路径: 主页 > GB/T > 第745页 > GB/T 18085-2026 | 标准编号 | GB/T 18085-2026 (GB/T18085-2026) | | 中文名称 | 小麦矮腥黑穗病菌检疫鉴定方法 | | 英文名称 | Detection and identification of Tilletia controversa J.G. Kuhn | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | B16 | | 国际标准分类 | 65.020.01 | | 字数估计 | 14,141 | | 发布日期 | 2026-04-30 | | 实施日期 | 2026-11-01 | | 旧标准 (被替代) | GB/T 18085-2000 | | 发布机构 | 国家市场监督管理总局、国家标准化管理委员会 | GB/T 18085-2026: 小麦矮腥黑穗病菌检疫鉴定方法
GB/T 18085-2026 英文版: Detection and identification of Tilletia controversa J. G. Kühn
ICS 65.020.01
CCSB16
中华人民共和国国家标准
代替GB/T 18085-2000
小麦矮腥黑穗病菌检疫鉴定方法
2026-04-30发布
2026-11-01实施
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
本文件代替GB/T 18085-2000《植物检疫 小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法》,与GB/T 18085-
2000相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下:
a) 增加了检疫流程图(见第6章);
b) 删除了现场检疫(见2000年版的第6章);
c) 增加了扫描电子显微镜鉴定方法(见10.1.3)。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。
本文件起草单位:中国农业科学院植物保护研究所、全国农业技术推广服务中心、深圳海关动植物
检验检疫技术中心。
本文件主要起草人:高利、冯晓东、陈冉冉、陈万权、马晨、王晓亮、姜培、刘太国、高瑞芳。
本文件于2000年首次发布,本次为第一次修订。
小麦矮腥黑穗病菌检疫鉴定方法
1 范围
本文件描述了小麦矮腥黑穗病菌(TilletiacontroversaJ.G.Kühn)的检疫鉴定方法。
本文件适用于小麦矮腥黑穗病菌的检疫和鉴定。
2 规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件。
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 基本信息
中文名:小麦矮腥黑穗病菌。
学名:TilletiacontroversaJ.G.Kühn。
分类地位:真菌界(Fungi),担子菌门(Basidiomycota),黑粉菌亚门(Ustilaginomycotina),外担菌纲
(Exobasidiomycetes),腥黑粉菌目(Tiletiales),腥黑粉菌科(Tiletiaceae),腥黑粉菌属(Tilletia)。
寄主、分布等信息见附录A。
5 鉴定原理
5.1 判断依据
该病原菌冬孢子形态学特征、自发荧光显微学特征和萌发生理学特征与其他腥黑粉病菌不同,是鉴
定该病原菌的判断依据。
5.2 冬孢子形态特征
冬孢子为星球形、椭圆形或不规则形,具网状饰纹和无色到淡色的胶质鞘,直径(含胶质鞘)为
16.80μm~32.19μm,通常为18μm~24μm;冬孢子萌发适宜温度为2℃~8℃。萌发时形成先菌丝
