路径: 主页 > MISC > 第347页 > WS/T 345-2011 | 标准编号 | WS/T 345-2011 (WS/T345-2011) | | 中文名称 | 血清尿素测定参考方法 | | 英文名称 | Reference procedure of the measurement of urea in serum | | 行业 | 卫生行业标准 (推荐) | | 中标分类 | C50 | | 国际标准分类 | 11.020 | | 字数估计 | 25,220 | | 发布日期 | 2011-09-30 | | 实施日期 | 2012-04-01 | | 引用标准 | ISO 15193-2-2009 | | 采用标准 | JCTLM CDC人血清尿素参考方法 分光光度法, MOD; ISO 15193-2009, 参考 | | 标准依据 | 卫通(2011)16号 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | | 范围 | 本标准规定了在临床医学应用中, 测定血清尿素浓度的参考方法。本标准主要适用于参考实验室, 作为血清尿素测定的溯源, 也可作为与血清尿素检验有关的仪器和试剂生产企业的溯源, 可供有关认可单位及质量管理部门应用。 | WS/T 345-2011: 血清尿素测定参考方法
WS/T 345-2011 英文名称: Reference procedure of the measurement of urea in serum
ICs 11。020
C50
中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准
血清尿素测定参考方法
1 范围
玺蜃强露锦 为与血清尿素检验有关的仪器和部门应用。
2 规范性引用文件
3 术语和缩略语
5 测定样品
标准物质、校准品、质控品、血清。
6 测定试剂
6.1 扌示与安全注意事项
6.1.1 氢氧化钡 :高毒类物质 ,吸人及接触可引起中毒 ,表现为恶心、呕吐、腹痛、腹泻、脉缓、进行性肌
麻痹、心律紊乱、血钾明显降低等。接触高温度溶液可造成皮肤灼伤毒。称量及配制试剂时应进行有效
防护 ,带 防护眼镜、橡胶手套 ,穿隔离服。
6.1.2 硫酸锌 :对眼睛有中度刺激性 ,对皮肤无刺激性 ,误服可引起急性 胃肠炎 ,严 重可引起休克至死
亡 ,称量及配制试剂时应进行有效防护 ,带防护眼镜 、橡胶手套 ,穿隔离服。
6.2 试剂原料
本方法使用下列试剂。
6.2.1 3,⒊双 (4-羟 基苯基)-1(3H)-异 苯并呋喃酮 (酚酞 ,C2° H〗 404),相 对分子质量=318.33。
6.2.2 硫酸锌 (ZnsO4·7H20),相对分子质量=287.56。
6.2.3 氢氧化钡EBa(oH)2·8H20],相对分子质量=315.46。
6.2.4 L谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GLDH),来源于牛肝脏 ,要求高纯度。
6.2.5 z-氨基-2-羟基△,⒊丙二醇(To⒌HCl×NH2C(CH20H)3· HCl),相对分子质量 =157.60。
6.2.6 三羟甲基氨基甲烷(Tos-Base)ENH2C(CH20H)3],相对分子质量=121.14。
6.2.7 脲酶(Urease),来源于刀豆 ,要求高纯度。
6.2.8 Ⅱ酮戊二酸(NaOoCCH2CH2COCoONa·2H20),相 对分子质量 ,相 对分子质量 =226。 09。
6.2.9 还原型 阡烟酰胺腺嘌呤二核苷酸二钠盐(NADH× C21H夕 N7N饧 O14P2· =H20),相 对分子质量 =709。 ω。
6.2.10 乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA× Cl°H4N2Naz0:·2H20),相 对分子质量=372.24。
6.2。 ll 5’二磷酸腺嘌呤单钾盐(ADP)(ClO H14KN501°P2· 2H2O),相 对分子质量=501.32。
6.3 试剂性能要求
6.3.1 宜使用最高纯度的试剂。
6.3.2 GLDH:试 剂纯度≥70%9每亳克蛋白酶含量≥zO单位。
6,3.3 Urease:试剂含璧每,克固体酶含量为(15000~50000)单位。
6.3.4 牛血清白蛋白,五级 ,相对分子质量=68000。
6.4 试剂制备
6.4,1 试剂原料含n
试剂的原料纯庋应为100%9如 果试剂原料含璧小
于100%E例 如,~.攵%)],按公式(l)计箅实际含量 :
6.4.2 试剂制备用水
6.4,2.1 纯水
6.4.3.5 105mmoⅡ·Lˉ 1的 Tris-HCl
准确称取 1.6548g Tris-HCl,放人烧杯内 ,用 80mL无氨水溶解后转移至 100mL容量瓶内 ,用无
氨水补足至刻度线。使用电子天平、清洁干燥的烧杯、容量瓶及称量杯配制。
密闭试剂瓶 2℃ ~8℃保存 。稳定 2周 。
准确称取 1.2720g Tris-Base,放人烧杯内 ,用 80mL试剂水溶解后转移至 100mL容量瓶内 .田甘
