.1 样品的稀释 7.1.1 固体和半固体样品：无菌称取样品 100 g、10 g、1 g 各三份，加入已预热至 44 ℃分别盛有 900 mL、 90 mL、9 mL BPW 中，轻轻振摇使充分溶解，制成 1:10 样品匀液，置 36 ℃±1 ℃培养 18 h±2 h。分别 移取 1 mL 转种于 10 mL mLST-Vm 肉汤，44 ℃±0.5 ℃培养 24 h±2 h。 7.1.2 液体样品：以无菌吸管分别取样品 100 mL、10 mL、1 mL 各三份，加入已预热至 44 ℃分别盛 有 900 mL、90 mL、9 mL BPW 中，轻轻振摇使充分混匀，制成 1:10 样品匀液，置 36 ℃±1 ℃培养 18h±2h。 分别移取 1 mL 转种于 10 mL mLST-Vm 肉汤，44 ℃±0.5 ℃培养 24 h±2 h。 7.2 分离、鉴定同 5.2，5.3。 8 结果与报告 综合菌落形态、生化特征，根据证实为阪崎肠杆菌的阳性管数，查 MPN 检索表，报告每 100 g（mL） 样品中阪崎肠杆菌的 MPN 值（见附录Ｂ中表 B.1）。 附录A （规范性附录） 培养基和试剂 A.1 缓冲蛋白胨水（BPW） A.1.2 制法 加热搅拌至溶解,调节 pH，121 ℃高压灭菌 15 min。 A.2 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素 A.2.1 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨（mLST）肉汤 A.2.1.2 制法 加热搅拌至溶解，调节 pH。分装每管 10 mL，121 ℃高压灭菌 15 min。 A.2.2 万古霉素溶液 A.2.2.2 制法 10.0 mg 万古霉素溶解于 10.0 mL 蒸馏水，过滤除菌。万古霉素溶液可以在 0 ℃～5 ℃保存 15 天。 A.2.3 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素 每 10 mL mLST 加入万古霉素溶液 0.1 mL，混合液中万古霉素的终浓度为 10 µg/ mL。 注：mLST-Vm 必须在 24 h 之内使用。 A.3 胰蛋白胨大豆琼脂（TSA） A.3.2 制法 加热搅拌至溶解，煮沸 1 min，调节 pH，121 ℃高压 15 min。 A.4 氧化酶试剂 A.4.1 成分 N,N,N',N'-四甲基对苯二胺盐酸盐 1.0 g 蒸馏水 100 mL A.4.2 制法 少量新鲜配制，于冰箱内避光保存，在 7 d 之内使用。 A.4.3 试验方法 用玻璃棒或一次性接种针挑取单个特征性菌落，涂布在氧化酶试剂湿润的滤纸平板上。如果滤纸在 10 s 之内未变为紫红色、紫色或深蓝色，则为氧化酶试验阴性，否则即为氧化酶实验阳性。 注：实验中切勿使用镍/铬材料。 A.5 L-赖氨酸脱羧酶培养基 A.5.2 制法将各成分加热溶解，必要时调节 pH。每管分装 5 mL，121 ℃高压 15 min。 A.5.3 实验方法 挑取培养物接种于 L-赖氨酸脱羧酶培养基，刚好在液体培养基的液面下。30 ℃±1 ℃培养 24 h±2 h， 观察结果。L-赖氨酸脱羧酶试验阳性者，培养基呈紫色，阴性者为黄色。 A.6 L-鸟氨酸脱羧酶培养基 A.6.2 制法 将各成分加热溶解，必要时调节 pH。每管分装 5 mL。121 ℃高压 15 min。 A.6.3 实验方法 挑取培养物接种于 L-鸟氨酸脱羧酶培养基，刚好在液体培养基的液面下。30 ℃±1 ℃培养 24 h±2 h， 观察结果。L-鸟氨酸脱羧酶试验阳性者，培养基呈紫色，阴性者为黄色。 A.7 L-精氨酸双水解酶培养基 A.7.2 制法 将各成分加热溶解，必要时调节 pH。每管分装 5 mL。121 ℃高压 15 min。 A.7.3 实验方法 挑取培养物接种于 L-精氨酸脱羧酶培养基，刚好在液体培养基的液面下。30 ℃±1 ℃培养 24 h±2 h， 观察结果。L-精氨酸脱羧酶试验阳性者，培养基呈紫色，阴性者为黄色。 A.8 糖类发酵培养基 A.8.1 基础培养基 A.8.1.2 制法 将各成分加热溶解，必要时调节 pH。每管分装 5 mL。121 ℃高压 15 min。 A.8.2 糖类溶液（D-山梨醇、L-鼠李糖、D-蔗糖、D-蜜二糖、苦杏仁甙） A.8.2.1 成分 糖 8.0 g 蒸馏水 100 mL A.8.2.2 制法 分别称取 D-山梨醇、L-鼠李糖、D-蔗糖、D-蜜二糖、苦杏仁甙等糖类成分各 8 g，溶于 100 mL 蒸 馏水中，过滤除菌，制成 80 mg/mL 的糖类溶液。 A.8.3 完全培养基 A.8.3.1 成分 基础培养基 875 mL 糖类溶液 125 mL A.8.3.2 制法 无菌操作，将每种糖类溶液加入基础培养基，混匀；分装到无菌试管中，每管 10 mL。 A.8.4 实验方法 挑取培养物接种于各种糖类发酵培养基，刚好在液体培养基的液面下。30 ℃±1 ℃培养 24 h±2 h， 观察结果。糖类发酵试验阳性者，培养基呈黄色，阴性者为红色。 A.9 西蒙氏柠檬酸盐培养基 A.9.2 制法 将各成分加热溶解，必要时调节 pH。每管分装 ......

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