(担子),在其顶端产生初生小孢子(担孢子),初生小孢子经“H”形交配后产生新月形次生小孢子。
网脊高度值是小麦矮腥黑穗病菌和其近似种---小麦网腥黑穗病菌(TilletiacariesTul.)冬孢子
最重要的区别特征,前者的网脊高度值(平均值±标准差)为1.43μm±0.14μm,后者为0.53μm±
0.19μm。当某个冬孢子的网脊高度值大于临界网脊高度指数值0.95μm时,视为小麦矮腥黑穗病菌冬
孢子,小于或等于0.95μm时,视为小麦网腥黑穗病菌冬孢子。
5.3 冬孢子自发荧光显微学特征
在激发滤光片485nm、屏障滤光片520nm的激发下,小麦矮腥黑穗病菌冬孢子在3min内可产生
自发荧光,其近似种小麦网腥黑穗病菌则不具备该特征。
5.4 冬孢子萌发生理学特征
小麦矮腥黑穗病菌冬孢子在5℃萌发、17℃不能萌发,而小麦网腥黑穗病菌冬孢子在5℃和17℃
均可萌发。
6 检疫鉴定流程
检疫鉴定流程见图1。
7 仪器和用具
7.1 显微镜(具落射汞灯装置、摄像转换器及监视器)。
7.2 扫描电子显微镜。
7.3 滤光片组(450nm~490nm激发,520nm屏障)。
7.4 目镜和镜台测微尺。
7.5 往复式振荡器。
7.6 低速离心机。
7.7 干热灭菌器。
7.8 高压灭菌器。
7.9 普通天平(感量0.001g)。
7.10 超净工作台。
7.11 生物培养箱(具光照,低温可调至5℃)。
7.12 可调微量加样器(5μL~200μL)。
7.13 三角烧瓶(250mL)。
7.14 刻度离心管(1.5mL、10mL、20mL及100mL)。
7.15 培养皿(直径9cm)。
7.16 载玻片(长×宽为25.4mm×76.2mm,厚0.8mm)。
7.17 盖玻片(18mm×18mm)。
7.18 孔筛(长孔筛直径20cm,孔径1.7mm×20mm;圆孔筛直径20cm,孔径2.5mm)。
7.19 封口膜或铝箔纸。
7.20 台式离心机。
8 试剂
除非另作说明,以下药剂的纯度均为化学纯。
8.1 次氯酸钠溶液或漂白粉精片。
8.2 吐温-20(Tween-20)。
8.3 席尔氏浮载剂 (可参考附录B的方法自行配制)。
8.4 乙酸钾。
8.5 甘油。
8.6 乙醇。
8.7 柠檬酸。
8.8 甲醇。
8.9 磷酸氢二钠。
8.10 青霉素、链霉素 (医用注射粉剂)。
8.11 琼脂粉。
8.12 无荧光显微镜物镜镜头油(折射率=1.516)。
8.13 永久封片剂。
9 试验步骤
9.1 称样
称取混匀后的50g样品作为试验样品。
9.2 菌瘿检查
如发现腥黑穗病菌菌瘿,刮取少许冬孢子粉加适量席尔氏液镜检,作初步检查。如怀疑是小麦矮腥
黑穗病菌,随机测量30个成熟冬孢子的网脊高度值。
9.3 冬孢子检查
9.3.1 洗涤和离心
9.3.1.1 加水
将试验样品倒入经干热灭菌(165℃,1.5h)或湿热灭菌(121℃,20min)后的250mL三角烧瓶
内,加蒸馏水100mL,再加表面活性剂吐温-20试剂1滴~2滴。
9.3.1.2 封口
用铝箔纸或封口膜将三角烧瓶封口。
9.3.1.3 振动洗涤
将三角烧瓶放在往复式振荡器上振荡洗涤5min。
9.3.1.4 离心
立即取下三角烧瓶,将洗涤悬浮液注入经干热灭菌的10mL~20mL刻度离心管内,1000r/min,离
心3min。
9.3.1.5 混合离心
取出离心管,倾去上清液,再加剩余洗涤悬浮液,混合离心,直至所有洗涤悬浮液离心完毕,留沉
淀物。
9.3.2 定容
在沉淀物中加入席尔氏浮载剂使之悬浮,视沉淀物多少定容至1mL~3mL。
9.3.3 制片
用可调微量加样器吸取5μL~20μL沉淀物悬浮液至载玻片上,加盖玻片。制片用沉淀物悬浮液
的体积以加盖玻片后悬浮液不外溢为宜。
9.3.4 镜检
每份试验样品的沉淀物悬浮液至少镜检5张玻片,每片按视野依次全部检查。
9.3.5 测量
