路径: 主页 > MISC > 第351页 > WS 562-2017 | 标准编号 | WS 562-2017 (WS562-2017) | | 中文名称 | 克-雅病诊断 | | 英文名称 | Diagnosis for Creutzfeldt-Jakob disease | | 行业 | 卫生行业标准 | | 中标分类 | C59 | | 字数估计 | 26,229 | | 发布日期 | 7/24/2017 | | 实施日期 | 2/1/2018 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 | WS 562-2017: 克-雅病诊断
WS 562-2017 英文名称: Diagnosis for Creutzfeldt-Jakob disease
ICS 11.020
C 59
WS
中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准
WS/T 562-2017
克-雅病诊断
1 范围
本标准规定了克-雅病和遗传或家族型人类朊病毒病（包括遗传或家族型克-雅病、吉斯特曼-施特劳
斯综合征、致死性家族型失眠症）的诊断原则、诊断依据、诊断分类和鉴别诊断。
本标准适用于全国各级各类医疗卫生机构及其医务人员对克-雅病和遗传或家族型人类朊病毒病
（包括遗传或家族型克-雅病、吉斯特曼-施特劳斯综合征、致死性家族型失眠症）的诊断。
5 诊断依据
5.1 散发型克-雅病
5.1.1 病史与流行病学史
病史与流行病学史如下：
a) 具有进行性痴呆症状；
b) 临床病程＜2 年；
c) 常规检测排除其他疾病；
d) 无明确医源性接触史。
5.1.2 临床表现临床表现如下：
a) 肌阵挛；
b) 视觉障碍或小脑共济失调；
c) 锥体/锥体外系功能异常；
d) 无动性缄默。
5.1.3 临床检查
特征性的临床检查结果如下：
a) 在病程中脑电图出现周期性三相波；
b) 头颅 MRI成像可见壳核/尾状核异常高信号，或者弥散加权像显示对称性灰质“缎带 (ribbon)征”。
5.1.4 实验室检测
特征性的实验室检测结果如下：
a) 脑脊液 14-3-3蛋白检测为阳性（见附录 A）；
b) 脑组织病理学检测显示具有典型/标准的神经病理学改变，即出现海绵状变性（见附录 B）；
c) 脑组织免疫组织化学检测存在蛋白酶抗性 PrPSc的沉积（见附录 C）；
d) 脑组织 Western印迹法检测存在蛋白酶抗性 PrPSc（见附录 D）。
5.1.5 诊断分类
诊断分类主要包括以下三种：
a) 疑似诊断：符合 5.1.1加 5.1.2任意两条；
b) 临床诊断：在疑似诊断基础上，符合 5.1.3任意一条或 ；
c) 确诊诊断：在疑似诊断基础上，符合 5.1.4中任意一条。
5.2 医源型克-雅病
5.2.1 病史与主要临床表现
与散发型克-雅病相似。
5.2.2 诊断分类
诊断分类仅为确诊诊断。
在散发型克-雅病确诊诊断基础上，符合以下任意一项：
a) 接受由人脑提取的垂体激素治疗的病人出现进行性小脑综合征；
b) 确定的暴露危险，例如曾接受过来自 CJD病人的硬脑膜移植、角膜移植等手术。
5.3 变异型克-雅病
5.3.1 病史与流行病学史
病史与流行病学史如下：
a) 进行性神经精神障碍；
b) 病程≥6个月；
c) 常规检查不提示存在有其他疾病；
d) 无明确医源性接触史；
e) 排除遗传或家族型人类朊病毒病。
5.3.2 临床表现
临床表现如下：
a) 早期精神症状（抑郁、焦虑、情感淡漠、退缩、妄想）；
b) 持续性疼痛感（疼痛和/或感觉异常）；
c) 共济失调；
