标准搜索结果: 'HJ 347.1-2018'
| 标准编号 | HJ 347.1-2018 (HJ347.1-2018) | | 中文名称 | 水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法 | | 英文名称 | Water quality - Determination of fecal coliform - Membrane filtration | | 行业 | 环保行业标准 | | 字数估计 | 13,169 | | 发布日期 | 2018-12-26 | | 实施日期 | 2019-06-01 | | 旧标准 (被替代) | HJ/T 347-2007部分 | | 标准依据 | 生态环境部公告2018年第73号 | HJ 347.1-2018: 水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法
HJ 347.1-2018 英文名称: Water quality - Determination of fecal coliform - Membrane filtration
中华人民共和国国家环境保护标准
部分代替 HJ/T 347-2007
水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法
1 适用范围
本标准规定了测定水中粪大肠菌群的滤膜法。
本标准适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的测定。
本方法的检出限：当接种量为 100 ml 时，检出限为 10 CFU/L；当接种量为 500 ml 时，
检出限为 2 CFU/L。
2 规范性引用文件
本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
GB/T 14581 水质 湖泊和水库采样技术指导
HJ 494 水质 采样技术指导
HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
3.1粪大肠菌群 fecal coliforms
又称耐热大肠菌群（thermotolerant coliforms）。44.5℃培养 24 h，能在MFC 选择性培养
基上生长，发酵乳糖产酸，并形成蓝色或蓝绿色菌落的肠杆菌科细菌。
3.2菌落形成单位 colony-forming units（CFU）
单位体积样品中的细菌群落总数。
4 方法原理
样品通过孔径为 0.45 μm的滤膜过滤，细菌被截留在滤膜上，然后将滤膜置于 MFC 选
择性培养基上，在特定的温度（44.5℃）下培养 24 h，胆盐三号可抑制革兰氏阳性菌的生长，
粪大肠菌群能生长并发酵乳糖产酸使指示剂变色，通过颜色判断是否产酸，并通过呈蓝色或
蓝绿色菌落计数，测定样品中粪大肠菌群浓度。
5 干扰和消除
5.1 活性氯具有氧化性，能破坏微生物细胞内的酶活性，导致细胞死亡，可在样品采集（8.1）
2时加入硫代硫酸钠溶液（6.6）消除干扰。
5.2 重金属离子具有细胞毒性，能破坏微生物细胞内的酶活性，导致细胞死亡，可在样品
采集（8.1）时加入乙二胺四乙酸二钠溶液（6.7）消除干扰。
6 试剂和材料
除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂或生物试剂，实验用水为蒸馏水或去离子水。
7.4，分装于三角烧瓶内，于 115℃高压蒸汽灭菌 20 min，储存于冷暗处备用。临用前，按上
述配方比例，用灭菌吸管分别加入已煮沸灭菌的 1%苯胺蓝水溶液 1 ml 及 1%玫瑰红酸溶液
（溶于 8.0 g/L 氢氧化钠液中）1 ml，混合均匀。如培养物中杂菌不多，则不加玫瑰红酸亦
可。加热溶解前，加入 1.2%～1.5%琼脂可制成固体培养基。也可选用市售成品培养基。配
制好的培养基避光、干燥保存，必要时在 5℃±3℃冰箱中保存，分装到平皿中的培养基可
保存 2～4周。配制好的培养基不能进行多次融化操作，以少量勤配为宜。当培养基颜色变
化，或脱水明显时应废弃不用。
6.2 无菌滤膜：直径 50 mm，孔径 0.45 μm的醋酸纤维滤膜，按无菌操作要求包扎，经 121℃
高压蒸汽灭菌 20 min，晾干备用；或将滤膜放入烧杯中，加入实验用水，煮沸灭菌 3次，15
min/次，前 2次煮沸后需更换水洗涤 2～3次。
6.3 无菌水：取适量实验用水，经 121℃高压蒸汽灭菌 20 min，备用。
6.4 硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O）。
6.5 乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2O8Na2·2H2O）。
6.6 硫代硫酸钠溶液：ρ（Na2S2O3）=0.10 g/ml
称取 15.7 g硫代硫酸钠（6.4），溶于适量水中，定容至 100 ml，临用现配。
6.7 乙二胺四乙酸二钠溶液：ρ（C10H14N2O8Na2·2H2O）=0.15 g/ml
称取 15 g乙二胺四乙酸二钠（6.5），溶于适量水中，定容至 100 ml，此溶液可保存 30 d。
7 仪器和设备
7.1 采样瓶：1 L、500 ml或 250 ml 带螺旋帽或磨口塞的广口玻璃瓶。
37.2 高压蒸汽灭菌器：115℃、121℃可调。
