路径: 主页 > MISC > 第351页 > WS/T 191-2017 | 标准编号 | WS/T 191-2017 (WS/T191-2017) | | 中文名称 | 软下疳诊断 | | 英文名称 | Diagnosis for chancroid | | 行业 | 卫生行业标准 (推荐) | | 中标分类 | C59 | | 字数估计 | 14,132 | | 发布日期 | 2017-07-24 | | 实施日期 | 2018-02-01 | | 旧标准 (被替代) | WS/T 191-1999 | | 标准依据 | 国卫通(2017)7号;行业标准备案公告2018年第3号(总第219号) | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | WS/T 191-2017: 软下疳诊断
WS/T 191-2017 英文名称: Diagnosis for chancroid
ICS 11.020
C 59
ws
中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准
代替 WS 191-1999
软下疳诊断
1 范围
本标准规定了软下疳的诊断原则、诊断依据、诊断和鉴别诊断。
本标准适用于全国各级各类医疗卫生机构及其医务人员对软下疳的诊断。
5 诊断
5.1 疑似病例
符合4.2，同时有或无4.1及4.3.1，并符合：（1）发生7 d以上的溃疡，用暗视野显微镜检查溃疡
组织液查不到梅毒螺旋体，或梅毒血清学试验阴性；（2）临床上排除溃疡为单纯疱疹病毒（HSV）感染，
HSV-PCR检测或HSV抗原检测阳性。
5.2 确诊病例同时符合4.3.2与5.1。
6 鉴别诊断
软下疳应与一期梅毒的硬下疳、生殖器疱疹和性病性淋巴肉芽肿等进行鉴别诊断（参见附录C的C.5）。
A A
附 录 A
（规范性附录）
杜克雷嗜血杆菌的实验室检查方法
A.1 标本采集
A.1.1 取材工具
棉拭子或藻酸钙拭子。
A.1.2 取材部位
生殖器溃疡或有波动感的肿大淋巴结。
A.1.3 皮肤黏膜损害取材
用无菌棉拭子轻轻擦去溃疡表面的痂皮和污物，再用拭子采取分泌物，从溃疡基底部或边缘取材，做涂片检查或培养。
A.1.4 淋巴结取材
选有波动的淋巴结，消毒淋巴结表面皮肤，用无菌干棉球擦干。用1mL无菌注射器配12号针头，吸
取生理盐水0.25 mL～0.5 mL，以无菌操作穿刺淋巴结并注入盐水，再吸入注射器内，反复2次～3次后，
取抽吸液做涂片检查或培养。
A.2 显微镜检查
A.2.1 材料
光学显微镜、无菌拭子、载玻片、注射器、生理盐水。
A.2.2 方法
将标本均匀轻轻地涂在干净的玻片上，然后在空气中干燥，火焰固定。
A.2.3 革兰染色
操作步骤如下：
a) 将经过固定的涂片铺满结晶紫溶液，染 30 s～60 s，迅速在流水中洗净。
b) 用碘液铺满涂片，染 30 s～60 s，用流水洗净。
c) 用丙酮-乙醇液脱色，直到涂片无紫色脱下为止。通常要 10 s～20 s，取决于涂膜的厚薄。避
免脱色过分，否则革兰阳性菌可误认为阴性菌。很快在流水中淋洗停止脱色，将过量的水用吸水纸吸干。
d) 用复红液复染 1 min，用流水淋洗，用吸水纸吸干。
A.2.4 结果及解释
使用10×100倍油镜检查。
杜克雷嗜血杆菌为革兰染色阴性，短杆状，两端钝圆，长1.6 µm～2 µm，宽0.5 µm，大多数在细胞
外呈链状或鱼群状排列，少数在细胞内呈团状分布。
因生殖器溃疡中常有多种微生物寄居，临床标本直接涂片革兰染色镜检的结果不可靠，假阳性及假
