标准搜索结果: 'HJ 347.2-2018'
| 标准编号 | HJ 347.2-2018 (HJ347.2-2018) | | 中文名称 | 水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法 | | 英文名称 | Water quality - Determination of fecal coliform - Manifold zymotechnics | | 行业 | 环保行业标准 | | 中标分类 | Z16 | | 字数估计 | 17,159 | | 发布日期 | 2018-12-26 | | 实施日期 | 2019-06-01 | | 旧标准 (被替代) | HJ/T 347-2007部分 | | 标准依据 | 生态环境部公告2018年第73号 | | 发布机构 | 生态环境部 | HJ 347.2-2018: 水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法
HJ 347.2-2018 英文名称: Water quality - Determination of fecal coliform - Manifold zymotechnics
中华人民共和国国家环境保护标准
部分代替 HJ/T 347-2007
水质粪大肠菌群的测定多管发酵法
中华人民共和国生态环境部
1 适用范围
本标准规定了测定水中粪大肠菌群的多管发酵法。
本标准适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的测定。
本方法的检出限： 12 管法为 3 MPN/L; 15 管法为 20MPN/L 。
2 规范性引用文件
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
4 方法原理
将样品加入含乳糖蛋白豚培养基的试管中， 37℃初发酵富集培养，大肠菌群在培养基中生长繁殖
分解乳糖产酸产气，产生的酸使澳甲酣紫指示剂由紫色变为黄色，产生的气体进入倒管中，指示产气。
44.5℃复发酵培养，培养基中的胆盐三号可抑制革兰氏阳性菌的生长，最后产气的细菌确定为是粪大肠
菌群。通过查 MPN 表，得出粪大肠菌群浓度值。
5 干扰和消除
5.1 活性氯具有氧化性，能破坏微生物细胞内的酶活性，导致细胞死亡，可在样品采集体.1 ）时加入
硫代硫酸铀溶液（6.7）消除干扰。
5.2 重金属离子具有细胞毒性，能破坏微生物细胞内的酶活性，导致细胞死亡，可在样品采集（ 8.1)
时加入乙二版四乙酸二锅溶液（ 6.8 ）消除干扰。
6 试剂和材料
除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂或生物试剂，实验用水为蒸馆水或去离
子水。
6.1 乳糖蛋白陈培养基。
蛋白陈 10 g
牛肉浸膏 3g
乳糖 5g
氯化铀 5g
1.6%澳甲酌紫乙醇溶液 1 ml
将蛋白脏、牛肉浸膏、乳糖、氧化铀加热溶解于 1 000 ml 水中，调节 pH 至 7.2～7.4，再加入 1.6%
澳甲酣紫乙醇溶液 l ml，充分混匀，分装于含有倒置小玻璃管的试管中， 115℃高压蒸汽灭菌 20 min,
储存于冷暗处备用。也可选用市售成品培养基。
6.2 三倍乳糖蛋白陈培养基：称取三倍的乳糖蛋白陈培养基（6.1 ）成分的量，溶于 1 000 ml 水中，配
成三倍乳糖蛋白陈培养基，配制方法向上。
6.3 EC 培养基。
膜陈
乳糖
20 g
5g
胆盐三号 1.5 g
磷酸氢二押 4g
磷酸二氢饵 1.5 g
氯化铀 5g
将上述成分或含有上述成分的市售成品加热溶解于 1 000 ml 水中，然后分装于有玻璃倒管的试管
中， 115℃高压蒸汽灭菌 20min，灭菌后 pH 应在 6.9 左右。
注：配制好的培养基（6.1～6.3 ）避光、干燥保存，必要时在 5℃士3℃冰箱中保存，通常瓶装及试管装培养基不超
过 3～6 个月。配制好的培养基要避免杂菌侵入和水分蒸发，当培养基颜色变化，或体积变化明显时废弃不用。
6.4 无菌水：取适量实验用水，经 121 ℃高压蒸汽灭菌 20min，备用。
6.5 硫代硫酸铀（Na2S203·5H20 ）。
6.6 乙二肢四乙酸二铀 C C10H14N20sNa2·2H20 ）。
6.7 硫代硫酸铀洛液： p (Na2S203) =0.10 g/ml
称取 15.7 g 硫代硫酸铀（ 6.5 ），榕于适量水中，定容至 100 ml, Ii备用现配。
6.8 乙二肢四乙酸二饷榕液： p CC10H14N208Na2·2H20) =0.15 g/ml
称取 15 g 乙二肢囚乙酸三饷（6.6），溶于适量水中，定容至 100 ml，此溶液可保存 30 d。
7 仪器和设备
7.1 采样瓶： 500 ml 带螺旋帽或磨口塞的广口玻璃瓶。
7.2 高压蒸汽灭菌器： l 15℃、 121 ℃可调。
7.3 恒温培养箱或水浴锅：允许温度偏差 37℃士 0.5℃、 44℃士0.5℃。
7.4 pH 计：准确到 0.1 pH 单位。
7.5 接种环：直径 3 mmo
7.6 试管： 300 ml 、 50 ml、 20ml 。
7.7 一般实验室常用仪器和设备。