剂水补足至刻度线。密闭试剂瓶 2℃ ~8℃保存。稳定 2周
6.4.3.7 溶液 2(pH7.8,105mmOI·Lˉ 1Tris-IItl缓冲液 )
100mL的105mmol·Lˉl Tri⒌HCl倒人烧杯内 ,用 105mmol·L l Tris~Base调节 pH值至7.8。
密闭试剂瓶 2℃ ~8℃保存。稳定 2周 。
6.4.3.8 210mmo【·Lˉ I的 Tris-HCⅡ
准确称取 3.3096g Tris-HCl,放人烧杯内 ,用 gO mL无氨水溶解后转移至 100mL容量瓶内 ,用 无
氨水补是至刻度线。密闭试剂瓶 28℃保存。稳定 2周 。
6.4.3。 θ 210mⅡlol·Lˉ l Tris-Base
准确称取 3.3096g Tris-Base,放入烧杯内 ,用 80mL无氨水溶解后转移至 100mL容量瓶内 ,用无
氨水补足至刻度线。密闭试剂瓶 2℃ ~8℃保存。稳定 2周 。
6.4.3.10 pH7.8,210mmoI·Lˉ 1Tris-HC1缓冲液
100mL的105mmol·Lˉ 1Tri⒌HCl倒人烧杯内 ,用 105mmol·Lˉ 1Tris圮ase调节 pH值至7.8。
密闭试剂瓶 2℃ ~8℃保存 。稳定 2周 。
6.4.3。 ll 溶液 1
准确称取 1。 OG82gⅡ酮戊二酸和 1.1725g EDTA,放人烧杯内 ,用 zOO mL溶液 2(105mmol·L1
ˉs-HCl缓冲液)溶解后转移至 250mL容量瓶内,用 t抵-HCl缓冲液补足至刻度线。密闭试剂瓶2℃~8℃保存。稳定 2周 。
6.4.3.12 溶液 3
准确称取 0.7896g ADP,放人烧杯内 ,用 200mL105mmol·L〗 Tris-Hα缓冲液溶解后转移至
250mL容量瓶内 ,用 Tris~HCl缓冲液补足至刻度线。密闭试剂瓶 2℃ ~8℃保存。稳定 2周 。
6.4.3.13 溶液 4
准确称取 0.1788g NADH,放人烧杯内 ,用 zO0mL105mmol·Lˉl Tris HCl缓冲液溶解后转移
至 250mL容量瓶内 ,用 TⅡ⒌HCl缓冲液补足至刻度线。密闭试剂瓶 2℃ ~8℃保存。稳定 2周 。
6.4.3.14 0.2%牛 血清白蛋白溶液
准确称取 0.5g牛血清白蛋白,放人烧杯内 ,用 200mL无氨水溶解后转移至 250mL容量瓶内 ,用
无氨水补足至刻度线。密闭试剂瓶 2℃~8℃保存。稳定 2周 。
6.4.3.15 7ss O0OU·Lˉ 1GLDH溶液
采用称量法依据 L谷氨酸脱氢酶测定的含量获得总活性为 37800UL-谷 氨酸脱氢酶 ,放人烧杯
内 ,用 40mL O。2%午血清白蛋白溶液溶解后转移至 50mL容量瓶内 ,用 0.2%牛 血清白蛋白溶液补足
至刻度线。密闭试剂瓶 2℃~8℃保存。稳定 1周 。
6.4.3.16 100800U· Lˉ 1Urease溶液
采用称量法依据脲酶测定的含量获得总活性为 37800U脲酶 ,放人烧杯内 ,用 40mLO。2%牛血清
白蛋白溶液溶解后转移至 50mL容量瓶 内 ,用 0.2%牛血清 白蛋 白溶液补足至刻度线。密闭试剂瓶
2℃ ~8℃保存。稳定 1周 。
6.4.3.17 空白试剂
按以下步骤配制 :
--准确移取等量的 756000U· L lGLDH溶液及 pH7.8,210mmol·L1Tris~HCl缓冲液 ,进行混合备用 ;
--准确移取 10mL溶液110mL溶液25mL溶液42.5mL混合后的 GLDH溶 液及 2.5mL
pH7.8,105mmol·Lˉl Tr⒍HCl缓冲液 ,并进行混合制备为空白试剂。
6.4.3.18 反应试剂按以下步骤配制 :
--准确移取等量的 756000U· L1GLDH溶 液及 pH7.8,210mmol·L1Tris-HCl缓冲液 ,进行混合备用 ;
--准确移取等量的 100800U· L1Urease溶液及 pH7.8,210mmol·L l Tris~HCl缓冲液 ,进行混合备用 ;
--准确移取 10mL溶液110mL溶液25mL溶液4吃。5mL混合后的 GLDH溶液及 2.5mL混
合后的 Urease溶液 ,并进行混合制备为反应试剂。
6.5 标准液的制备
6.5.1 尿素标准原液(100mmoI·Lˉ 1)的配制
准确称取 0.6006g SRM912a标准物质 ,放入清洁干燥经过灭菌处理的烧杯 内 ,加入 80mL无氨
水进行溶解 ,溶解后转移至 100mL A级容量瓶中 ,用 无氨水多次冲洗烧杯 ,将 烧杯内的尿素溶液全部
转移至容量瓶 ,用无氨水补足 ,密闭颠倒混匀至少 10次 ,每一次颠倒后旋转倒置容量瓶 10s。 配制完成
后进行分装 ,每 15mL一份 ,放人带有螺旋盖的硼硅酸盐的瓶中 ,盖 紧并标记 ,注 明 日期 ,保存在 4℃或
-⒛ ℃。如无污染 ,标准原液可以长期稳定。建议每 6个月重新配制。
注 1:SRM912a的称量误......
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