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| 标准编号 | GB 5413.20-2013 (GB5413.20-2013) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定 | | 英文名称 | National Food Safety Standard Determination of choline in infant foods and dairy products | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X82 | | 国际标准分类 | 67.100.10 | | 字数估计 | 11,138 | | 旧标准 (被替代) | GB 5413.20-1997 | | 起草单位 | National Food Industry Standardization Technical Committee | | 归口单位 | 国家卫生和计划生育委员会 | | 标准依据 | 国家卫计委公告2013年第7号 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | | 范围 | 本标准规定了婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定方法。本标准适用于婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定。 | GB 5413.20-2013: 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定
GB 5413.20-2013 英文名称: National Food Safety Standard Determination of choline in infant foods and dairy products
中华人民共和国国家标准
1 范围
本标准规定了婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定方法。
本标准适用于婴幼儿食品和乳品中胆碱的测定。
第一法 酶比色法
5 分析步骤
5.1 试样制备
5.1.1 固体试样称取 5 g（精确到 0.01 g）混合均匀的试样，于 100 mL的锥形瓶中，加入 30 mL盐酸溶液（3.2.1）。
5.1.2 液体试样称取 20 g（精确到 0.01 g）混合均匀的试样，于 100 mL的锥形瓶中，加入 10 mL盐酸溶液（3.2.2）。
5.1.3 水解将装有试样的容器放在 70℃水浴中，加塞混匀，水解 3 h（每隔 30 min振摇一次），冷却。用氢
氧化钠溶液调 pH为 3.5～4.0，转入 50 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。
5.1.4 过滤过滤水解液（5.1.3）。滤液应是澄清的，否则，用 0.45 μm的滤膜再次过滤。滤液放在 4℃的冰箱中可以保存 3 d。
5.2 测定
5.2.1 标准曲线的制作
分别吸取2 mL、4 mL、6 mL、8 mL胆碱氢氧化物标准工作溶液于10 mL的容量瓶中，用蒸馏水稀
释至刻度。准备6支试管，一个试管用作试剂空白（A），另五支试管由1至5编号，分别用于标准溶液
和标准溶液的四个稀释度。按表1加入试剂。
5.2.2 试样的测定
将每个试样准备 2支试管（B，C），按表 2加入试剂。
5.2.3 比色测定
将试样及标准系列溶液从水浴中取出，冷却至室温。在波长 505 nm处，用蒸馏水作空白，测定
吸光值。以胆碱标准溶液的浓度为横坐标，以标准溶液的吸光值减去试剂空白的吸光值为纵坐标，制作标准曲线。
6 分析结果的表述
6.1 净吸光值的计算
通常新鲜配制的试剂会产生轻微颜色，且由于水解作用滤液也不是无色的，为了除去这些干扰因素，
应该从总吸光值中减去各自的空白值（管A和管B）。
6.2 胆碱含量的计算
在标准曲线上查出净吸光值的位置，并记下相应的浓度c，以每100 g试样中胆碱氢氧化物的毫克
数表示胆碱的含量（X），单位为（mg/100 g），试样中的胆碱氢氧化物含量按公式（2）计算：
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留整数位。
7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 8%。
8 其他方法检出限为 1 mg/100g，定量限为 3 mg/100g。
第二法 雷氏盐分光光度法
9 原理
试样中的胆碱用氢氧化钡-甲醇-三氯甲烷混合溶液水解抽提，经弗罗里硅土层析净化，与雷纳克
铵盐溶液形成粉红色的胆碱雷纳克铵盐，用丙酮溶解洗脱，于 526 nm测定吸收值。在一定浓度范围
内，胆碱雷纳克铵盐颜色的深浅与其含量成正比。
10 试剂和材料
注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的三级水。
10.1 试剂
10.1.1 弗罗里硅土：100目～200目，650℃活化。
10.1.2 甲醇（CH3OH）。
10.1.3 三氯甲烷（CHCl3）。
10.1.4 氢氧化钡[Ba（OH）2·8H2O]。
10.1.5 冰乙酸（CH3COOH）。
10.1.6 乙酸甲酯（C3H6O2）。
10.1.7 丙酮(CH3COCH3)。
10.1.8 雷纳克铵盐(C4H10CrN7S4)。
10.2 试剂配制
10.2.1 饱和氢氧化钡-甲醇-三氯甲烷溶液：称取 6 g氢氧化钡溶于 100 mL甲醇中， 放入超声波中
溶解后，加入 10 mL三氯甲烷，混匀。
10.2.2 冰乙酸-甲醇溶液(1+10)：1体积冰乙酸与 10体积甲醇混合。
10.2.3 雷纳克铵盐溶液：称取 0.25 g雷纳克铵盐，加入 10 mL水中，放入超声波中溶解后过滤，临用时配制。
10.3 标准品胆碱酒石酸氢盐(C9H19NO7)：纯度≥99%。
10.4 标准溶液配制
胆碱酒石酸氢盐标准溶液(1 g/L)：准确称取在 102℃±2℃烘至恒重的胆碱酒石酸氢盐 0.1000 g，
用蒸馏水定容至 100 mL容量瓶中。冷藏于 4℃±2℃冰箱中，保存不超过一周。
11 仪器和设备
11.1 天平：感量为 0.01 g和 0.1 mg。
11.2 回流装置：250 mL磨口锥形瓶及回流装置。
11.3 恒温水浴锅：温度可控制在 79℃±2℃。
11.4 层析柱：长约 10 cm、内径 1 cm的带 50 mL杯口的玻璃柱。
11.5 分光光度计。
12 分析步骤
12.1 试样制备
称取固体试样 10 g(精确到 0.01 g)，称取液体试样 20 g(精确到 0.01 g)于磨口锥形瓶中，加入 50 mL
氢氧化钡-甲醇-三氯甲烷提取液。混合均匀后接入回流装置，于 79±2℃的水浴锅内水解抽提 4 h。每
隔 1 h震荡一次，以避免试样结块。水解抽提结束后，取出锥形瓶冷却至室温，过滤。滤渣用冰乙酸-
甲醇混合液洗涤 3次～4次，洗液一并收集于 100 mL容量瓶中。用甲醇定容至刻度，混匀。
12.2 标准曲线的绘制
12.2.1 层析柱制备
用乳胶管连接层析柱与滴头，用少量脱脂棉堵住层析柱底部，倒入约 5 cm左右高的弗罗里硅土，用甲醇浸湿，备用。
12.2.2 层析
分别吸取胆碱标准溶液 0 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL注入层析柱中，当溶液
完全进入柱床后，依次用 5 mL和 10 mL甲醇，20 mL乙酸甲酯洗涤层析柱。再加入 5 mL雷纳克铵盐
溶液，用适量的冰乙酸洗去过量的雷纳克铵盐，直至层析柱上无雷纳克铵盐附着处呈现硅土原有的白
色。用丙酮洗脱粉红色的胆碱雷纳克铵盐，收集于 10 mL的容量瓶中，用丙酮定容（如果洗脱液混浊
需过 0.45 μm的滤膜）。在波长 526 nm处测定溶液的吸光值，以胆碱酒石酸氢盐含量为横坐标（mx），
吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
12.3 试样的测定
吸取10 mL试样水解液（12.1）于层析柱......
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