路径: 主页 > GB > 第142页 > GB 29687-2013 | 标准编号 | GB 29687-2013 (GB29687-2013) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 水产品中阿苯达唑及其代谢物多残留的测定 高效液相色谱法 | | 英文名称 | Determination of Albendazole and metabolites residues in aquatic products by High Performance Liquid Chromatographic method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | C53 | | 国际标准分类 | 67.020 | | 字数估计 | 11,147 | | 引用标准 | GB/T 6682; GB/T 1.1-2000 | | 采用标准 | GB/T 6682; GB/T 1.1-2000 | | 标准依据 | 农业部公告第1927号 | | 发布机构 | 中华人民共和国农业部、中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | | 范围 | 本标准规定了水产品中阿苯达唑及代谢物(2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜)残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。本标准适用于水产品中阿苯达唑及代谢物(2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜)残留量的测定。 | GB 29687-2013: 食品安全国家标准 水产品中阿苯达唑及其代谢物多残留的测定 高效液相色谱法
GB 29687-2013 英文名称: Determination of Albendazole and metabolites residues in aquatic products by High Performance Liquid Chromatographic method
中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准
水产品中阿苯达唑及其代谢物
多残留的测定 高效液相色谱法
2013-09-16发布
2014-01-01实施
中 华 人 民 共 和 国 农 业 部
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布
食品安全国家标准
水产品中阿苯达唑及其代谢物
多残留的测定 高效液相色谱法
1 范围
本标准规定了水产品中阿苯达唑及代谢物(2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜)残留量
检测的制样和高效液相色谱测定方法。
本标准适用于水产品中阿苯达唑及代谢物(2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜)残留量
的测定。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
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GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
SC/T 3016 水产品抽样方法
3 原理
试料中残留的阿苯达唑及代谢物,用乙酸乙酯提取,正己烷除脂,乙酸乙酯反萃取,高效液相色谱-
荧光检测器测定,外标法定量。
4 试剂和材料
以下所用试剂,除特别注明外均为分析纯试剂,水为符合GB/T 6682规定的一级水。
4.1 盐酸2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜和阿苯达唑对照品:含量≥99%。
4.2 正己烷:色谱纯。
4.3 乙腈:色谱纯。
4.4 甲醇:色谱纯。
4.5 乙酸乙酯:色谱纯。
4.6 二氯甲烷:色谱纯。
4.7 磷酸。
4.8 十二水磷酸氢二钠。
4.9 庚烷磺酸钠:色谱纯。
4.10 乙酸铵。
4.11 20%甲醇溶液:取甲醇80mL,用水溶解并稀释至100mL。
4.12 0.05mol/L乙酸铵溶液:取乙酸铵3.85g,用水溶解并稀释至1000mL。
4.13 0.04mol/L庚烷磺酸钠-磷酸溶液:取磷酸2.7mL,加水混匀,加庚烷磺酸钠8.08g,用水溶解并
稀释至1000mL。
4.14 3%磷酸溶液:取磷酸1.75mL,用水溶解并稀释至100mL。
4.15 0.02mol/L磷酸氢二钠溶液:取磷酸氢二钠0.716g,用水溶解并稀释至100mL,用3%磷酸溶液
调节pH至8.5,现配现用。
4.16 100μg/mL阿苯达唑、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜和2-氨基阿苯达唑砜标准贮备液:精密称取阿
苯达唑、阿苯达唑砜和阿苯达唑亚砜各10mg以及盐酸2-氨基阿苯达唑砜11.5mg,分别于100mL量
瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,配制成浓度为100μg/mL的标准贮备液。-18℃以下避光保存,有
效期3个月。
4.17 混合标准工作液:分别精密量取100μg/mL2-氨基阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜和阿
苯达唑标准储备液适量,于同一量瓶中,用80%甲醇溶液溶解并稀释至刻度,配制成浓度分别为2-氨基
阿苯达唑砜1.0μg/mL、阿苯达唑亚砜2.0μg/mL、阿苯达唑砜0.2μg/mL以及阿苯达唑5.0μg/mL的
混合标准工作液。2℃~8℃避光保存,有效期1个月。
5 仪器与设备
5.1 高效液相色谱仪:配荧光检测器。
5.2 分析天平:感量0.00001g。
5.3 天平:感量0.01g。
5.4 均质机。
5.5 离心机。
5.6 旋转蒸发器。
5.7 氮吹仪。
5.8 梨形瓶:100mL。
5.9 滤膜:有机相,0.45μm。
6 试料的制备与保存
6.1 试料的制备
取适量新鲜或冷冻的鱼,去鳞、去皮,沿脊背取肌肉;虾,去头、去壳,取肌肉部分。绞碎,并使均质。
---取均质后的供试样品,作为供试试料。
---取均质后的空白样品,作为空白试料。
---取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料。
