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GB 5009.89-2023

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基本信息
标准编号 GB 5009.89-2023 (GB5009.89-2023)
中文名称 食品安全国家标准 食品中烟酸和烟酰胺的测定
英文名称 (National food safety standards Determination of acesulfame potassium in food)
行业 国家标准
中标分类 X09
字数估计 7,759
发布日期 2023-09-06
实施日期 2024-03-06
发布机构 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局
范围 本标准规定了食品中乙酰磺胺酸钾的测定方法。本标准适用于乳及乳制品、冷冻饮品、水果制品、蔬菜制品、食用菌和藻类、豆类制品、坚果与籽类、糖果、粮食制品、焙烤食品、调味品、饮料、酒类、果冻中乙酰磺胺酸钾的测定。

GB 5009.89-2023 中文版: 食品安全国家标准 食品中烟酸和烟酰胺的测定
GB 5009.89-2023 英文版: (National food safety standards Determination of nicotinic acid and nicotinamide in food)
中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准
食品安全国家标准
食品中烟酸和烟酰胺的测定
2023-09-06发布
2024-03-06实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局 发 布
1 范围
本标准规定了食品中烟酸和烟酰胺的测定方法。
本标准第一法适用于调制乳粉、特殊膳食用食品(不包括乳蛋白部分水解配方、乳蛋白深度水解配
方或氨基酸配方以及氨基酸代谢障碍配方的特殊医学用途婴儿配方食品)和特殊用途饮料中烟酸和烟
酰胺的测定,第二法适用于食品中烟酸(或烟酰胺)的测定。
第一法 高效液相色谱法
2 原理
样品经酶解、沉淀蛋白质等前处理后,在弱酸性环境下超声波振荡提取,以C18色谱柱分离,用紫外
检测器检测,根据色谱峰的保留时间定性,外标法定量,计算试样中烟酸和烟酰胺含量。
3 试剂和材料
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1 盐酸(HCl):优级纯。
3.1.2 氢氧化钠(NaOH):优级纯。
3.1.3 甲醇(CH3OH):色谱纯
3.1.4 异丙醇(C3H8O):色谱纯。
3.1.5 庚烷磺酸钠(C7H15NaO3S):色谱纯。
3.1.6 淀粉酶:酶活力≥1.5U/mg。
3.2 试剂配制
3.2.1 盐酸溶液(5.0mol/L):量取415mL盐酸,加水定容至1000mL。
3.2.2 盐酸溶液(0.1mol/L):吸取8.3mL盐酸,加水定容至1000mL。
3.2.3 氢氧化钠溶液(5.0mol/L):称取200g氢氧化钠,加水定容至1000mL。
3.2.4 氢氧化钠溶液(0.1mol/L):吸取20mL氢氧化钠溶液(5.0mol/L),加水定容至1000mL。
3.3 标准品
3.3.1 烟酸(C6H5NO2,CAS号:59-67-6):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
3.3.2 烟酰胺(C6H6N2O,CAS号:98-92-0):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标
准品。
3.4 标准溶液配制
3.4.1 烟酸和烟酰胺标准储备溶液(1.000mg/mL):将烟酸(或烟酰胺)标准品置入含五氧化二磷的干
燥器中,干燥过夜。准确称取各0.1g(精确到1mg),用0.1mol/L盐酸溶解,定容至100mL。
2℃~8℃冷藏可保存1个月。
3.4.2 烟酸和烟酰胺标准混合中间液(100.0μg/mL):准确吸取烟酸和烟酰胺标准储备液各10.0mL
于100mL容量瓶中,加水定容至刻度,混匀。2℃~8℃冷藏可保存1个月。
3.4.3 烟酸和烟酰胺标准混合工作液:分别准确吸取标准混合中间液1.0mL、2.0mL、5.0mL、10.0mL、
20.0mL于100mL容量瓶中,加水定容至刻度,混匀,得到质量浓度分别为1.0μg/mL、2.0μg/mL、
5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL的标准混合工作液。临用现配。
4 仪器和设备
4.1 高效液相色谱仪:配紫外检测器或二极管阵列检测器。
4.2 天平:感量分别为0.1mg和0.01g。
4.3 恒温培养箱:30℃~80℃。
4.4 超声设备。