阴性较高，故涂片检查只用于初步判断，不作为确诊依据。
A.3 杜克雷嗜血杆菌运送与分离培养
A.3.1 材料
A.3.1.1 运送培养基
BM-SGA运送培养基。主要成分包括：L-谷氨酰胺、小牛白蛋白Ⅴ、3 mg/L万古霉素。
A.3.1.2 分离培养基
A.3.1.2.1 改良Thayer-Martin培养基。主要成分包括：GC基础培养基粉、血红蛋白、1% IsoVitaleX
增菌剂、3 mg/L万古霉素。
A.3.1.2.2 巧克力琼脂培养基。主要成分包括：肉浸液（肉膏液）琼脂、无菌脱纤维血、3 mg/L万古
霉素（培养基制备参见附录B）。
A.3.2 培养条件
将标本接种于培养基上，分区划线分离。接种了标本的培养基应置于相对湿度80%以上，培养温度
33 ℃～35 ℃，5% ～10%二氧化碳环境（烛缸）中培养。48 h～72 h观看结果。未出现阳性结果的平皿
应继续观察7 d后才能丢弃。
A.3.3 培养菌落初步鉴定
A.3.3.1 菌落特征：杜克雷嗜血杆菌经48 h～72 h培养后，可形成直径1 mm～2 mm菌落，菌落光滑、
呈半透明状，浅灰色或黄灰色。陈旧性培养物，菌落扁平，颜色变成灰白到棕黄。用白金耳可以完整地
将菌落沿琼脂表面推动，即推动试验阳性，为杜克雷嗜血杆菌菌落的典型特征。
A.3.3.2 革兰染色：从菌落取材做涂片，革兰染色镜检（见A.2）。
A.4 生化鉴定试验
A.4.1 氧化酶试验
A.4.1.1 原理：杜克雷嗜血杆菌酶系统不完善，但能产生弱氧化酶，它产生的氧离子能将氧化酶试剂
（盐酸二甲基对苯胺）氧化成醌类化合物，出现弱颜色反应。但也有报告氧化酶试验阴性的菌株。
A.4.1.2 方法：将氧化酶试剂配制成0.5%～1.0%水溶液。将溶液滴加于可疑菌落上，观察颜色变化。
A.4.1.3 结果：在滴加1%盐酸二甲基对苯胺溶液后，一般于15 s～20 s内菌落即呈淡红色，然后逐步
变成深紫蓝色，最后呈黑色。
A.4.1.4 临床意义：氧化酶试验、菌体形态和菌落形态是初步鉴定杜克雷嗜血杆菌的三个重要标准。
A.4.2 过氧化氢酶试验
A.4.2.1 原理：具有触酶（即过氧化氢酶）的细菌可催化过氧化氢放出初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。
A.4.2.2 方法（玻片法）：挑取培养基上的菌落，置于干净的玻片上，然后加1滴3%～6%过氧化氢，立即观察结果。
A.4.2.3 结果：于30 s内有气泡产生者为阳性。
A.4.2.4 临床意义：杜克雷嗜血杆菌不产生气泡因而为阴性。
A.4.3 卟啉试验
A.4.3.1 原理：用于检测细菌将盐酸δ-氨基-γ-酮戊酸转变成卟啉及卟吩胆色素原的能力。因为杜克
雷嗜血杆菌是严格依赖氯化血红素生长的一种嗜血杆菌，它没有将盐酸δ-氨基-γ-酮戊酸转变成卟啉
的能力，试验结果为阴性反应。
A.4.3.2 方法：在12 mm×75 mm的试管中加入0.5 mL的2 mmol/L盐酸-δ-氨基乙酰丙酸溶液中制备浓
菌悬液（1×109/mL），将试管放在35 ℃～37 ℃孵箱中4 h。再将试管于暗室中用wood灯照射，观察结果。
A.4.3.3 结果：出现红色荧光则表示有卟啉存在为阳性。
A.4.3.4 临床意义：严格依赖氯化血红素的杜克雷嗜血杆菌缺乏转变成卟啉能力，因而呈阴性。
A.4.4 硝酸盐还原试验
A.4.4.1 原理：硝酸盐还原反应包括两个方面：
1) 细菌在合成代谢过程中，将硝酸盐还原为亚硝酸盐和氮，再由氨转化成氨基酸和细菌内其他
含氮化合物。
