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| 标准编号 | GB 22255-2014 (GB22255-2014) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 食品中三氯蔗糖(蔗糖素)的测定 | | 英文名称 | National Food Safety Standard Determination of Sucralose in Foods | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | C53 | | 国际标准分类 | 67.040 | | 字数估计 | 9,966 | | 发布日期 | 2015/1/28 | | 实施日期 | 2015/7/28 | | 旧标准 (被替代) | GB/T 22255-2008 | | 归口单位 | 国家卫生和计划生育委员会 | | 标准依据 | 国家卫生和计划生育委员会公告2015年第2号 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | | 范围 | 本标准规定了食品中三氯蔗糖(蔗糖素)的测定方法。本标准适用于食品中三氯蔗糖的测定。 | GB 22255-2014: 食品安全国家标准 食品中三氯蔗糖(蔗糖素)的测定
GB 22255-2014 英文名称: National Food Safety Standard Determination of Sucralose in Foods
中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准
食品安全国家标准
食品中三氯蔗糖(蔗糖素)的测定
1 范围
本标准规定了食品中三氯蔗糖(蔗糖素)的测定方法。
本标准适用于食品中三氯蔗糖的测定。
2 原理
试样中三氯蔗糖用甲醇水溶液提取,除蛋白、脂肪,经固相萃取柱净化、富集后用高效液相色谱仪、
反相C18色谱柱分离,蒸发光散射检测器或示差检测器检测,根据保留时间定性,以峰面积定量。
3 试剂和材料
注:除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1 甲醇(CH3OH)。
3.1.2 乙腈(CH3CN):色谱纯。
3.1.3 正己烷(C6H14)。
3.1.4 乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]。
3.1.5 亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]。
3.1.6 中性氧化铝(100目~200目)。
3.2 试剂的配制
3.2.1 乙酸锌溶液(219g/L):称取21.9g乙酸锌,加3mL乙酸,加水溶解至100mL。
3.2.2 亚铁氰化钾溶液(106g/L):称取10.6g亚铁氰化钾,加水溶解至100mL。
3.2.3 甲醇水溶液(75+25):量取75mL甲醇,加25mL水,混匀。
3.2.4 乙腈水溶液(11+89):量取11mL乙腈,加89mL水,混匀。
3.3 标准品
三氯蔗糖标准品(C12H19C13O8):CAS编号56038-13-2,纯度≥99%。
3.4 标准溶液的制备
3.4.1 三氯蔗糖标准贮备溶液(10.0mg/mL):称取三氯蔗糖标准品0.25g(精确至0.0001g)于25mL
容量瓶中,用水定容至刻度,混匀,其中三氯蔗糖浓度为10.0mg/mL。贮备液置于4℃冰箱中保存,保
存期为6个月。
3.4.2 三氯蔗糖标准中间液(1.00mg/mL):吸取5.00mL三氯蔗糖标准贮备溶液于50mL容量瓶中,
用水定容至刻度,混匀,其中三氯蔗糖浓度为1.00mg/mL。置于4℃冰箱中保存,保存期为3个月。
3.4.3 三氯蔗糖标准工作液:分别吸取0.200mL、0.500mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL三氯蔗糖中间
液于10 mL 容量瓶中,用水定容至刻度。其中三氯蔗糖工作液浓度分别为0.0200 mg/mL、
0.0500mg/mL、0.100mg/mL、0.200mg/mL、0.400mg/mL。
3.5 材料
固相萃取柱(200mg,类型为N-乙烯基吡咯烷酮和二乙烯基苯亲水亲脂平衡型填料)
使用前依次用4mL甲醇、4mL水活化。
4 仪器和设备
4.1 高效液相色谱仪:配示差检测器或蒸发光散射检测器。
4.2 天平:感量为0.1mg和1mg。
4.3 涡旋混合器。
4.4 离心机:转速≥3000r/min。