注：玻璃器皿及采样器具试验前要按无菌操作要求包扎， 121 ℃高压蒸汽灭菌 20min 备用。
8 样品
8.1 样品采集
点位布设及采样频次按照、 GB/T 14581 、 HJ/T 494 和 HJ/T 91 的相关规定执行。
采集微生物样品时，采样瓶 C7.l ）不得用样品洗涤，采集样品于灭菌的采样瓶中。清洁水体的采
样量不低于 400 ml，其余水体采样量不低于 100 ml 。
采集河流、湖库等地表水样品时，可握住瓶子下部直接将带塞采样瓶插入水中，距水面 10～ 15 cm
处，瓶口朝水流方向，拔瓶塞，使样品灌入瓶内然后盖上瓶塞，将采样瓶从水中取出。如果没有水
流，可握住瓶子水平往前推。采样量一般为采样瓶容量的 80%左右。样品采集完毕后，迅速扎上无
菌包装纸。
从龙头装置采集样品时，不要选用漏水龙头，采水前将龙头打开至最大，放水 3～5 min，然后将
龙头关闭，用火焰灼烧约 3 min 灭菌或用 70%～75%的酒精对龙头进行消毒，开足龙头，再放水 l min,
以充分除去水管中的滞留杂质。采样时控制水流速度，小心接入瓶内。
采集地表水、废水样品及一定深度的样品时，也可使用灭菌过的专用采样装置采样。
在同一采样点进行分层采样时，应自上而下进行，以免不同层次的搅扰。
如果采集的是含有活性氯的样品，需在采样瓶灭菌前加入硫代硫酸纳溶液（6.7），以除去活性氯对
细菌的抑制作用（每 125 ml 容积加入 0.1 ml 的硫代硫酸纳溶液）：如果采集的是重金属离子含量较高的
样品，则在采样瓶灭菌前加入乙二肢四乙酸二铀溶液（6.肘，以消除干扰（每 125 ml 容积加入 0.3 ml
的乙二肢四乙酸二铀溶液）。
注： 15.7 mg 硫代硫酸铀（6.5）可去除样品中 1.5 mg 活性氯，硫代硫酸纳用量可根据样品实际活性氧量调整。
8.2 样晶保存
采样后应在 2h 内检测，否则，应 10℃以下冷藏但不得超过 6h。实验室接样后，不能立即开展检
测的，将样品于 4℃以下冷藏并在 2h 内检测。
9 分析步骤
9.1 样品稀释及接种
9.1.1 15 管法
将样品充分混匀后，在 5 支装有己灭菌的 5 ml 三倍乳糖蛋白陈培养基（6.2 ）的试管中（内有倒管），
按无菌操作要求各加入样品 10 ml，在 5 支装有己灭菌的 10 ml 单倍乳糖蛋白陈培养基（6.1 ）的试管中
（内有倒管），按无菌操作要求各加入样品 l ml，在 5 支装有己灭菌的 10 ml 单倍乳糖蛋白陈培养基（ 6.1)
的试管中（内有倒管），按无菌操作要求各加入样品 0.1 ml 。
对于受到污染的样品，先将样品稀释后再按照上述操作接种，以生活污水为例，先将样品稀释 104
倍，然后按照上述操作步骤分别接种 10 ml 、 l ml 和 0.1 mlo 15 管法样品接种量参考表见表 1 。
当样品接种量小于 l ml 时，应将样品制成稀释样品后使用。按无菌操作要求方式吸取 10 ml 充分
混匀的样品，注入盛有 90 ml 无菌水（6.4）的三角烧瓶中，混匀成 1 : 10 稀释样品。吸取 I : IO 的稀
释样品 10 ml 注入盛有 90ml 无菌水的三角烧瓶中，混匀成 1 : 100 稀释样品。其他接种量的稀释样品
依次类推。
9.2 初发酵试验
将接种（9.1) 后的试管，在 37°C±0.5℃下培养 24 h±2 h 。
发酵试管颜色变黄为产酸，小玻璃倒管内有气泡为产气。产酸和产气的试管表明试验阳性。如在倒
管内产气不明显，可轻拍试管，有小气泡升起的为阳性。
9.3 复发酵试验
轻微振荡在初发酵试验（9.2）中显示为阳性或疑似阳性（只产酸未产气）的试管，用经火焰灼烧
灭菌并冷却后的接种环（7.5）将培养物分别转接到装有 EC 培养基（6.3 ）的试管中。在 44.5℃ ±osc
下培养 24 h士2h。转接后所有试管必须在 30 min 内放进恒温培养箱或水浴锅（ 7.3 ）中。培养后立即观
察，倒管中产气证实为粪大肠菌群阳性。
9.4 对照试验
9.4.1 空白对照
每次试验都要用无菌水（6.4）按照步骤 9.1～9.3 进行实验室空白测定。
9.4.2 阳性及阴性对照
将粪大肠菌群的阳性菌株（如大肠埃希氏菌Escherichia coli ）和阴性菌株（如产气肠杆菌Enterobacter
aerogenes ） 制成浓度为 300～3000 MPN/L 的菌悬液，分别取相应体积的菌悬液按接种（9.1) 的要求接
种于试管中，然后按初发酵试验（9.2）和复发酵试验（9.3 ）要求培养，阳性菌株应呈现阳性反应，阴
性菌株应呈现阴性反应，否则，该次样品测定结果无效，应查明原因后重新测定。
10 结果计算与表示
10.1 结果计算
接种 12 份样品时，查附录 A 中表 A.I 可得每升粪大肠菌群 MPN 值。
10.2 结果表示
11 精密度和准确度
11.1 精密度
12 质量保证和质量控制
12.1 培养基检验
更换不同批次培养基时要进行阳性和阴性菌株检验，将粪大肠菌群的阳性菌株（如大肠埃希氏菌
Escherichia coli ） 和阴性菌株（如产气肠杆菌 Enterobacter aerogenes ） 制成浓度为 300～3 000 MPN/L
的菌悬液。若使用的是定性标准菌株，配制方法为先进行预实验，摸清浓度后按目标为 300～
3 000 MPN/L 稀释：若使用的是......
|