2) 在分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐替代氧作为呼吸系统中的终末受氢体。硝酸盐的还原
过程因细菌而异，杜克雷嗜血杆菌能还原培养基中的硝酸盐为亚硝酸盐，亚硝酸盐与试剂中
的醋酸作用，生成亚硝酸，亚硝酸与试剂中的氨基苯磺酸作用生成重氮苯磺酸，再与试剂中
的α-萘胺结合而成为 N-α-萘胺偶氮苯磺酸（红色）。
A.4.4.2 方法：取48 h的培养物制成浓菌悬液（109/mL），取0.04 mL于小试管中，加入0.04 mL 0.05%
NaNO3溶液和0.04 mL的25 mmol/L磷酸缓冲液（pH 6.8）。在35 ℃水浴孵育1 h。分别加入0.5%对氨基苯
磺酸乙酸溶液和0.5%萘胺乙酸溶液各0.06 mL，摇匀，观察。
A.4.4.3 结果：2 min～10 min内显色，出现粉红色为阳性，不出现粉红色为阴性。
A.4.4.4 临床意义：杜克雷嗜血杆菌硝酸盐还原试验阳性。
A.4.5 碱性磷酸酶试验
A.4.5.1 方法：在含0.5 mL 0.03%无酚磷酸二钠试管中制备浓菌悬液（109/mL）。将试管置37 ℃水浴
孵育4 h，加4滴0.5% 2,6-二溴醌-4-氯亚胺甲醇溶液，摇匀，置室温15 min。加入0.3 mL n-丁醇，摇
匀静置5 min。观察。
A.4.5.2 结果：在丁醇层出现蓝紫色为阳性。
A.4.5.3 临床意义：杜克雷嗜血杆菌碱性磷酸酶试验阳性。
A.4.6 杜克雷嗜血杆菌生化试验鉴定结果
嗜血杆菌氧化酶试验阳性，过氧化氢酶试验阴性，卟啉试验阴性，硝酸盐还原试验阳性，碱性磷酸酶试验阳性。
A.4.7 培养意义及注意事项
杜克雷嗜血杆菌培养法的敏感性为60%～80%，是目前世界卫生组织推荐和诊断软下疳病人的主要实
验室方法。杜克雷嗜血杆菌对环境的抵抗力很弱，为提高培养的成功率，标本的离体时间越短越好，取
材后应立即接种于分离培养基。对不能及时接种到分离培养基的临床标本，应置于运送培养基，但必须
在一周内转种到分离培养基上。
B B
附 录 B
（资料性附录）
运送和分离杜克雷嗜血杆菌培养基的制备
B.1 运送培养基BM-SGA制备
B.1.1 BM成分
B.1.3 配制方法
SGA成分采用孔径为0.45 µm滤膜过滤除菌备用。BM成分于121 ℃灭菌15 min，待冷至50 ℃，无菌
操作加入SGA溶液混匀，分装于带螺旋盖的无菌试管内，每管6 mL，放4 ℃可用30 d。
B.2 分离培养基制备
B.2.1 改良Thayer-Martin培养基制备
B.2.1.1 成分
B.2.1.1.1 GC基础培养基粉
每3.6 g GC基础培养基粉可配100 mL T-M成品培养基，其中含蛋白胨1.5 g、玉米粉0.1 g、磷酸氢
二钾（K2HPO4）0.4 g、磷酸二氢钾（KH2PO4）0.1 g、氯化钠（NaCl）0.5 g和琼脂1.2 g。
B.2.1.1.2 VCN抑菌剂
1 mL溶液中含万古霉素（vancomycin）300 µg、粘菌素（colistin）750 µg和制霉菌素（nystatin）
1250单位。为抑制变形杆菌可加三甲氧苄氨嘧啶500 µg。制成后立即用完或贮存-20 ℃以下于2周内用完。
B.2.1.1.3 IsoVitaleX增菌剂
每1L蒸馏水中加入成分如下:
B.2.1.2 配制
以配500 mL T-M培养基为例，具体配制如下：
a) 制取双倍浓度的基础培养基：将 GC基础粉 18 g溶于 235 mL 蒸馏水中（用 500 mL烧瓶），充
分摇匀，边加热边搅动，直至煮沸 1 min，使之完全溶解。
