首页 购物车 询价
www.GB-GBT.com

[PDF] GB 4789.39-2013 - 自动发货， 英文版

标准搜索结果: 'GB 4789.39-2013'
标准号码内文价格美元第2步(购买)交付天数标准名称状态
GB 4789.39-2013 英文版 160 GB 4789.39-2013 3分钟内自动发货[PDF] 食品安全国家标准　食品微生物学检验　粪大肠菌群计数 有效

基本信息
标准编号 GB 4789.39-2013 (GB4789.39-2013)
中文名称 食品安全国家标准　食品微生物学检验　粪大肠菌群计数
英文名称 National Food Safety Standard-Food Microbiological Examination – Counting of fecal coliform
行业 国家标准
中标分类 C53
国际标准分类 07.100.30
字数估计 12,183
旧标准 (被替代) GB 4789.39-2008
起草单位 National Food Industry Standardization Technical Committee
归口单位 国家卫生和计划生育委员会
标准依据 国家卫计委公告2013年第7号
发布机构 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会
范围 本标准规定了食品中粪大肠菌群计数的方法。本标准适用于各类食品中粪大肠菌群的计数。

GB 4789.39-2013 National Food Safety Standard-Food Microbiological Examination – Counting of fecal coliform 中华人民共和国国家标准 食品安全国家标准 食品微生物学检验 粪大肠菌群计数 2013-11-29 发布 2014-06-01 实施 前言 本标准代替GB/T 4789.39-2008《食品卫生微生物学检验 粪大肠菌群计数》。 本标准与GB/T 4789.39-2008相比，主要修改如下： --修改了标准的中文名称； --修改了操作步骤； --增加了附录B。 食品安全国家标准 食品微生物学检验 粪大肠菌群计数 1 范围 本标准规定了食品中粪大肠菌群计数的方法。 本标准适用于各类食品中粪大肠菌群的计数。 2 术语和定义 2.1 粪大肠菌群 一群在44.5℃培养24 h～48 h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌 群来自人和温血动物粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能性。 3 技术要求设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： a) 恒温培养箱：36℃±1℃; b) 冰箱：2℃～5℃; c) 恒温水浴箱：44.5℃±0.2℃; d) 天平：感量 0.1 g; e) 均质器; f) 振荡器; g) 无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL刻度）、10 mL（具 0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头; h) 无菌锥形瓶：容量 500 mL; i) 无菌培养皿：直径 90 mm; j) pH计或 pH比色管或精密 pH试纸。 4 培养基及试剂 4.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉汤：见附录 A中 A.1。 4.2 EC肉汤（E.coli Broth）：见附录 A中 A.2。 4.3 无菌生理盐水：见附录 A中 A.3。 4.4 1 mol/L NaOH：见附录 A中 A.4。 4.5 1 mol/L HCl：见附录 A中 A.5。 5 检验程序 粪大肠菌群检验程序见图1。 图 1 粪大肠菌群 MPN 计数法检验程序 6 操作步骤 6.1 样品的稀释 6.1.1 固体和半固体样品：称取 25 g样品，置盛有 225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8 000 r/min～10 000 r/min均质 1 min～2 min，制成 1:10样品匀液，或置 225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍打 式均质器拍打 1 min～2 min，制成 1:10的样品匀液。 6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取样品 25 mL置盛有 225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶 内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10的样品匀液。 6.1.3 样品匀液的 pH值应在 6.5～7.5之间，必要时分别用 1 mol/L NaOH或 1 mol/L HCl调节。 6.1.4 用 1 mL无菌吸管或微量移液器吸取 1:10样品匀液 1 mL，沿管壁缓缓注入盛有 9 mL磷酸盐缓冲 液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1支 1 mL无菌 吸管反复吹打，使其混合均匀，制成 1:100的样品匀液。 6.1.5 根据对样品污染状况的估计，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释 1次，换用 1支 1 mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过 15 min。 6.2 初发酵试验 检 样 25g(mL)样品+ 225mL稀释液，均质 10倍系列稀释 月桂基硫酸盐胰蛋白胨 (LST)肉汤 36℃±1℃48h±2h 不产气 产气 EC肉汤 44.5℃±0.2℃24h±2h 不产气 产气 粪大肠菌群阴性管 粪大肠菌群阳性管 查MPN表 报告结果 每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月 桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1 mL（如接种量需要超过1 mL，则用双料LST肉汤），36℃±1 ℃培养24 h±2 h，观察倒管内是否有气泡产生，24 h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48 h±2 h。