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GB 4789.14-2014

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基本信息
标准编号 GB 4789.14-2014 (GB4789.14-2014)
中文名称 食品安全国家标准 食品微生物学检验 蜡样芽胞杆菌检验
英文名称 National Food Safety Standard - Food Microbiological Examination - Bacillus Cereus
行业 国家标准
中标分类 C53
国际标准分类 07.100.30
字数估计 19,112
发布日期 2014/12/1
实施日期 2015/5/1
旧标准 (被替代) GB/T 4789.14-2003
归口单位 国家卫生和计划生育委员会
标准依据 国家卫生计生委公告2014年第19号
发布机构 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
范围 本标准规定了食品中蜡样芽胞杆菌的检验方法。本标准第一法适用于蜡样芽胞杆菌含量较高的食品样品中蜡样芽胞杆菌的计数;第二法适用于蜡样芽胞杆菌含量较低的食品样品中蜡样芽胞杆菌的计数。

GB 4789.14-2014: 食品安全国家标准 食品微生物学检验 蜡样芽胞杆菌检验
GB 4789.14-2014 英文名称: National Food Safety Standard -- Food Microbiological Examination -- Bacillus Cereus
中华人民共和国国家标准
1 范围
本标准规定了食品中蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)的检验方法。
本标准第一法适用于蜡样芽胞杆菌含量较高的食品中蜡样芽胞杆菌的计数;第二法适用于蜡样芽胞杆
菌含量较低的食品样品中蜡样芽胞杆菌的计数。。
5 蜡样芽胞杆菌 MPN计数法(第二法)
5.1 检验程序
蜡样芽胞杆菌 MPN计数法检验程序见图 2。
5.2 操作步骤
5.2.1 样品处理同 4.2.1。
5.2.2 样品制备同 4.2.2。
5.2.3 样品的稀释同 4.2.3。
5.2.4 样品接种
10 倍系列稀释
选取 3 个适宜连续稀释度的样品匀液,各吸取 1mL,分别接种于
3 管胰酪胨大豆多黏菌素肉汤
5.2.5 培养
用接种环从各管中分别移取 1 环,划线接种到 MYP 琼脂平板上,30 ℃±1 ℃培养 24 h±2 h。如果菌
落不典型,可继续培养 24 h±2 h 再观察。
5.2.6 确定鉴定
从每个平板选取 5个典型菌落(小于 5个全选),划线接种于营养琼脂平板做纯培养,30 ℃±1 ℃培
养 24 h±2 h,进行确证实验,见 4.3。
5.3 结果与报告
根据证实为蜡样芽胞杆菌阳性的试管管数,查 MPN 检索表(见附录 B),报告每 g(mL)样品中
蜡样芽胞杆菌的最可能数,以 MPN/g(mL)表示。
贮存液:称取 34.0 g 的磷酸二氢钾溶于 500 mL 蒸馏水中,用大约 175 mL 的 1mol/L 氢氧化钠溶液
调节 pH 至 7.2,用蒸馏水稀释至 1000 mL 后贮存于冰箱。
稀释液:取贮存液 1.25 mL,用蒸馏水稀释至 1 000 mL,分装于适宜容器中,121 ℃高压灭菌 15 min。
A.2 甘露醇卵黄多黏菌素(MYP)琼脂
A.2.2 制法
将 A.2.1 前五种成分加入于 950 mL 蒸馏水中,加热溶解,校正 pH 至 7.3±0.1,加入酚红溶液。分装,
每瓶 95 mL,121 ℃高压灭菌 15 min。临用时加热溶化琼脂,冷却至 50 ℃,每瓶加入 50%卵黄液 5 mL
和浓度为 10000 IU 的多黏菌素 B 溶液 1 mL,混匀后倾注平板。
A.2.2.1 50 %卵黄液
取鲜鸡蛋,用硬刷将蛋壳彻底洗净,沥干,于 70%酒精溶液中浸泡 30 min。用无菌操作取出卵黄,
加入等量灭菌生理盐水,混匀后备用。
A.2.2.2 多黏菌素 B溶液
在 50 mL 灭菌蒸馏水中溶解 500 000 IU 的无菌硫酸盐多黏菌素 B。
A.3 胰酪胨大豆多黏菌素肉汤
A.3.2 制法
将 A.3.1 前五种成分加入于蒸馏水中,加热溶解,校正 pH 至 7.3±0.2,121 ℃高压灭菌 15 min。临
用时加入多黏菌素 B 溶液混匀即可。多黏菌素 B 溶液制法同附录 A.2.2.2。
A.4.2 制法
将 A.4.1 所述成分溶解于蒸馏水内,校正 pH 至 7.2±0.2,加热使琼脂溶化。121℃高压灭菌 15 min,备用。
A.5 过氧化氢溶液
A.5.1 试剂3%过氧化氢溶液:临用时配制,用 H2O2配制。
A.5.2 试验方法
用细玻璃棒或一次性接种针挑取单个菌落, 置于洁净试管内,滴加 3%过氧化氢溶液 2 mL,观察结果。
A.6.3 试验方法
用接种针挑取培养物穿刺接种于动力培养基中,30 ℃±1 ℃培养 48 h±2 h。蜡样芽胞杆菌应沿穿刺
线呈扩散生长,而蕈状芽胞杆菌常常呈绒毛状生长,形成蜂巢状扩散。动力试验也可用悬滴法检查。蜡
样芽胞杆菌和苏云金芽胞杆菌通常运动极为活泼,而炭疽杆菌则不运动。
A.7.2 制法
将 A.7.1 所述成分溶解于蒸馏水。校正 pH 至 7.4,分装每管 5 mL,121 ℃高压灭菌 15 min。
A.7.3 硝酸盐还原试剂
甲液:将对氨基苯磺酸 0.8 g 溶解于 2.5 mol/L 乙酸溶液 100 mL 中。
乙液:将甲萘胺 0.5 g 溶解于 2.5 mol/L 乙酸溶液 100 mL 中。
A.7.4 试验方法
接种后在 36 ℃±1 ℃培养 24 h~72 h。加甲液和乙液各 1 滴,观察结果,阳性反应立即或数分钟内
显红色。如为阴性,可再加入锌粉少许,如出现红色,表示硝酸盐未被还原,为阴性。反之,则表示硝酸盐已被还原,为阳性。
A.12.2 制法
A.12.2.1 糖发酵管按A.12.1所述成分配好后,校正pH至7.2±0.2,按0.5 %加入葡萄糖,分装于一个有倒
置小管的小试管内,115 ℃高压灭菌15 min。
A.12.2.2 其他各种糖发酵管可按A.12.1所述成分配好后,分装每瓶100 mL,115 ℃高压灭菌15 min。另
将各......
   
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