如发现可疑小麦矮腥黑穗病菌冬孢子,随机测量30个成熟冬孢子的网脊高度值。如测量5张玻片
后仍不足30个冬孢子,增加玻片检查数量,直至所有沉淀物悬浮液用毕。
10 鉴定方法
10.1 冬孢子形态学鉴定方法(10.1.1或10.1.2选择其一即可)
10.1.1 显微镜鉴定方法
冬孢子形态见附录A。通过在显微镜监视器屏幕上(或用目镜测微尺)对每个冬孢子按上下左右随
机地测量4个网脊高度,并求出平均网脊高度值,用该平均网脊高度值代表该冬孢子的网脊高度值进行
鉴定。如发现菌瘿,还需求出随机测量的30个成熟冬孢子的平均网脊高度值。
10.1.2 扫描电子显微镜鉴定方法
10.1.2.1 制样
根据所选用的扫描电子显微镜制样要求进行操作。
10.1.2.2 粘台
利用导电性双面胶将干燥好的样品粘贴在样品台上。
10.1.2.3 镀膜
在样品和样品台的表面喷洒一层金属膜,增加样品导电性。用于镀膜的金属有金、铂、钯、银等。样
品镀膜后,进行观察。
10.1.2.4 镜检和测量
按照扫描电子显微镜仪器软件操作说明进行。每份样品至少镜检5个样本,在视野内全部进行查
看。如发现疑似小麦矮腥黑穗病菌冬孢子,随机测量10个~30个成熟冬孢子的网脊高度,计算平均网
脊高度值。如冬孢子数量不足,则增加检查样本数量。
10.2 冬孢子自发荧光显微鉴定方法
10.2.1 制片
从菌瘿上刮取少许冬孢子粉至洁净的载玻片上,加适量蒸馏水制成冬孢子悬浮液(浓度以10×100
倍下每视野不超过40个冬孢子为宜),置于防尘处任其自然干燥。然后在干燥并附着于载玻片的冬孢
子上加一滴无荧光显微镜物镜镜头油,加盖玻片,加上述镜头油。
10.2.2 选择滤光片组
将制好的玻片置于激发滤光片485nm,屏障滤光片520nm的落射荧光万能显微镜上。
10.2.3 计时和计数
确定观察视野,同时开始计时。每视野照射2.5min后开始检查视野中呈自发荧光正反应和负反
应的冬孢子数。全过程不应超过3min。
10.2.4 计算自发荧光百分率
每份菌瘿样品至少观察5个视野、200个冬孢子,然后计算呈自发荧光正反应冬孢子的百分率,以
该百分率代表该菌瘿的自发荧光率进行鉴定。
10.3 冬孢子萌发生理学鉴定方法
10.3.1 制平板
3%的水琼脂经常规高压湿热灭菌后冷却至50℃左右,倒入直径9cm的培养皿内,每皿20mL。
制平板时需防止形成表面流动水。
10.3.2 涂平板
取部分菌瘿加适量灭菌蒸馏水制成冬孢子悬浮液,均匀地涂在水琼脂平板上。冬孢子悬浮液的浓
度以低倍(10×10)下每视野40个~60个冬孢子为宜。
10.3.3 培养
将涂有冬孢子的平板置于5℃±1℃、17℃±1℃有连续(或与12h黑暗交替)光照的条件下进行
培养。
10.3.4 观察和观察时间
在显微镜(10×10)下观察冬孢子的萌发。第1次观察可在培养10d时进行,以后每隔3d~7d观
察一次冬孢子萌发情况并计算萌发率。
11 结果评定
11.1 未发现菌瘿
11.1.1 未发现网脊高度值大于临界网脊高度指数值(0.95μm)的冬孢子,视为不带小麦矮腥黑穗
病菌。
11.1.2 随机测量的30个成熟冬孢子中有网脊高度值大于临界网脊高度指数值的可疑小麦矮腥黑穗
病菌冬孢子时,应进一步结合10.2或10.3进行鉴定。
11.2 发现菌瘿
11.2.1 11.2.2~11.2.4均可作为独立鉴定方法,符合其一即可完成判定。
11.2.2 冬孢子形态学特征如下:
---菌瘿的30个成熟冬孢子的网脊高度平均值大于或等于1.43μm时,判定为检出小麦矮腥黑穗
病菌;
---菌瘿的30个成熟冬孢子的网脊高度平均值小于或等于0.70μm时,判定为未检出小麦矮腥黑
穗病菌。
11.2.3 冬孢子自发荧光率显微学特征(当菌瘿的30个成熟冬孢子的网脊高度平均值为0.71μm~
1.42......
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