b) 将 5 g血红蛋白粉加到 250 mL水中制成 2%溶液。混合时，5 g血红蛋白先加水 5 mL～10 mL，
研成糊状，再逐步加入蒸馏水，使整个溶液成匀浆状。也可用 2%血红蛋白溶液成品。
c) 将上述二液分别以 121 ℃高压灭菌 15 min 后冷却到 50 ℃左右备用。2%血红蛋白溶液成品不
必高压，只需在临用前稍加热即可。
d) 配制增菌液：每安瓿增菌剂加入随同附来的稀释液 10 mL，使溶解。
e) 配制抑菌剂：每安瓿抑菌剂用无菌操作加入蒸馏水 5 mL，摇动，使充分溶解。
f) 用无菌操作将 2%血红蛋白溶液 250 mL、增菌液 10 mL、抑菌剂 5 mL和 GC培养基 235 mL混合。
总体积为 500 mL，可倒 70 mm平皿 25个～30个。
B.2.2 巧克力琼脂的配制
B.2.2.1 成分
肉浸液（或肉膏液）琼脂（pH 7.2～7.4）1 000 mL，无菌脱纤维血（羊血或兔血）80 mL～100 mL，
万古霉素 3 mg/L（或多粘菌素B 25 U/mL）。
B.2.2.2 配制
将肉浸液琼脂高压灭菌，待凉至45 ℃时加入脱纤维血（血液在临用前置于37 ℃水浴预热），摇匀
后再置于水浴中，徐徐加热到85 ℃～ 90 ℃作用5 min～10 min，再冷却到50 ℃左右。为抑制杂菌，
在冷却到45 ℃左右时加入万古霉素 3 mg/L（或多粘菌素B 25 U/mL），再轻轻摇匀后倾注于灭菌平皿中。
附 录 C
（资料性附录）
软下疳简介
C.1 病原学
软下疳的病原体为杜克雷嗜血杆菌，由Ducrey 1889年在意大利发现。此菌为兼性厌氧菌，无运动
能力，无芽胞，革兰染色阴性，短杆菌，两端钝圆，长1.6 µm～2 µm，宽0.5 µm，大多数在细胞外呈链
状或鱼群状排列，少数在细胞内呈团状分布。
C.2 流行病学
由于缺乏快速准确的杜克雷嗜血杆菌的实验室检测手段，造成软下疳诊断困难，并且严重影响软下
疳的流行病学评估。据世界卫生组织估计，全球每年约有700万例新发软下疳病例。在不同的地区和国
家软下疳的发病率差异很大，常见的好发地区有非洲、加勒比海、西南亚或东南亚。如在肯尼亚、冈比
亚和津巴布韦，软下疳是最常见的引起生殖器溃疡的原因。曾有报道肯尼亚首都内罗毕的性工作者人群
中爆发软下疳。到上述地区旅游的人如有不安全性行为有将此病带回本国的可能。上述地区的性工作者
如果感染软下疳后到欧洲或者其他地方从事性工作活动，也可能会在欧洲或所去的地方造成小范围的软
下疳的流行。我国现在每年出境旅游的人数都在大幅递增，东南亚和非洲也是出境旅游的热点，软下疳
传入我国极为可能，由于缺乏快速准确的实验室检测手段，以及抗生素的滥用，估计误诊漏诊导致漏报的情况是存在的。
20世纪50年代初期，在我国此病较为常见。据上海1949年-1954年8家医院统计：软下疳有203例，
占性病病例的1.6%。到60年代初期，我国基本消灭性病。直到80年代以后，各地开始有个别的临床病例
报告，但多未经培养鉴定证实。近年来在开展病征处理试点地区（如福建、上海、成都等）皆未发现软下疳病例。
C.3 不典型软下疳的临床表现
不典型软下疳的临床表现如下：
--毛囊性软下疳（follicular chancriod），原发于毛囊，初像毛囊炎，不久形成溃疡，多见于
生殖器周围阴毛部；
--矮小软下疳（dwarf chancoid）：是非常小的损害，很像生殖器疱疹所致的......
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