路径: 主页 > HJ > 第16页 > HJ 1017-2019 | 标准编号 | HJ 1017-2019 (HJ1017-2019) | | 中文名称 | 水质 联苯胺的测定 高效液相色谱法 | | 英文名称 | Water quality - Determination of benzidine - High performance liquid chromatography | | 行业 | 环保行业标准 | | 中标分类 | Z16 | | 国际标准分类 | 13.060 | | 字数估计 | 10,136 | | 发布日期 | 2019 | | 实施日期 | 2019-09-01 | | 发布机构 | 生态环境部 | HJ 1017-2019: 水质 联苯胺的测定 高效液相色谱法
HJ 1017-2019 英文名称: Water quality - Determination of benzidine - High performance liquid chromatography
中华人民共和国国家环境保护标准
水质 联苯胺的测定
高效液相色谱法
发 布 生 态 环 境 部
1 适用范围
本标准规定了测定水中联苯胺的高效液相色谱法。
本标准适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中联苯胺的测定。
当取样体积为 150 ml，试样定容体积为 2.0 ml，进样体积为 40 μl 时，方法检出限为
0.006 μg/L，测定下限为 0.024 μg/L。
2 规范性引用文件
本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本
标准。
HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范
HJ/T 164 地下水环境监测技术规范
3 方法原理
样品通过阳离子交换固相萃取柱，联苯胺被吸附，用乙酸溶液将联苯胺锁定在固相萃取
柱上，用甲醇淋洗除去杂质，再用氨水甲醇溶液进行洗脱，洗脱液浓缩定容后，用具有荧光
检测器的高效液相色谱分离检测。根据保留时间定性，外标法定量。
4 试剂和材料
除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为不含有机物的纯
水。
4.1 盐酸：ρ（HCl）=1.19 g/ml。
4.2 冰醋酸：ρ（CH3COOH）=1.05 g/ml。
4.3 氨水：ρ（NH3·H2O）=0.91 g/ml，优级纯。
4.4 氢氧化钠（NaOH）。
4.5 硫代硫酸钠（Na2S2O3）。
4.6 乙酸铵(CH3COONH4)：色谱纯。
4.7 联苯胺： w ≥99.6%。
4.8 甲醇（CH3OH）：液相色谱纯。
4.9 乙醇（CH3CH2OH）。
4.10 乙腈（CH3CN）：液相色谱纯。
4.11 盐酸溶液：1+1。
4.12 甲醇水溶液：1+1。
4.13 乙酸铵溶液：c（CH3COONH4）=0.01 mol/L。
称取 0.77 g 乙酸铵（4.6），用水溶解后，稀释定容至 1 L。
4.14 乙酸溶液：3+97。
量取 3 ml 冰醋酸（4.2）和 97 ml 水，混匀后备用。
4.15 氢氧化钠溶液：c（NaOH）=1 mol/L。
称取 4 g 氢氧化钠（4.4），用水溶解后，稀释至 100 ml。
4.16 氨水甲醇溶液：5+95。
量取 5 ml 氨水（4.3）和 95 ml 甲醇（4.8），混匀后备用。
4.17 联苯胺标准贮备液：ρ=1000 μg/ml。
称取 0.050 g（精确到 0.1 mg）联苯胺（4.7）于 50 ml 棕色容量瓶中，用甲醇（4.8）溶
解并稀释定容至标线，转移至内衬聚四氟乙烯垫的螺口棕色试剂瓶中保存。此溶液在 4℃以
下冷藏、避光可保存 1 年。也可直接购买市售有证标准溶液。
4.18 联苯胺标准中间液：ρ=100 μg/ml。
准确移取 1.00 ml 联苯胺标准贮备液（4.17）于 10 ml 棕色容量瓶中，用甲醇（4.8）稀
释定容至标线。此溶液在 4℃以下冷藏、避光可保存 1 年。
4.19 联苯胺标准使用液Ⅰ：ρ=10.0 μg/ml。
准确移取 1.00 ml 联苯胺标准中间液（4.18）于 10 ml 棕色容量瓶中，用甲醇水溶液（4.12）
稀释定容至标线。此溶液在 4℃以下冷藏、避光可保存 3 个月。使用前，应放至室温并混匀。
4.20 联苯胺标准使用液Ⅱ：ρ=1.00 μg/ml。
准确移取 1.00 ml 联苯胺标准使用液Ⅰ（4.19）于 10 ml 棕色容量瓶中，用甲醇水溶液
（4.12）稀释定容至标线。临用现配。
4.21 固相萃取柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，填料为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基
苯树脂，150 mg/6 ml，或其他等效萃取柱。
4.22 滤膜：0.45 μm 聚四氟乙烯滤膜。
4.23 氮气：纯度≥99.99%。
5 仪器和设备
5.1 高效液相色谱仪：具荧光检测器。
5.2 色谱柱：填料粒径为 5 μm，柱长 15 cm，内径 4.6 mm 的 C18反相色谱柱，或其他等效
色谱柱。
5.3 样品瓶：500 ml 具磨口塞的棕色细口玻璃瓶或带聚四氟乙烯衬垫的棕色螺纹口玻璃瓶。
5.4 微量注射器：10 µl、50 µl 和 100 µl。
5.5 氮吹仪。
5.6 超声波清洗仪：输出功率在 180 W 以上，工作频率为 40 kHz。