4.5 pH计:精度为0.1。
4.6 粉碎机。
5 分析步骤
5.1 样品前处理
5.1.1 试样制备
样品预处理:取有代表性的样品至少200g,块状或颗粒状样品用粉碎机粉碎,粉末状、糊状或液体
样品充分混匀,置于密闭的容器内。
5.1.2 淀粉类和含淀粉的食品
5.1.2.1 称取混合均匀固体试样约5.0g(精确到0.01g),置于150mL锥形瓶中,加入约25mL
45℃~50℃的水,加入约0.5g淀粉酶,摇匀后向锥形瓶中充氮,盖上塞,置于50℃~60℃的培养箱内
酶解约30min,取出冷却至室温。
5.1.2.2 称取混合均匀液体试样约20.0g(精确到0.01g),置于150mL锥形瓶中,加入约0.5g淀粉
酶,摇匀后向锥形瓶中充氮,盖上塞,置于50℃~60℃的培养箱内酶解约30min,取出冷却至室温。
5.1.3 不含淀粉的食品
5.1.3.1 称取混合均匀固体试样约5.0g(精确到0.01g),置于150mL锥形瓶中,加入约25mL
45℃~50℃ 的水,置于超声设备中振荡约10min以上充分溶解,静置5min~10min,冷却至室温。
5.1.3.2 称取混合均匀液体试样约20.0g(精确到0.01g),置于150mL锥形瓶中,置于超声设备中振
荡约10min以上,充分溶解,静置5min~10min,冷却至室温。
5.1.4 试样提取
待试样溶液降至室温后,用5.0mol/L盐酸溶液和0.1mol/L盐酸溶液调节试样溶液的pH 至
1.7±0.1,放置约2min后,再用5.0mol/L氢氧化钠溶液和0.1mol/L氢氧化钠溶液调节试样溶液的
pH至4.5±0.1,置于50℃水浴超声设备中振荡10min以上,充分提取,冷却至室温后转至100mL(V)
容量瓶中,用水反复冲洗锥形瓶,洗液合并于100mL(V)容量瓶中,用水定容至刻度后混匀,经滤纸过
滤。滤液再经0.45μm微孔滤膜加压过滤,用样品瓶收集,即为试样测定液。
注1:必要时,试样测定液用水进行适当的稀释(f),使试样测定液中烟酸和烟酰胺质量浓度在1μg/mL~20μg/
mL范围内。
注2:推荐充氮条件:压力0.055MPa~0.062MPa氮气充氮30s。
5.2 液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下:
a) 液相色谱柱:C18(粒径5μm,250mm×4.6mm)或等效柱。
b) 流动相:甲醇70mL、异丙醇20mL、庚烷磺酸钠1g,用910mL水溶解并混匀后,用盐酸调节
pH至2.1±0.1。
c) 柱温:25℃±0.5℃。
d) 流速:1.0mL/min。
e) 进样量:20μL。
f) 紫外检测波长:261nm。
5.3 标准工作曲线的制备
按照已经确立的色谱条件,将烟酸及烟酰胺混合标准系列测定液依次按上述推荐色谱条件进行测
定(标准样品色谱图见附录A中图A.1)。记录各组分的色谱峰面积,以标准测定液的质量浓度为横坐
标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。
5.4 试样溶液的测定
将试样测定液按上述推荐色谱条件进样测定。记录各组分色谱峰面积,根据标准曲线计算出试样
测定液中烟酸及烟酰胺各组分的质量浓度ρ。
6 分析结果的表述
6.1 试样烟酸或烟酰胺含量计算
7 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
8 其他
固体样品:当称样量为5g时,烟酸检出限为30μg/100g,定量限为100μg/100g,烟酰胺检出限为
40μg/100g,定量限为120μg/100g。
液体样品:当称样量为20g时,烟酸检出限为7.5μg/100g,定量限为25μg/100g,烟酰胺检出限
为10μg/100g,定量限为30μg/100g。
第二法 微 生 物 法
9 原理
烟酸和烟酰胺是植物乳植杆菌(Lactiplantibacillusplantarum)生长所必需的营养素,在烟酸测定
培养基中,植物乳植杆菌的生长与烟酸(或烟酰胺)的含量呈相关性,根据烟酸(或烟酰胺)含量与透光率
(或吸光度)的标准曲线计算出试样中烟酸(或烟酰胺)含量。
10 试剂和材料
除非另有规定,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水或二级水。
10.1 菌株
植物乳植杆菌(Lactiplantibacillusplantarum)(原植物乳杆菌,Lactobacillusplantarum)ATCC
8014或等效菌株。
10.2 培养基
10.2.1 乳酸杆菌琼脂培养基:见附录B中B.1。
10.2.2 乳酸杆菌肉汤培养基:见附录B中B.2。
10.2.3 烟酸测定用培养基:见附录B中B.3。
注:可使用商品化的合成培养基,按照说明书操作。
10.3 试剂
10.3.1 无水乙醇(C2H5OH)。
10.3.2 硫酸(H2SO4):95%~98%。
10.3.3 氢氧化钠(NaOH)。
10.3.4 氯化钠(NaCl)。