d) 肌阵挛、舞蹈症、肌张力障碍；
e) 痴呆。
5.3.3 临床检测
特征性的临床检测结果如下：
a) 早期脑电图无典型的三相波（晚期可能出现三相波）；
b) MRI：弥散加权像、液体衰减反转恢复成像显示双侧丘脑枕（后结节）高信号。
5.3.4 实验室检测
特征性的实验室检测结果如下：
a) 扁桃体 Western印迹法检测存在蛋白酶抗性 PrPSc（见附录 E）或扁桃体免疫组织化学检测证实
具有 PrPSc沉积（见附录 F）；
b) 脑组织病理学检测显示，大脑和小脑广泛的空泡样变（见附录 B）；
c) 脑组织免疫组织化学检测证实具有“花瓣样”的蛋白酶抗性 PrPSc斑块沉积（见附录 C）；
d) 脑组织 Western印迹法检测存在蛋白酶抗性 PrPSc（见附录 D）。
5.3.5 诊断分类
诊断分类包括以下三种：
a) 疑似诊断：符合 5.3.1加 5.3.2中的任意 4项加 ）；
b) 临床诊断：在疑似诊断的基础上符合 ；
c) 确诊诊断：在 5.3.1加 5.3.4中任意一条。
5.4 遗传或家族型人类朊病毒病
5.4.1 病史与流行病学史
在一级亲属中存在遗传或家族型人类朊病毒病确诊病例。
5.4.2 诊断分类
诊断分类包括以下两种：
a) 疑似诊断：在符合 sCJD疑似诊断标准或出现进行性神经精神症状的基础上，加 5.4.1。
b) 确诊诊断：在疑似诊断的基础上，病人 PRNP 基因序列检测（见附录 G）证实具有特定的基因突变（参见附录 H）。
6 鉴别诊断
克-雅病的诊断应与病毒性脑炎、桥本脑病、线粒体脑病、阿尔茨海默病、血管性痴呆、中枢神经
系统淋巴瘤及其他脑肿瘤、皮层静脉血栓形成及副肿瘤性亚急性小脑变性相鉴别（参见附录I）。
附 录 A
（规范性附录）
脑脊液 14-3-3 蛋白 Western blot 检测
A.1 原理
CJD 病人脑脊液中 14-3-3 蛋白含量往往增高。脑脊液经 SDS-PAGE 电泳、电转后，14-3-3 蛋白与
特异性抗体进行反应，显色后出现 30 KD左右的蛋白条带。
A.2 实验主要仪器
蛋白电泳和电转装置。
A.3 实验步骤
按如下操作步骤进行：
a) 脑脊液中加入 5×上样缓冲液，100 ℃煮沸 5 min。
b) 常规制备 15％分离胶和 5％浓缩胶，常规上样，使用浓缩胶 80 V，分离胶 156 V 的电压条件
下电泳 2 h。200 mA稳流 70 min（湿式）或 60 mA 60 min（半干式）电转移到硝酸纤维素膜。
c) 转移完毕，膜用 5％脱脂奶缓冲液1∶1 000稀释一抗（一抗为 14-3-3蛋白特异性多克隆抗体），室温振荡孵育 2 h
或 4 ℃孵育过夜。缓冲液洗 3次，共 30 min。
d) 与辣根过氧化物酶标记的抗兔 IgG 二抗（用缓冲液进行 1∶5 000 稀释）37 ℃振荡孵育 1 h。
缓冲液洗 3次，共 30 min。
e) ECL显色。
A.4 结果判定
阳性对照采用羊脑组织匀浆液，或14-3-3阳性脑脊液；显色后在30 KD位置出现一条蛋白条带，与
阳性对照中蛋白条带泳动位置相同，即可判定为脑脊液中14-3-3阳性。
附 录 B
（规范性附录）
脑组织病理学检测
B.1 中枢神经组织分区采集
中枢神经组织分区采集包括以下五个步骤：
a) 除去硬脑膜，称重。
b) 中枢神经组织经福尔马林固定，固定最佳时间为 10 d～21 d。
c) 脑组织。常规途径及方法切脑、分区取材，分别记录、标记。
d) 脊髓。切开脊髓硬膜，分别记录、标记颈、胸、腰部脊髓组织块。然后采集脊神经根节。
e) 标本感染性的清除。在进一步检测之前，所有的固定组织应在 96％以上的甲酸溶液中浸泡至
