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| 标准编号 | GB 5009.248-2016 (GB5009.248-2016) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 食品中叶黄素的测定 | | 英文名称 | Determination of lutein in milk powder -- HPLC-UV method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X09 | | 字数估计 | 8,866 | | 发布日期 | 2016-08-31 | | 实施日期 | 2017-03-01 | | 旧标准 (被替代) | GB/T 23209-2008 | | 标准依据 | 国家卫生和计划生育委员会公告2016年第11号 | GB 5009.248-2016: 食品安全国家标准 食品中叶黄素的测定
GB 5009.248-2016 英文名称: Determination of lutein in milk powder -- HPLC-UV method
中华人民共和国国家标准
1 范围
本标准规定了食品中叶黄素的液相色谱测定方法。
本标准适用于婴幼儿配方奶粉、乳品、冷冻饮品、米面制品、焙烤食品、果酱、果冻和饮料中叶黄素的液相色谱测定。
5 分析步骤
注:由于叶黄素对光敏感,除非另行说明,所有试验操作应在无500nm以下紫外光的黄色光源或红色光源环境中进行。
5.1 试样制备
将一定数量的样品按要求经过粉碎、均质、缩分后,储存于样品瓶中。制备好的试样应充氮密封后
置于-20℃或以下的冰箱中保存。
5.2 提取
5.2.1 脂肪含量高的食品(如婴幼儿配方奶粉、乳粉、冰淇淋、焙烤坚果类食品等)
准确称取2g(精确至0.01g)均匀试样于50mL聚丙烯离心管中,加入约0.2gBHT(3.1.6)和
10mL乙醇(3.1.4),混匀,加入10mL10%氢氧化钾溶液(3.2.1),涡旋振荡1min混匀,室温避光振荡
皂化30min,以10mL萃取溶剂(3.2.3)避光涡旋振荡提取3min,4500r/min离心3min,重复提取
2次,合并提取液,以10mL水洗涤,4500r/min离心3min分层,重复洗涤1次,合并有机相于室温减
压浓缩至近干,以0.1% BHT乙醇溶液(3.2.4)涡旋振荡溶解残渣并定容至5mL,过0.45μm 滤膜(3.6),供液相色谱测定。
液态奶:准确称取10g(精确至0.01g)样品于50mL聚丙烯离心管中,加入约0.2gBHT(3.1.6)和
10mL乙醇(3.1.4),混匀,加入2mL20%的氢氧化钾溶液(3.2.2),涡动1min混匀,室温避光振荡皂化
30min,以10mL萃取溶剂(3.2.3)避光涡旋振荡提取3min,4500r/min离心3min,重复提取2次,合
并提取液,以10mL水洗涤,4500r/min离心3min分层,重复洗涤1次,合并有机相于室温减压浓缩
至近干,以0.1%BHT乙醇溶液(3.2.4)涡旋振荡溶解残渣并定容至25mL,过0.45μm滤膜(3.6),供液相色谱测定。
5.2.2 其他食品(如米、面制品、果酱等)
准确称取5g(精确至0.01g)均匀样品置于50mL聚丙烯离心管中,以10mL萃取溶剂(3.2.3)避
光涡旋振荡提取3min,4500r/min离心3min,重复提取2次,合并提取液,于室温减压浓缩至近干,
以3mL萃取溶剂(3.2.3)涡旋振荡溶解,重复操作1次,合并萃取溶剂,混匀,待净化。
将上述溶液以约1mL/min的流速过已活化的中性氧化铝固相萃取小柱(3.5),用3mL萃取溶剂
(3.2.3)洗脱,合并流出液与洗脱液,于室温减压浓缩至近干,以0.1%BHT乙醇溶液(3.2.4)涡旋振荡溶
解残渣并定容至10mL,过0.45μm滤膜(3.6),供液相色谱测定。
5.3 仪器参考条件
5.3.1 色谱柱:C30色谱柱,5μm,250mm×4.6mm(内径)或相当者;
5.3.2 柱温:30℃;
5.3.3 流动相:甲醇/水(88+12,体积比,含0.1% BHT)-甲基叔丁基醚(含0.1% BHT),梯度洗脱,
0min~18min,甲醇/水由100%变换至10%;18.1min,甲醇/水由10%变换至100%,保留10min。
5.3.4 流速:1.0mL/min;
5.3.5 检测波长:445nm;
5.3.6 进样量:50μL。
5.4 标准曲线的制作
将标准系列工作液分别注入液相色谱中,测定相应的峰面积,以标准工作液的浓度为横坐标,以峰
面积为纵坐标,绘制标准曲线。
5.5 试样溶液的测定
待测样液中叶黄素的响应值应在仪器线性响应范围内,否则应适当稀释或浓缩。标准工作液与待
测样液等体积进样。根据标准溶液色谱峰的保留时间和峰面积,对试样溶液的色谱峰根据保留时间进
行定性(待测样品中化合物色谱峰的保留时间与标准溶液相比变化范围应在±2.5%之内),外标法定
量。平行测定次数不少于两次。叶黄素标准溶液液相色谱图参见附录B图B.1。
注:由于在样品的提取与分析过程中,温度、光照等原因均可使反式结构的叶黄素发生异构化,转化为顺式叶黄素。
可按以下步骤获得顺式叶黄素:以乙醇为溶剂,配制800μg/L的叶黄素标准溶液50mL,加入2mL碘的乙醇
溶液(3.2.5),摇匀,混合液在日光或日光灯下放置30min。可获得顺式结构的叶黄素。由此制备的含顺式结构
的叶黄素在检测时可作为对照品。经光碘异构化的反式叶黄素标准溶液色谱图参见附录B图B.2。
7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。
8 其他本方法的检出限:婴幼儿配方奶粉、乳粉、冰淇淋、焙烤坚果类等食品,当取样量为2g、定容体积为
5mL时,检出限为3μg/100g;液态奶等,当取样量为10g、定容体积为25mL时,检出限为3μg/100g;
米、面制品、果酱等食品,当取样量为5g、定容体积为10mL时,检出限为3μg/100g。
本方法的定量限:婴幼儿配方奶粉、乳粉、冰淇淋、焙烤坚果类等食品,当取样量为2g、定容体积为
5mL时,定量限为10μg/100g;液态奶等当取样量......
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