10.4 试剂配制
10.4.1 乙醇溶液(体积分数为25%):量取250mL无水乙醇,加水定容至1000mL。
10.4.2 硫酸溶液A(10mol/L):量取560mL硫酸,加入水中,稀释至1000mL。
10.4.3 硫酸溶液B(0.5mol/L):量取50mL硫酸溶液A(10mol/L),加入水中,稀释至1000mL。
10.4.4 氢氧化钠溶液A(10mol/L):称取400g氢氧化钠,加水溶解并稀释至1000mL。
10.4.5 氢氧化钠溶液 B(0.1 mol/L):吸取10 mL 氢氧化钠溶液 A(10 mol/L),加水稀释至
1000mL。
10.4.6 无菌生理盐水(8.5g/L):称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中,分装于具塞试管,每管
10mL,121℃高压灭菌15min。
10.5 标准品
10.5.1 烟酸(C6H5NO2,CAS号:59-67-6):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。
10.5.2 烟酰胺(C6H6N2O,CAS号:98-92-0):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标
准品。
10.6 标准溶液配制
10.6.1 烟酸(或烟酰胺)标准储备液(50μg/mL):将烟酸(或烟酰胺)标准品置于含五氧化二磷的干燥
器中,干燥过夜。按纯度称取,使烟酸(或烟酰胺)含量为50.0mg(精确至0.001g),用乙醇溶液(25%)
溶解移入1000mL容量瓶,定容至刻度。
10.6.2 烟酸(或烟酰胺)标准中间液(500ng/mL):吸取1.0mL烟酸(或烟酰胺)标准储备液(50μg/mL)
至100mL容量瓶,用乙醇溶液(25%)定容至刻度。
10.6.3 烟酸(或烟酰胺)标准工作液:分两个质量浓度,高质量浓度溶液的质量浓度为10ng/mL;低质
量浓度溶液的质量浓度为5ng/mL。从中间液中(500ng/mL)吸取2次,各2mL,分别移入100mL和
200mL容量瓶,用水定容至刻度。
注:配制标准溶液使用棕色容量瓶,配制后的标准溶液要用棕色试剂瓶2℃~8℃冷藏于冰箱内。标准储备液和中
间液保存期6个月,标准使用液临用现配。
11 仪器和设备
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:
11.1 分析天平:感量为0.1mg。
11.2 离心机。
11.3 涡旋混合器。
11.4 pH计:精度为0.01。
11.5 恒温培养箱:36℃±1℃。
11.6 分光光度计:540nm~660nm。
11.7 酶标仪:540nm~660nm。
11.8 冰箱:2℃~8℃。
11.9 无菌微孔板。
11.10 定量滤纸:直径90mm。
11.11 试管:18mm×180mm。
11.12 容量瓶:容量100mL、200mL、250mL、500mL。
11.13 单刻度移液管:1mL、5mL、10mL。
11.14 刻度吸管:5mL(具0.1mL刻度)。
11.15 玻璃漏斗:直径100mm。
11.16 锥形瓶:容量250mL。
11.17 烧杯:容量100mL。
11.18 分液器:0mL~10mL。
11.19 微量移液器:1000μL,200μL。
11.20 无菌离心管:1.5mL。
11.21 针头过滤器:孔径0.22μm。
注:清洗后的玻璃器皿和金属器具应在250℃下干热1h~2h。
12 分析步骤
12.1 测试菌悬液制备
12.1.1 将植物乳植杆菌菌株活化后,用接种针穿刺接种到乳酸杆菌琼脂培养基上,36℃±1℃培养
16h~24h,再转种2代~3代以增强活力。以斜面培养物方式置冰箱冷藏,可保存1个月。
12.1.2 将24h内活化后的菌株转种至已灭菌的乳酸杆菌肉汤中,36℃±1℃培养16h~24h。以
3000r/min~5000r/min离心5min,弃去上清液,加入10mL生理盐水,用涡旋混合器振荡该悬液,
再离心约5min,弃去上清液。如前操作清洗2次~3次后,再加10mL生理盐水,振荡混匀。吸取适
量该菌悬液于10mL生理盐水中,混匀制成测试菌悬液。
12.1.3 以生理盐水做空白,用分光光度计于550nm波长下测定测试菌悬液透光率(%T),调整上述
菌液加入量,使测试菌悬液透光率在60%T~80%T。
12.2 试样提取
块状、颗粒状试样需粉碎;乳粉、米粉等粉状试样需混匀;果蔬、肉、蛋、鱼、动物内脏等需制成食糜;
半固体食品等试样需匀浆混匀;液体试样用前振摇混合。
12.2.1 固态试样:准确称取(精确至0.001g)试样于锥形瓶中,其中新鲜果蔬试样2g~5g;谷类、豆
类、坚果类、内脏、生肉、干制试样0.2g~1g;乳粉、米粉等试样2g~3g......
   
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