4.5 离心机:转速≥10000r/min。
4.6 超声波清洗仪:工作频率35kHz。
4.7 水浴锅。
5 分析步骤
5.1 试样制备
5.1.1 含蛋白脂肪试样
5.1.1.1 称取粉碎均匀后固体试样1g~2g(精确到0.001g),混匀后液体试样1g~5g(精确到
0.001g)置于50mL离心管中,加入5mL水,涡旋混合器上振荡3min后加入15mL甲醇,继续振荡
30s,超声波提取20min,以3000r/min离心10min,将上清液移入50mL离心管中。沉淀物加入
5.0mL甲醇水溶液(75+25),玻棒搅拌均匀后,涡旋混合器上振荡30s,以3000r/min离心10min,重
复提取2次,将上清液合并于150mL分液漏斗中。
5.1.1.2 在150mL分液漏斗内,加入30mL正己烷,振摇2min,静置分层,20min后,下层水相移置
于50mL蒸发皿。蒸发皿于沸水浴上蒸发,当蒸发皿中液体在1mL左右时用9mL水分三次冲洗蒸
发皿,冲洗液合并移置于15mL离心管中,超声波处理5min,以3000r/min离心10min。
5.1.1.3 取全部上清液移入已活化的固相萃取柱,控制液体流速不超过每秒1滴,柱上液面为2mm左
右时加入1mL水,继续保持液体流速为每秒1滴,到柱中液体完全排出后,用3mL甲醇洗脱,收集甲
醇洗脱液。洗脱液置于50mL蒸发皿内,于沸水浴上蒸干,残渣用1.00mL乙腈水溶液(11+89)溶解
(如溶液有浑浊现象可将其移入离心管,10000r/min离心5min),溶液过0.45μm滤膜,
滤液为制备的试样溶液,备用。
注:果冻类样品经提取后的上清液需50℃水浴加热后趁热过柱,否则易堵塞萃取柱。
5.1.2 酱及酱制品﹑醋﹑酱油
称取混匀后试样2g(精确到0.001g),置于50mL离心管中,加入1.0g中性氧化铝,加入3mL
水,涡旋混合器上振荡3min后加入15mL甲醇,以下步骤自5.1.1.1“继续振荡30s,超声波提取
20min,以3000r/min离心10min”开始,到5.1.1.3“滤液为制备的试样溶液,备用。”为止依次处理。
5.1.3 含酒精的试样(发酵酒﹑配制酒)
称取混匀后试样5g(精确到0.001g),置于50mL蒸发皿中,于沸水浴上蒸干,残渣用1.00mL乙
腈水溶液(11+89)溶解,溶液过0.45μm滤膜,滤液为制备的试样溶液,备用。
5.1.4 饮料
称取混匀后试样5g(精确到0.001g),置于15mL离心管中,加入5mL水,涡旋混合器上振荡
30s。以3000r/min离心10min。以下步骤按5.1.1.3处理。
5.1.5 风味发酵乳、奶茶
称取混匀后试样1g~5g(精确到0.001g)置于50mL离心管中,加入5mL水,涡旋混合器上振荡
3min后加入15mL甲醇、0.50mL乙酸锌溶液、0.50mL亚铁氰化钾溶液,以下步骤自5.1.1.1“继续振
荡30s,超声波提取20min,以3000r/min离心10min”开始,到5.1.1.3“滤液为制
备的试样溶液,备用。”为止依次处理。
不同试样的前处理需要同时做试样空白试验。
5.2 仪器参考条件
5.2.1 色谱柱:C18柱 (4.6mm×150mm,5μm)或性能相当者。
5.2.2 流动相:水+乙腈=89+11。
注:当检测样品基质复杂,强保留物质影响后续检测时,可采取洗脱程序(蒸发光散射检测器适用),参见附录A。
5.2.3 流速:1.0mL/min。
5.2.4 柱温:35℃。
5.2.5 示差检测器条件:
---检测池温度:35℃;
---灵敏度:16。
5.2.6 蒸发光散射检测器条件:按不同品牌蒸发光散射检测器在高水相流动相条件下的要求设置。
如SEDEX75:雾化压力:3.5Bar;增益:8;蒸发温度:40℃。或性能相当者。
5.2.7 进样量:20.0μL。
5.3 标准曲线的制作
5.3.1 示差检测器
取三氯蔗糖标准工作液分别进样20.0μL,在上述色谱条件下测定峰面积,然后作峰面积-三氯蔗糖
浓度(mg/mL)标准曲线,曲线方程依示差检测原理,见式(1):
5.3.2 蒸发光散射检测器
取三氯蔗糖标准工作液分别进样20.0μL,在给定的色谱条件下测定峰面积,然后作峰面积-三氯蔗
糖浓度(mg/mL)标准曲线,曲线方程依蒸发光散射检测原理,见式(2):
5.4 试样溶液的测定
取制备的试样溶液和空白试样溶液各20.0μL进样,进行高效液相色谱分析。以保留时间定性,以
峰面积外标法定量,见附录B。
6 分析结果的表述
试样中三氯蔗糖含量......
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