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| 标准编号 | GB 5009.141-2016 (GB5009.141-2016) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 食品中诱惑红的测定 | | 英文名称 | National food safety standard -- Determination of allura red in foods | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X09 | | 字数估计 | 6,62 | | 发布日期 | 2016-08-31 | | 实施日期 | 2017-03-01 | | 旧标准 (被替代) | GB/T 5009.141-2003 | | 标准依据 | 国家卫生和计划生育委员会公告2016年第11号 | GB 5009.141-2016: 食品安全国家标准 食品中诱惑红的测定
GB 5009.141-2016 英文名称: National food safety standard -- Determination of allura red in foods
1 范围
本标准规定了汽水、硬糖、糕点、冰淇淋中诱惑红的测定方法。
本标准适用于汽水、硬糖、糕点、冰淇淋中诱惑红的测定。
2 原理
诱惑红在酸性条件下被聚酰胺粉吸附,而在碱性条件下解吸附,再用纸色谱法进行分离后,与标准
比较定性、定量。
3 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1 甲醇(CH3OH)。
3.1.2 石油醚:沸程30℃~60℃。
3.1.3 硫酸(H2SO4):优级纯。
3.1.4 乙醇(CH3CH2OH)。
3.1.5 氨水(NH3·H2O):含量20%~25%。
3.1.6 柠檬酸(C6H8O7·H2O)。
3.1.7 钨酸钠(Na2WO4·2H2O)。
3.1.8 丁酮(C4H8O)。
3.1.9 柠檬酸钠(C6H5Na3O7)。
3.1.10 正丁醇(C4H10O)。
3.1.11 海砂。
3.1.12 甲酸(HCOOH)。
3.2 试剂配制
3.2.1 硫酸溶液(10%,体积分数):将1mL硫酸缓慢加入至8mL水中,混匀,冷却,用水定容至
10mL,混匀。
3.2.2 乙醇-氨溶液:取2mL的氨水,加70%(体积分数)乙醇至100mL。
3.2.3 乙醇溶液(50%,体积分数):量取50mL无水乙醇与50mL水混匀。
3.2.4 柠檬酸溶液(200g/L):称取20g柠檬酸,加水至100mL,溶解混匀。
3.2.5 钨酸钠溶液(100g/L):称取10g钨酸钠,加水至100mL,溶解混匀。
3.2.6 氨水溶液(1%,体积分数):量取1mL氨水,加水至100mL,混匀。
3.2.7 柠檬酸钠溶液(2.5%,体积分数):称取2.5g柠檬酸,加水至100mL,溶解混匀。
3.2.8 甲醇-甲酸溶液(6∶4,体积分数):量取甲醇60mL,甲酸40mL,混匀。
3.2.9 展开剂1:丁酮+丙醇+水+氨水(7+3+3+0.5)。
3.2.10 展开剂2:正丁醇+无水乙醇+1%氨水溶液(6+2+3)。
3.2.11 展开剂3:2.5%柠檬酸钠+氨水+乙醇(8+1+2)。
3.3 标准品
诱惑红(CAS:25956-17-6)。
3.4 标准溶液配制
3.4.1 诱惑红标准贮备液配制:准确称取诱惑红0.025g(精确到0.0001g,按诱惑红实际纯度折算为纯
品后的质量),用水溶解并定容至25mL,诱惑红浓度为1.0mg/mL。
3.4.2 诱惑红标准使用液(0.1mg/mL):吸取诱惑红的标准贮备液5.0mL于50mL容量瓶中,加水稀
释到50mL。
4 仪器和设备
4.1 可见分光光度计。
4.2 电子天平:感量为0.001g和0.0001g。
4.3 微量注射器:10μL、50μL。
4.4 展开槽。
4.5 电吹风机。
4.6 离心机。
4.7 恒温水浴锅。
5 分析步骤
5.1 试样制备
5.1.1 汽水:将样品加热去二氧化碳后,称取10g(精确到0.001g)样品于烧杯中,然后用20%柠檬酸