5.7 固相萃取装置。
5.8 一般实验室常用仪器和设备。
6 样品
6.1 样品采集和保存
按照 HJ/T 91 和 HJ/T 164 的相关规定进行样品的采集。采样前，向样品瓶（5.3）中加
入硫代硫酸钠（4.5），每 500 ml 样品加入 40 mg。采样时，应使样品充满采样瓶，不留液
上空间。如果样品的 pH 不在 6～9 之间，用盐酸溶液（4.11）或氢氧化钠溶液（4.15）调节
pH 至 6～9。采集的样品应在 4℃以下冷藏、避光保存，5 d 内萃取。萃取后的洗脱液在 4℃
以下冷藏、避光保存，4 d 内分析完毕。
6.2 试样的制备
6.2.1 固相萃取柱的活化
将固相萃取柱（4.21）固定在固相萃取装置（5.7）上，先用 5 ml 甲醇（4.8）以约 2 ml/min
的流速通过固相萃取柱，在填料暴露于空气之前，向柱上加 5 ml 水，待水剩约 2 ml 时，停
止活化。
6.2.2 富集、净化与浓缩
量取 150 ml 样品置于 250 ml 锥形瓶中，以约 2 ml/min 的流速通过活化后的固相萃取柱
（6.2.1），样品完全富集后，加入 5 ml 乙酸溶液（4.14），待乙酸溶液完全流出后，加入 8 ml
甲醇（4.8）淋洗，待甲醇完全流出后，继续用真空泵抽吸 5 min。用 7 ml 氨水甲醇溶液（4.16）
洗脱，洗脱液收集到浓缩瓶中。然后将浓缩瓶置于氮吹仪（5.5）上，在 60℃浓缩至 1 ml，
再用水定容至 2.0 ml，混匀后经滤膜（4.22）过滤到棕色样品瓶中，待测。
注：对于悬浮物浓度超过 12 mg/L 的样品，可先将样品用盐酸溶液（4.11）调节 pH 至 3 左右，用超
声波清洗仪（5.6）超声 10 min，用经过乙醇（4.9）浸润的滤膜（4.22）过滤。滤液用氢氧化钠溶
液（4.15）调节 pH 至 6～9，再进行固相萃取。
6.3 空白试样的制备
用实验用水代替样品，按照与试样的制备（6.2）相同步骤进行空白试样的制备。
7 分析步骤
7.1 色谱参考条件
流动相 A：乙腈（4.10），流动相 B：乙酸铵溶液（4.13）；洗脱程序为等度洗脱，流
动相 A/流动相 B=20/80（V/V），流速：1.0 ml/min；柱温：40℃；激发波长：292 nm，检测
波长：395 nm；进样体积：40.0 μl。
7.2 校准曲线的建立
分别取适量的联苯胺标准使用液Ⅰ（4.19）或联苯胺标准使用液Ⅱ（4.20），用甲醇水
溶液（4.12）稀释，制备至少 5 个浓度点的标准系列，联苯胺的质量浓度分别为 2.00 μg/L、
5.00 μg/L、10.0 μg/L、50.0 μg/L、100 μg/L、200 μg/L（此为参考浓度）。按照色谱参考条
件（7.1），由低浓度到高浓度依次对标准系列溶液进样，以联苯胺的质量浓度（μg/L）为
横坐标，对应的色谱峰面积或峰高为纵坐标，建立校准曲线。
7.3 试样的测定
按照与校准曲线的建立（7.2）相同的条件进行试样（6.2.2）的测定。
7.4 空白试验
按照与试样的测定（7.3）相同的条件进行空白试样（6.3）的测定。
8 结果计算与表示
8.1 定性分析
根据样品中目标化合物与标准系列中目标化合物的保留时间进行定性，可采用不同波长
下的荧光强度比辅助定性，必要时用高效液相色谱-三重四极杆质谱法进行确认。
在本标准推荐的色谱参考条件（7.1）下，联苯胺的标准色谱图见图 1。
9.1 精密度
6 家实验室对联苯胺加标浓度为 0.027 μg/L、0.267 μg/L 和 1.06 μg/L 的地表水样品进行
了 6 次重复测定：实验室内相对标准偏差分别为 1.9%～7.2%、1.7%～7.5%和 1.7%～6.3%；
实验室间相对标准偏差分别为 8.8%、5.5%和 7.5%；重复性限为 0.003 µg/L、0.032 µg/L 和
0.11 µg/L；再现性限为 0.006 µg/L、0.047 µg/L 和 0.23 µg/L。
6 家实验室对联苯胺加标浓度为 0.267 μg/L 的生活污水样品进行了 6 次重复测定：实验
室内相对标准偏差为 3.4%～6.6%；实验室间相对标准偏差为 6.6%；重复性限为 0.038 µg/L；
再现性限为 0.057 µg/L。
6 家实验室对含联苯胺平均浓度为 0.462 µg/L，加标浓度为 0.500 µg/L 的工业废水样品
进行了加标前后的 6次重复测定：实验室内相对标准偏差分别为 1.4%～7.0%和 1.1%～5.3%；
实验室间相对标准偏差分别为 8.1%和 4.5%；重复性限为 0.062 µg/L 和 0.095 µg/L；再现性
限为 0.12 µg/L 和 0.15 µg/L。
9.2 准确度
6 家实验室对联苯胺加标浓度为 0.027 μg/L、0.267 μg/L 和 1.06 μg/L 的地表水样品进行
了 6 次重复加标分析测定：加标回收率范围分别为 73.9%～95.1%、80.6%～98.4%和 84.0%～
97.0%；加标回收率最终值为 88.0%±15.8%、88.2%±12.4%和 91.0%±10.0%。
6 家实验室对联苯胺加标浓度为 0.267 μg/L的生活污水样品进行了 6 次重复加标分析测
定：加标回收率范围为 83.8%～100%；加标回收率最终值为 90.3%±11.2%。
6 家实验室对含联苯胺平均浓度为 0.462 μg/L，加标浓度为 0.500 μg/L 的工业废水样品
进行了 6 次重复加标分析测定：加标回收率范围为 86.6%～......
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