少 1 h。需要注意的是，由于变性剂相互作用可产生化学反应，任何事先经过酚处理的组织都
不能再进行 96％以上甲酸处理，故这些组织仍具有感染性。
B.3 制片
制片主要包括以下四步：
a) 组织标本蜡块的修块、切片、制片按常规病理学方法进行；
b) 如果组织蜡块未经 96％甲酸处理，操作人员应戴金属网状手套防护以免损伤；
c) 用于常规病理检测和免疫组织化学检测的脑组织片厚度为 5 µm；
d) 废弃组织、蜡块、碎片等收集后 134 ℃高压灭菌 1 h或焚烧。
B.4 HE染色
HE染色按常规病理学方法进行。
B.5 结果判定
B.5.1 sCJD、gCJD或fCJD、iCJD
在大脑、小脑皮质、皮质下灰质中出现海绵状病变。
B.5.2 vCJD
丘脑后部大量星形胶质细胞增生，神经元丢失，即有大量的 PrPSc沉积的海绵状变性，特别是在大
脑和小脑皮层灰质区在淀粉样斑块周围围绕着一圈海绵状空泡（花瓣样）。
B.5.3 GSS
很少或几乎没有海绵状变性。
B.5.4 FFI
显著的丘脑神经元丢失和胶质增生，很少或几乎没有海绵状变性。
附 录 C
（规范性附录）
脑组织PrPSc的免疫组织化学检测
C.1 原理
PrP
Sc 具有抵抗变性剂、蛋白酶的水解作用，组织切片经高压水解、变性剂或蛋白酶处理破坏 PrPC
后，以朊蛋白特异性抗体进行免疫组织化学染色，光学显微镜下观测 PrPSc蛋白沉积。
C.2 主要实验仪器
光学显微镜。
C.3 实验步骤
实验操作按如下顺序进行：
a) 组织切片置于 56 ℃烘烤 24 h，常规脱蜡至水；
b) 取出后浸入水中 5 min，饱和苦味酸浸泡 15 min，除去福尔马林色素；
c) 水洗 3次，每次 5 min，除去苦味酸；
d) 3%过氧化氢/甲醇封闭 15 min～20 min（阻断内源性过氧化物酶）；
e) 水洗 3次，每次 5 min；
f) 高压水解（121 ℃，双蒸水）10 min，或微波炉（高功率挡，双蒸水）3次，每次 5 min；
g) 取出后室温冷却；
h) 在含量不小于 96%的甲酸中浸泡 5 min～10 min（石蜡包埋前未作甲酸处理的标本）；
i) 水洗 3次（缓慢水滴洗）；
j) 4 mol/L 异硫氰酸胍浸泡 2 h（4 ℃）；
k) 充分水洗；
l) 血清封闭 1∶100稀释的正常羊血清/磷酸盐缓冲液（PBS）封闭 20 min；
m) 弃封闭液，加第一抗体（用 1:100正常羊血清/PBS稀释）孵育过夜，朊蛋白特异性单克隆抗
体（如 3F4），稀释度为 1:500～1:1 000；
n) PBS洗 3次，每次 5 min；
o) 加第二抗体（用 1:100 正常羊血清/PBS 稀释）孵育 30 min，辣根过氧化物酶（HRP）标记的
抗兔抗体 1:200 稀释，用于多克隆抗体检测；或 HRP 标记的抗小鼠抗体 1:200 稀释，用于单克隆抗体检测；
p) PBS洗 3次，每次 5 min；
q) 3,3'-二氨基联苯胺（DAB）显色后，充分水洗；
r) 苏木素（轻微）复染；
s) 常规脱水、透明、封片。
C.4 结果观察
C.5 结果判定
C.5.1 sCJD、iCJD、gCJD或fCJD
具有 PrPSc的沉积（斑块型、弥漫性突触型、斑块/空泡周围型）。
C.5.2 vCJD
在细胞周围和血管周围出现无明确形态的PrPSc斑块，特别是在小脑。
C.5.3 GSS
可见特征性的淀粉样斑块沉积。
C.5.4 FFI
很少或几乎没有PrPSc的沉积。
附 录 D
（规范性......
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