[PDF] SN/T 4877.13-2019 - 英文版
| 标准号码 | 美元 | 购买PDF | 工期 | 标准名称(英文版) |
| SN/T 4877.13-2019 | 259 | SN/T 4877.13-2019 | <=3 | 基因条形码筛查方法 第13部分：检疫性马铃薯Y病毒属病毒 |
| 基本信息 | |
|---|---|
| 标准编号 | SN/T 4877.13-2019 (SN/T4877.13-2019) |
| 中文名称 | 基因条形码筛查方法 第13部分：检疫性马铃薯Y病毒属病毒 |
| 英文名称 | DNA barcoding screening method - Part 13: Qurantine Potyviruses |
| 行业 | 商检行业标准 (推荐) |
| 中标分类 | C62 |
| 国际标准分类 | |
| 字数估计 | 12,119 |
| 发布日期 | 2019-09-03 |
| 实施日期 | 2020-03-01 |
| 标准依据 | 海关总署公告2019年第142号 |
| 发布机构 | 海关总署 |
SN/T 4877.13-2019: 基因条形码筛查方法 第13部分：检疫性马铃薯Y病毒属病毒
SN/T 4877.13-2019 英文名称: DNA barcoding screening method - Part 13: Qurantine Potyviruses
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN／T４８７７．１３-２０１９
基因条形码筛查方法
第１３部分：检疫性马铃薯Y病毒属病毒
中华人民共和国海关总署 发 布
前言
本部分按照GB/T １．１-２００９给出的规则起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布
机构不承担识别这些专利的责任。
本部分由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本部分起草单位：中华人民共和国北京海关、中华人民共和国青岛海关。
本部分主要起草人：邓丛良，刘兴亮、张丽杰、王英超、赵晓丽、骆卫峰、郑春生。
SN／T４８７７．１３-２０１９
SN/T 4877《基因条形码筛查方法》分为15个部分：
- - 第 1 部 分 ： 检 疫 性 棒 形 杆 菌 ；
- - 第 2 部 分 ： 检 疫 性 黄 单 胞 菌 ；
- - 第 3 部 分 ： 检 疫 性 植 原 体 ；
- - 第 4 部 分 ： 检 疫 性 茎 点 霉 ；
- - 第 5 部 分 ： 检 疫 性 拟 茎 点 霉 ；
- - 第 6 部 分 ： 检 疫 性 嗜 酸 菌 ；
- - 第 7 部 分 ： 检 疫 性 轮 枝 菌 ；
- - 第 8 部 分 ： 检 疫 性 炭 疽 菌 ；
- - 第 9 部 分 ： 检 疫 性 腥 黑 粉 菌 ；
- - 第 1 0 部 分 ： 检 疫 性 疫 霉 ；
- - 第 1 1 部 分 ： 检 疫 性 异 株 苋 亚 属 ；
- - 第 1 2 部 分 ： 黄 瓜 绿 斑 驳 花 叶 病 毒 ；
- - 第 1 3 部 分 ： 检 疫 性 马 铃 薯 Y 病 毒 属 病 毒 ；
- - 第 1 4 部 分 ： 检 疫 性 南 方 菜 豆 花 叶 病 毒 属 病 毒 ；
- - 第 1 5 部 分 ： 检 疫 性 叶 点 霉 。
本 部 分 为 SN/T 4877的 第 1 3 部 分 。
基因条形码筛查方法
第１３部分：检疫性马铃薯Y病毒属病毒
１ 范围
本部分规定了检疫性马铃薯Ｙ病毒属病毒的基因条形码筛查方法中ＲＮＡ提取、基因扩增、序列的
比对分析及结果判定等。
本部分适用于寄主植物中马铃薯Ｙ病毒属中检疫性病毒的筛查。
２ 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本
文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
ＳＮ/T ２１２２ 进出境植物及植物产品检疫抽样。
４ 马铃薯Y病毒属基本信息
中文名称：马铃薯Ｙ病毒属
息参见附录Ａ。
５ 方法原理
以马铃薯Ｙ病毒属病毒的基因组序列中的保守区域设计合成简并引物，建立该病毒属病毒基因条
形码筛查方法；并对ＰＣＲ产物进行序列测定，通过序列分析确定病毒种类。因此，马铃薯Ｙ病毒属的
分子生物学特征是制定本检测鉴定方法的主要依据。
６ 仪器设备与试剂
６．１ 仪器设备与用具
研磨仪，微量天平（感量：０．００１ｇ），ＰＣＲ仪，电泳仪，水平电泳槽，凝胶成像仪，高速冷冻台式离心
机，水浴槽或恒温孵育器，ｐＨ 计，各种量程的可调移液器（１０００μＬ、２００μＬ、１００μＬ、２０μＬ、１０μＬ、２μＬ）等。
６．２ 试剂
试剂见附录Ｂ。
７ 筛查鉴定方法
７．１ 抽样检查
按照ＳＮ/T ２１２２给出的方法进行抽样、取样。
７．２ RT-PCR方法
按附录Ｂ给出的方法，进行通用ＲＴ-ＰＣＲ检测。用已知病毒分离物作阳性对照，健康植物组织作
阴性对照，并设置空白对照。
７．３ 序列测定与分析
将ＰＣＲ产物回收后，进行克隆、测序，或者ＰＣＲ产物直接测序（序列测定可由专业的生物公司完
成）。把测定的核苷酸序列及翻译后的氨基酸序列与已知马铃薯Ｙ病毒属的病毒序列（参见附录Ｃ）进
行比对。采用邻接法（或者利用 ＭＥＧＡ６的ＮＪ算法）构建系统发育树。
８ 结果判定
８．１ ＲＴ-ＰＣＲ方法检测结果为阴性，则判定未检出马铃薯Ｙ病毒属病毒。
８．２ ＲＴ-ＰＣＲ方法检测结果为阳性，则进行序列测定与分析：
ａ） 如果翻译后氨基酸序列与马铃薯Ｙ病毒属已知病毒氨基酸序列同源性最高且大于８０％，则判
定检出马铃薯Ｙ病毒属病毒（具体病毒种类还需采用其他方法进一步鉴定）。
ｂ） 如果翻译后氨基酸序列与马铃薯Ｙ病毒属已知病毒序列同源性小于８０％：
---如果系统发育分析表明与马铃薯Ｙ病毒属病毒聚为一群，则判定检出马铃薯Ｙ病毒属病
毒（具体病毒种类还需采用其他方法进一步鉴定）；
注：所检测到的病毒可能属于基因组序列尚未测定的已知病毒或尚未报道的新的病毒种类。
---如果系统发育分析表明与马铃薯Ｙ病毒属病毒未聚为一群，则判定未检出马铃薯Ｙ病毒
属病毒。
ｃ） 如果测定的基因组序列与马铃薯Ｙ病毒属中的ＰＰＶ、ＰＶＡ、ＰＰＶ和ＢＢｒＭＶ中植物病毒基因
组序列同源性最高，则判定筛查......