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[PDF] SN/T 2978-2011 - 自动发货. 英文版

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SN/T 2978-2011	英文版	185	SN/T 2978-2011	3分钟内自动发货[PDF]	动物源性产品中鸡源性成分PCR检测方法	有效

基本信息
标准编号	SN/T 2978-2011 (SN/T2978-2011)
中文名称	动物源性产品中鸡源性成分PCR检测方法
英文名称	PCR method for the detection of chicken components in animal derived products
行业	商检行业标准 (推荐)
中标分类	X18
国际标准分类	67.120
字数估计	8,845
发布日期	2011-09-09
实施日期	2012-04-01
引用标准	GB 4789.1; GB/T 5009.1; GB/T 6682; GB/T 14699.1; SN/T 1193
标准依据	国质检认(2011)492号;行业标准备案公告2012年第4号(总第148号);认办科函[2015]247号
发布机构	海关总署
范围	本标准规定了动物源性产品中鸡源性成分检测的PCR方法。本标准适用于动物源性产品中鸡源性成分的定性检测。

SN/T 2978-2011: 动物源性产品中鸡源性成分PCR检测方法 SN/T 2978-2011 英文名称: PCR method for the detection of chicken components in animal derived products 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN／T２９７８-２０１１动物源性产品中鸡源性成分 PCR检测方法中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布前言本标准按照GB/T １．１-２００９给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、深圳市检验检疫科学院。本标准主要起草人：宗卉、曹琛福、张彩虹、杨俊兴、吕建强、阮周曦、曾少灵、陶虹、孙洁、刘建利、廖丽珊、卢体康、花群义、秦智锋。动物源性产品中鸡源性成分 PCR检测方法１　范围本标准规定了动物源性产品中鸡源性成分检测的ＰＣＲ方法。本标准适用于动物源性产品中鸡源性成分的定性检测。２　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB ４７８９．１　食品安全国家标准　食品微生物学检验　总则 GB/T ５００９．１　食品卫生检验方法　理化部分　总则 GB/T ６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 GB/T １４６９９．１　饲料　采样ＳＮ/T １１９３　基因检验实验室技术要求３　试剂和材料除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，实验用水符合GB/T ６６８２的要求。３．１　鸡源性成分检测用引物（对）序列：上游：５’-ｃｔａｔａａｔｃｇａｔａａｔｃｃａｃｇａｔｔｃａ-３’ 下游：５’-ｃｔｔｇａｃｃｔｇｔｃｔｔａｔｔａｇｃｇａｇｇ-３’ ３．２　裂解液（参见附录Ａ）。３．３　电泳缓冲液（参见附录Ａ）。３．４　溴化乙锭（１０ｍｇ／ｍＬ）（参见附录Ａ）。３．５　阳性对照样品：采用已知含有鸡源性成分的样品。３．６　阴性对照样品：采用已知不含鸡源性成分的样品。３．７　空白对照：采用与模板等体积的双蒸水。４　仪器设备４．１　离心机（最大转速１４０００ｒ／ｍｉｎ）。４．２　微量移液器（１００μＬ～１０００μＬ，２０μＬ～２００μＬ，２μＬ～２０μＬ，０．５μＬ～１０μＬ）。４．３　电泳仪。４．４　凝胶成像仪。４．５　恒温水浴锅（０℃～１００℃）。５　试样选取与制备根据不同的样品，饲料样品按照GB/T １４６９９．１采样，或若粒度为２０目称取２００ｍｇ，６０目称取１００ｍｇ，１００目称取５０ｍｇ。食品样品按照GB/T ５００９．１和GB ４７８９．１采样。将实验室样品研磨待用。６　检验步骤６．１　样品DNA提取称取上述混匀样品５０ｍｇ于１．５ｍＬ离心管中，加入６００μＬ～８００μＬ裂解液，６５℃３０ｍｉｎ，期间不时振荡混匀；１２０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ；转移上清液于洁净离心管中，加４００μＬ三氯甲烷／异戊醇（２４∶１），混匀；１２０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，取上清液；加０．８倍体积异丙醇，沉淀；１２０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，弃上清液；７５％乙醇洗涤一次，晾干；加入５０μＬ双蒸水（ｄｄＨ２Ｏ）溶解沉淀，制成ＤＮＡ溶液，待用。也可用等效ＤＮＡ提取试剂盒提取样品ＤＮＡ。６．２　PCR扩增反应体系：体积为２５μＬ，包括２×ＰＣＲ缓冲液１２．５μＬ、ｄＮＴＰｓ（２ｍｍｏｌ／Ｌ）５μＬ、引物对（１０ｎｍｏｌ／Ｌ）各０．５μＬ、ＤＮＡ聚合酶（１Ｕ／μＬ）１μＬ、模板ＤＮＡ（１００ｎｇ±５０ｎｇＤＮＡ）５μＬ、双蒸水０．５μＬ。反应条件：ＰＣＲ反应条件随不同的ＰＣＲ仪略有改变。９４℃预变性１ｍｉｎ～３ｍｉｎ；９４℃变性３０ｓ～６０ｓ，６３℃退火３０ｓ～６０ｓ，７２℃延伸３０ｓ～６０ｓ，３５个循环；７２℃延伸５ｍｉｎ；４℃保存。检测过程中分别设阳性对照、阴性对照和空白对照。６．３　PCR扩增产物电泳检测称取１．５ｇ琼脂糖于１００ｍＬ电泳缓冲液中，加热，充分溶化后，加入溴化乙锭至终浓度为０．５μｇ／ｍＬ，制胶。在电泳槽中加入电泳缓冲液，使液面刚刚没过凝胶。将８μＬ各ＰＣＲ扩增产物分别和３μＬ加样缓冲液混合，点样。９Ｖ／ｃｍ恒压，电泳至溴酚蓝指示剂迁移至凝胶中部。凝胶成像仪下观察电泳结果并记录。６．４　测序当电泳结果出现可疑阳性时，将ＰＣＲ扩增产物进行ＤＮＡ测序。７　结果判断与表述７．１　PCR扩增产物电泳并序列分析实验在阳性对照出现１３１ｂｐ大小的条带，阴性对照无该条带出现、空白对照无条带出现时，视为该实验成立。在实验成立的前提下，样品出现１３１ｂｐ左右大小的扩增产物则判为可疑阳性，否则为阴性。将可疑阳性的ＰＣＲ扩增产物进行核酸序列测定，与ＧＥＥＮＢＡＮＫ中鸡线粒体ＤＮＡ相对应片段的序......

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