调pH呈酸性,加入0.5g~1.0g聚酰胺粉吸附色素,将吸附色素的聚酰胺粉全部转到漏斗中过滤,用
pH4的酸性热水洗涤多次(约200mL),以洗去糖等物质。若有天然色素,用甲醇-甲酸溶液洗涤1次~
3次,每次20mL,至洗液无色为止。再用70℃的水多次洗涤至流出液中性。洗涤过程应充分搅拌然后
用乙醇-氨水溶液分次解吸色素,收集全部解吸液,于水浴上驱除氨,蒸发至2mL左右,转入5mL的容
量瓶中,用50%的乙醇分次洗涤蒸发皿,洗涤液并入5mL的容量瓶中,用50%的乙醇定容至刻度。此
液留作纸色谱用。
5.1.2 硬糖:称取10g(精确到0.001g)的已粉碎的样品,加30mL的水,温热溶解,若样品溶液的pH
较高,用柠檬酸溶液(3.2.4)调至pH4左右。加入0.5g~1.0g聚酰胺粉吸附色素,将吸附色素的聚酰
胺粉全部转到漏斗中过滤,用pH4的酸性热水洗涤多次(约200mL),以洗去糖等物质。若有天然色
素,用甲醇-甲酸溶液洗涤1次~3次,每次20mL,至洗液无色为止。再用70℃的水多次洗涤至流出液
中性。洗涤过程应充分搅拌然后用乙醇-氨水溶液分次解吸色素,收集全部解吸液,于水浴上驱除氨,蒸
发至2mL左右,转入5mL的容量瓶中,用50%的乙醇分次洗涤蒸发皿,洗涤液并入5mL的容量瓶
中,用50%的乙醇定容至刻度。此液留作纸色谱用。
5.1.3 糕点:称取10g(精确到0.001g)已粉碎的样品,加入30mL石油醚提取脂肪,共提三次,然后用
电吹风吹干,倒入漏斗中,用乙醇-氨解吸色素,解吸液于水浴上蒸发至20mL,加入1mL的钨酸钠溶液
沉淀蛋白,真空抽滤,用乙醇-氨解吸滤纸上的诱惑红,然后将滤液于水浴上挥去氨,调pH呈酸性,加
入0.5g~1.0g聚酰胺粉吸附色素,将吸附色素的聚酰胺粉全部转到漏斗中过滤,用pH4的酸性热水
洗涤多次(约200mL),以洗去糖等物质。若有天然色素,用甲醇-甲酸溶液洗涤1次~3次,每次
20mL,至洗液无色为止。再用70℃的水多次洗涤至流出液中性。洗涤过程应充分搅拌然后用乙醇-
氨水溶液分次解吸色素,收集全部解吸液,于水浴上驱除氨,蒸发至2mL左右,转入5mL的容量瓶中,
用50%的乙醇分次洗涤蒸发皿,洗涤液并入5mL的容量瓶中,用50%的乙醇定容至刻度。此液留作
纸色谱用。
5.1.4 冰淇淋:称取10g(精确到0.001g)已均匀的试样于烧杯中,加入20g海沙15mL石油醚提取脂
肪,提取2次,倾去石油醚,然后在50℃的水浴上挥去石油醚,再加入乙醇-氨解吸液解吸诱惑红,解吸
液倒入100mL的蒸发皿中,直至解吸液无色。将解吸液在水浴上挥去乙醇,使体积约为20mL时,加
入1mL硫酸(1+10),1mL钨酸钠溶液沉淀蛋白,放置2min,然后用乙醇-氨调至pH呈碱性,将溶液
转入离心管中,5000r/min离心15min,倾出上清液,于水浴挥去乙醇,然后用柠檬酸溶液调pH呈酸
性,加入0.5g~1.0g聚酰胺粉吸附色素,将吸附色素的聚酰胺粉全部转到漏斗中过滤,用pH4的酸性
热水洗涤多次(约200mL),以洗去糖等物质。若有天然色素,用甲醇-甲酸溶液洗涤1次~3次,每次
20mL,至洗液无色为止。再用70℃的水多次洗涤至流出液中性。洗涤过程应充分搅拌然后用乙醇-
氨水溶液分次解吸色素,收集全部解吸液,于水浴上驱除氨,蒸发至2mL左右,转入5mL的容量瓶中,
用50%的乙醇分次洗涤蒸发皿,洗涤液并入5mL的容量瓶中,用50%的乙醇定容至刻度。此液留作
纸色谱用。
5.2 定性
取层析纸,在距底边2cm起始线上分别点3μL~10μL的样品处理液、1μL诱惑红标准使用液,
分别挂于盛有展开剂1、展开剂2、展开剂3的展开槽中,用上行法展开,待溶剂前沿展至15cm处,将滤
纸取出空气中凉干,与标准斑比较定性。
5.3 定量
5.3.1 标准曲线的制备
吸取0.0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL诱惑红标准使用液,分别置于10mL比色
管中,各加水稀释到刻度,浓度分别为0μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、6μg/mL、8μg/mL、10μg/mL。
用1mL比色......
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