6.2 试料的保存
-20℃以下保存。
7 测定步骤
7.1 虾、蟹类
7.1.1 提取
称取试料2g±0.02g,于50mL离心管中,加乙酸乙酯15mL,均质30s,振荡5min,4000r/min
离心10min,取上清液于100mL梨形瓶中,残渣备用。另取一50mL离心管,加乙酸乙酯15mL,清洗
均质机30s,洗涤液于残渣中,振荡5min,4000r/min离心10min,上清液合并至100mL梨形瓶中,
于35℃旋转蒸发至干,用20%甲醇溶液1.0mL溶解残渣。
7.1.2 除脂
将上述溶液移入10mL离心管中,再向梨形瓶中加入正己烷1mL,洗涤,正己烷转入离心管中,振
荡1min,4000r/min离心5min,弃正己烷层液,再加入正己烷1mL,重复操作两次,取下层液备用。
7.1.3 净化
备用液中加0.04mol/L磷酸1mL,混匀,加二氯甲烷1.5mL,混合1min,4000r/min离心5min,
取二氯甲烷液于10mL离心管中,再加二氯甲烷1.5mL,重复提取两次,合并三次二氯甲烷液于10mL
离心管中,于35℃氮气吹干;用0.02mol/L磷酸氢二钠溶液1.0mL溶解残余物,加乙酸乙酯2mL,混
合1min,4000r/min离心5min,将乙酸乙酯液移入另一10mL离心管中,再向磷酸氢二钠溶液中加
乙酸乙酯2mL,重复提取两次,合并三次乙酸乙酯液,于40℃氮气吹干,用20%甲醇-水1.0mL溶解残
留物,滤膜过滤,供液相色谱测定。
7.1.4 基质匹配标准溶液的制备
称取5份空白试料2g±0.02g,于50mL离心管中,分别加入混合标准工作液0、10、25、100和
200μL,混匀,按提取、除脂、净化步骤操作,基质标准溶液浓度分别为:2-氨基阿苯达唑砜0、0.01、
0.025、0.1和0.2μg/mL,阿苯达唑亚砜0、0.02、0.05、0.2和0.4μg/mL,阿苯达唑砜0、0.002、0.005、
0.02和0.04μg/mL,阿苯达唑0、0.05、0.125、0.5和1μg/mL,供高效液相色谱测定。以测得峰面积为
纵坐标,对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
7.2 鱼类
7.2.1 提取
称取试料2g±0.02g,于50mL离心管中,加乙酸乙酯15mL,均质30s,振荡提取5min,
4000r/min离心10min,取上清液于100mL梨形瓶中,残渣备用。另取一50mL离心管加乙酸乙酯
15mL,清洗均质机30s,将此液倒入上述残渣中振荡提取5min,4000r/min离心10min,上清液合并
至100mL梨形瓶中,于35℃减压旋转蒸发至干,加入20%甲醇溶液1.0mL溶解残渣。
7.2.2 除脂
将上述溶液移入10mL离心管中,再向梨形瓶中加入正己烷1mL,洗涤,正己烷转入离心管,振荡
1min,4000r/min离心5min,去除正己烷层,再加入正己烷1mL,依法重复操作两次。下层溶液过
0.45μm 有机相滤膜,供液相色谱测定。
7.2.3 混合基质标准溶液的制备
称取5份空白试料2g±0.02g,于50mL离心管中,分别加混合标准工作液10、25、100和200μL,
混匀,按提取、除脂步骤操作,基质标准溶液浓度分别为:2-氨基阿苯达唑砜0、0.01、0.025、0.1和
0.2μg/mL,阿苯达唑亚砜0、0.02、0.05、0.2和0.4μg/mL,阿苯达唑砜0、0.002、0.005、0.02和
0.04μg/mL,阿苯达唑0、0.05、0.125、0.5和1μg/mL,供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标,
对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
7.3 测定
7.3.1 色谱条件
7.3.1.1 色谱柱:C18(150mm×4.6mm,粒径5μm),或相当者。
7.3.1.2 检测波长:激发波长:290nm,发射波长:320nm。
7.3.1.3 柱温:30℃。
7.3.1.4 流速:1.0mL/min。
7.3.1.5 进样量:30μL。
7.3.1.6 流动相:梯度程序见表1。
表1 流动相梯度洗脱程序
时 间
min
乙 腈
甲醇
0.05mol/L乙酸铵
0.00 10 8 82
30.0 40 17 43
32.0 50 20 30
40.0 50 20 30
40.1 10 8 82
45.0 10 8 82
7.3.2 测定法
取试样溶液和相应的标准溶液,作单点或多点校准,按外标法,以峰面积计算。标准溶液及试样溶
液中阿苯达唑、阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜和2-氨基阿苯达唑砜响应值应在仪器检测的线性范围之内。
在上述色谱条件下,标准溶液和空白组织添加试样溶液的高效液相色谱图分别见附录A。
7.4 空白试验
除不加试料外,采用完全相同的步骤进行平行操作。
8 结果计算和表述
试料中阿苯达唑及代谢物残留量按式(1)计算:
X=
cS×A×V×1000
AS×m
(1)
式中:
X ---供试试料中相应的阿苯达唑及代谢物残留量,单位为微克每千克(μg/kg);
cS ---基质标准溶液中相应的阿苯达唑及代谢物标准溶液浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);
A ---试样溶液中相应的阿苯达唑及代谢物峰面积;
V ---样品定容体积,单位为毫升(mL);
AS ---基质标准溶液中相应的阿苯达唑及代谢物标准溶液的峰面积;
m ---供试试料质量,单位为克(g)。
注:计算结果需扣除空白值,测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留三位有效数字。
9 方法灵敏度、准确度和精密度
9.1 灵敏度
本方法检测限:阿苯达唑为10μg/kg,2-氨基阿苯达唑砜为2.5μg/kg,阿苯达唑亚砜为5μg/kg,阿
苯达唑砜为0.5μg/kg。
本方法定量限:阿苯达唑为25μg/kg,2-氨基阿苯达唑砜为5μg/kg,阿苯达唑亚砜为10μg/kg,阿
苯达唑砜为1μg/kg。
9.2 准确度
本方法阿苯达唑在25μg/kg~500μg/kg、2-氨基阿苯达唑砜在5μg/kg~100μg/kg、阿苯达唑亚
砜在10μg/kg~200μg/kg以及阿苯达唑砜在1μg/kg~20μg/kg添加浓度水平上的......
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