7.3 恒温培养箱：允许温度偏差 44.5℃±0.5℃。
7.4 过滤装置：配有砂芯滤器和真空泵，抽滤压力勿超过-50 kPa。
7.5 pH计：准确到 0.1 pH单位。
7.6 培养皿：直径 90 mm。
7.7 一般实验室常用仪器和设备。
注：玻璃器皿及采样器具试验前要按无菌操作要求包扎，121℃高压蒸汽灭菌 20 min备用。
8 样品
8.1 样品采集
点位布设及采样频次按照GB/T 14581、HJ/T 494和HJ/T 91的相关规定执行。
采集微生物样品时，采样瓶（7.1）不得用样品洗涤，采集样品于灭菌的采样瓶中。样
品采集量可根据水体实际情况而定，一般不少于250 ml。
采集河流、湖库等地表水样品时，可握住瓶子下部直接将带塞采样瓶插入水中，约距水
面 10～15 cm处，瓶口朝水流方向，拔瓶塞，使样品灌入瓶内然后盖上瓶塞，将采样瓶从水
中取出。如果没有水流，可握住瓶子水平往前推。采样量一般为采样瓶容量的 80%左右。样
品采集完毕后，迅速扎上无菌包装纸。
从龙头装置采集样品时，不要选用漏水龙头，采水前将龙头打开至最大，放水 3～5 min，
然后将龙头关闭，用火焰灼烧约 3 min灭菌或用 70%～75%的酒精对龙头进行消毒，开足龙
头，再放水 1 min，以充分除去水管中的滞留杂质。采样时控制水流速度，小心接入瓶内。
采集地表水、废水样品及一定深度的样品时，也可使用灭菌过的专用采样装置采样。
在同一采样点进行分层采样时，应自上而下进行，以免不同层次的搅扰。
如果采集的是含有活性氯样品，需在采样瓶灭菌前加入硫代硫酸钠溶液（6.6），以除去
活性氯对细菌的抑制作用（每 125 ml 容积加入 0.1 ml 的硫代硫酸钠溶液）；如果采集的是重
金属离子含量较高的样品，则在采样瓶灭菌前加入乙二胺四乙酸二钠溶液（6.7），以消除干
扰（每 125 ml容积加入 0.3 ml的乙二胺四乙酸二钠溶液）。
注：15.7 mg 硫代硫酸钠（6.4）可去除样品中 1.5 mg 活性氯，硫代硫酸钠用量可根据样品实际活性氯量调整。
8.2 样品保存
采样后应在 2 h内检测，否则，应 10℃以下冷藏但不得超过 6 h。实验室接样后，不能
立即开展检测的，将样品在 4℃以下冷藏并在 2 h内检测。
9 分析步骤
9.1 样品过滤
根据样品的种类判断接种量，最小过滤体积为10 ml，如接种量小于10 ml时应逐级稀释。
4先估计出适合在滤膜上计数所使用的体积，然后再取这个体积的1/10和10倍，分别过滤。理
想的样品接种量是滤膜上生长的粪大肠菌群菌落数为20～60个，总菌落数不得超过200个。
当最小过滤体积为10 ml，滤膜上菌落密度仍过大时，则应对样品进行稀释。1:10稀释的方法
为：吸取10 ml样品，注入盛有90 ml无菌水（6.3）的三角烧瓶中，混匀，制成1:10稀释样品。
样品接种量参考表见表1。
9.2 培养
用灭菌镊子夹取滤膜移放在MFC培养基（6.1）上，滤膜截留细菌面向上，滤膜应与培
养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将培养皿倒置，放入恒温培养箱内，44.5℃±0.5℃培养24 h±2 h。
9.3 对照试验
9.3.1 空白对照
每次试验都要用无菌水（6.3）按照步骤9.1和9.2进行实验室空白测定。
9.3.2 阳性及阴性对照
将粪大肠菌群的阳性菌株（如大肠埃希氏菌Escherichia coli）和阴性菌株（如产气肠杆
菌Enterobacter aerogenes）制成浓度为40～600 CFU/L的菌悬液，分别按照9.1～9.2步骤培养，
阳性菌株应呈现阳性反应，阴性菌株应呈现阴性反应，否则，该次样品测定结果无效，应查明原因后重新测定。
510 结果计算与表示
10.1 结果判读
MFC培养基上呈蓝色或蓝绿色的菌落为粪大肠菌群菌落，予以计数。
MFC培养基上呈灰色、淡黄色或无色的菌落为非粪大肠菌群菌落，不予计数。
10.3 结果表示
测定结果保留至整数位，最多保留两位有效数字，当测定结果≥100 CFU/L时，以科学
计数法表示。粪大肠菌群检验记录及报告格式参见附录A。
11 精密度和准确度
11.1 精密度
6个实验室对低浓度（地下水，浓度均值为2.0×102 CFU/L）、中浓度（地表水，浓度
均值为1.6×105 CFU/L）和高浓度（生活污水，浓度均值为1.6×107 CFU/L）三个不同浓度
粪大肠菌群的实际样品和有证标准样品（浓度为3670 MPN/L，可接受范围为330～
7710 MPN/L）进行了6次重复测定：实验室内相对标准偏差范围分别为5.3%～12%、0.81%～
2.1%、0.51%～4.2%和7.7%～9.8%；实验室间相对标准偏差分别为6.8%、3.9%、4.0%和3.6%；
实验室间95%置信区间见表2。
12 质量保证和质量控制
12.1 培养基检验
更换不同批次培养基时要进行阳性和阴性菌株检验，将粪大肠菌群测定的阳性菌株（如
大肠埃希氏菌 Escherichia coli）和阴性菌株（如产气肠杆菌 Enterobacter aerogenes）配成适
宜浓度，按样品过滤（9.1）的要求使滤膜上生长的菌落数为 20～60个，然后按培养（9.2）
7的要求进行操作，阳性菌株应......
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