记录在24 h和48 h内产气的LST肉汤管数。未产气者为粪大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。 如采用多个稀释度，最终确定最适的三个连续稀释度方法参见附录B。 6.3 复发酵试验 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于预先升温至44.5℃的EC肉汤管中。将所有 接种的EC肉汤管放入带盖的44.5℃±0.2℃恒温水浴箱内，培养24 h±2 h，水浴箱的水面应高于肉汤培养基 液面，记录EC肉汤管的产气情况。产气管为粪大肠菌群阳性，不产气为粪大肠菌群阴性。 定期以已知为44.5℃产气阳性的大肠杆菌和44.5℃不产气的产气肠杆菌或其他大肠菌群细菌作阳性 和阴性对照。 6.4 粪大肠菌群 MPN 计数的报告 根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查粪大肠菌群最可能数（MPN）检索表（见附录C），报告每g (mL) 粪大肠菌群的MPN值。 附录 A 培养基和试剂 A.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉汤 A.1.1 成分 胰蛋白胨或胰酪胨 20.0 g 氯化钠 5.0 g 乳糖 5.0 g 磷酸氢二钾（K2HPO4） 2.75 g 磷酸二氢钾（KH2PO4） 2.75 g 月桂基硫酸钠 0.1 g 蒸馏水 1 000.0 mL A.1.2 制法 将A.1.1 成分溶解于蒸馏水中，校正pH至6.8±0.2。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL，121℃ 高压灭菌15 min。 A.2 EC肉汤（E.coli Broth） A.2.1 成分 胰蛋白胨或胰酪胨 20.0 g 3号胆盐或混合胆盐 1.5 g 乳糖 5.0 g 磷酸氢二钾（K2HPO4） 4.0 g 磷酸二氢钾（KH2PO4） 1.5 g 氯化钠 5.0 g 蒸馏水 1 000.0 mL A.2.2 制法 将 A.2.1 成分溶解于蒸馏水中，校正 pH至 6.9±0.1。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管 8 mL，121 ℃高压灭菌 15 min。 A.3 无菌生理盐水 A.3.1 成分 氯化钠 8.5 g 蒸馏水 1 000.0 mL A.3.2 制法 称取 8.5 g氯化钠溶于 1000 mL蒸馏水中，121℃高压灭菌 15 min。 A.4 1 mol/L NaOH A.4.1 成分 NaOH 40.0 g 蒸馏水 1 000.0 mL A.4.2 制法 称取40g 氢氧化钠溶于1000 mL蒸馏水中。 A.5 1 mol/L HCl A.5.1 成分 盐酸 90.0 mL 蒸馏水 1 000.0 mL A.5.2 制法 移取盐酸 90 mL，用蒸馏水稀释至 1000 mL。 附录 B 确定最适的三个连续稀释度方法 在10-1～10-5 五个连续稀释度中确定最适的三个连续稀释度方法如下： a）有一个以上的稀释度3管均为阳性。选择三管都是阳性结果的最高稀释度及其相连的两个更高稀 释度（见表B.1示例a、b，表中带下划线的数字对应的接种样品量为最终选取的最适稀释度，下 同）；在未选择的较高稀释度中还有阳性结果时，则顺次下移到下一个更高三个连续稀释度（见 表B.1示例c）；如果中间有某个稀释度没有阳性结果，但更高稀释度有阳性结果，则将此阳性结 果加到前一稀释度，进而确定三个连续稀释度（见表B.1示例d）；如果不能按照这个原则找到三 个合适的稀释度，则选择前一个较低的稀释度（见表B.1示例e）; b）没有任何一个稀释度3管均为阳性。如果没有一个稀释度的3管均为阳性，则选择三个最低稀释度 （见表B.1示例f）；如果在更高的没有被选择的稀释度还有阳性结果，将此阳性结果加到选择的 最高稀释度，进而确定三个连续稀释度（见表B.1示例g）。MPN计算阳性结果的选择示例见表B.1。 表 B.1 关于 MPN 计算阳性结果的选择示例 示例编 接种样品量 mL 选择的三个连续稀释度阳性 管数 MPN/g(mL) 0.1g 0.01 g 0.001 g 0.0001 g 0.00001 g a 3 3 1 0 0 3-1-0 430 b 2 3 1 0 0 3-1-0 430 c 3 2 2 1 0 2-2-1 280 d 3 2 2 0 1 2-2-1 280 e 3 3 3 3 2 3-3-2 110000 f 0 0 1 0 0 0-0-1 3 g 2 2 1 1 0 2-2-2 35 注：下划线表示应选择的连续稀释度。 附录 C 粪大肠菌群最可能数（MPN）表 每g(mL)检样中粪大肠菌群最可能数（MPN）的检索见表C.1。 表C.1 粪大肠菌群最可能数（MPN）检索表 阳性管数 MPN 95%置信区间 阳性管数 MPN 95%置信区间 0.1 0.01 0.001 下限 上限 0.1 0.01 0.001 下限 上限 0 0 0 < 3.0 - 9.5 2 2 0 21 4.5 42 0 0 1 3.0 0.15 9.6 2 2 1 28 8.7 94 0 1 0 3.0 0.15 11 2 2 2 35 8.7 94 0 1 1 6.1 1.2 18 2 3 0 29 8.7 94 0 2 0 6.2 1.2 18 2 3 1 36 8.7 94 0 3 0 9.4 3.6 38 3 0 0 23 4.6 94 1 0 0 3.6 0.17 18 3 0 1 38 8.7 110 1 0 1 7.2 1.3 18 3 0 2 64 17 180 1 0 2 11 3.6 38 3 1 0 43 9 180 1 1 0 7.4 1.3 20 3 1 1 75 17 200 1 1 1 11 3.6 38 3 1 2 120 37 420 1 2 0 11 3.6 42 3 1 3 160 40 420 1 2 1 15 4.5 42 3 2 0 93 18 420 1 3 0 16 4.5 42 3 2 1 150 37 420 2 ......