| 标准编号 | GB 31658.12-2021 (GB31658.12-2021) | | 中文名称 | | | 英文名称 | National food safety standard - Determination of cyromazine in animal derived food by high performance liquid chromatographic method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X04 | | 字数估计 | 6,663 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31658.12-2021: 食品安全国家标准 动物性食品中环丙氨嗪残留量的测定 高效液相色谱法
食品安全国家标准
动物性食品中环丙氨嗪残留量的测定
高效液相色谱法
中华人民共和国国家标准
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前言
本文件按照GB/T １.１-２０２０《标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
本文件系首次发布.
食品安全国家标准
动物性食品中环丙氨嗪残留量的测定
高效液相色谱法
１ 范围
本文件规定了动物性食品中环丙氨嗪残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法.
本文件适用于羊和禽肌肉、脂肪、肝脏及羊肾脏组织中环丙氨嗪残留量的检测.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试料中残留的环丙氨嗪,用三氯乙酸/乙腈溶液提取,混合阳离子交换固相萃取柱净化,高效液相色谱
测定,外标法定量.
５ 试剂和材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５.１ 试剂
５.１.１ 甲醇(CH３OH).
５.１.２ 乙腈(CH３CN):色谱纯.
５.１.３ 盐酸(HCl).
５.１.４ 乙酸铵(CH３CONH３).
５.１.５ 乙酸(CH３COOH).
５.１.６ 正己烷(C６H１４).
５.１.７ 氨水(NH３H２O).
５.１.８ 三氯乙酸(CCl３COOH).
５.２ 溶液配制
５.２.１ ２５mmol/L乙酸铵溶液:取乙酸铵０.１９g,加水９５０mL使溶解,用乙酸调pH至５.０,加水稀释至１０００mL.
５.２.２ １％三氯乙酸溶液:取三氯乙酸１g,用水溶解并稀释至１００mL.
５.２.３ 提取液:取１％三氯乙酸溶液１５mL,用乙腈稀释至１００mL.
５.２.４ ０.１mol/L盐酸溶液:取盐酸９mL,用稀释至１０００mL.
５.２.５ ５％氨水甲醇溶液:取氨水５mL,用甲醇稀释至１００mL.
５.２.６ 流动相:取２５mmol/L乙酸铵溶液４０.０mL,用乙腈定容至１０００mL.
５.３ 标准品
环丙氨嗪(Cyromazine,C６H１０N６,CAS号:６６２１５Ｇ２７Ｇ８),含量≥９７.０％.
５.４ 标准溶液的制备
５.４.１ 标准储备液(１mg/mL):精确称取相当于环丙氨嗪２５mg的环丙氨嗪标准品,用甲醇溶解并稀释定容至２５mL容量瓶,配成浓度为１mg/mL标准储备液.-１８℃以下保存,有效期１年.
５.４.２ 标准工作液(１０mg/L):精密量取标准储备液１mL,于１００mL容量瓶,用甲醇稀释至刻度,配成浓度为１０mg/L的环丙氨嗪标准工作液.-１８℃以下保存,有效期６个月.
５.５ 材料
５.５.１ 混合阳离子交换固相萃取柱:６０mg/３mL,或相当者.
５.５.２ 针头式过滤器通用型滤膜:尼龙材质,孔径０.４５μm或性能相当者.
６ 仪器和设备
６.１ 高效液相色谱仪:配紫外检测器.
６.２ 分析天平:感量０.００００１g和感量０.０１g.
６.３ 氮吹仪.
６.４ 固相萃取装置.
６.５ 均质机.
６.６ 涡旋混合器.
６.７ 离心机:最大转速不低于１００００r/min.
６.８ pH计.
６.９ 旋转蒸发仪.
６.１０ 分液漏斗:１００mL.
６.１１ 鸡心瓶:１００mL.
６.１２ 刻度离心管:分度值０.１mL.
７ 试样的制备与保存
７.１ 试样的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎,并使均质.
a) 取均质的供试样品,作为供试试料;
b) 取均质的空白样品,作为空白试料;
c) 取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料.
７.２ 试料的保存
-１８℃以下保存.
８ 测定步骤
８.１ 提取
取试料５g(精确至±０.０２g),于５０mL离心管,加提取液１５mL,高速均质使均匀分散,以５０００r/min离心５min,取上清液于１００mL分液漏斗中,残渣加提取液１０mL,重复提取１次,合并上清液,加正己烷３０mL,振摇２min,静置使分层.收集下层液于１００mL鸡心瓶中,５０℃水浴旋转蒸发至１mL(需控制真空度防止爆沸),转至１０mL刻度离心管中,用提取液淋洗鸡心瓶２次,每次２mL,合并提取液,以１００００r/min离心５min,取上清液,备用.
８.２ 净化
固相萃取柱依次用甲醇３mL和水３mL活化,取备用液过柱,控制流速１mL/min.依次用甲醇３mL、０.１mol/L盐酸溶液３mL、水３mL和甲醇３mL淋洗,抽干,用氨水甲醇溶液５mL洗脱.收集洗脱液,于５０℃氮气吹干,用流动相１.０mL溶解残余物,涡旋３０s,滤膜过滤,供高效液相色谱仪测定.
８.３ 标准曲线的制备
精密量取环丙氨嗪标准工作液(１０ mg/L)适量,用流动相稀释,配成浓度为 ０.０５μg/mL、
０.１μg/mL、０.２μg/mL、０.４μg/mL、１μg/mL和２μg/mL的系列标准溶液,供高效液相色谱法测定.以测得峰面积为纵坐标、对应标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线,求回归方程和相关系数.
８.４ 测定
８.４.１ 色谱条件参考条件
a) 色谱柱:HILIC(亲水反应离子交换色谱柱,２.１mm×１５０mm,３.５μm),或相当者;
b) 流速:０.３mL/min;
c) 检测波长:２１４nm;
d) 进样量:２０μL;
e) 柱温:３０℃.
８.４.２ 测定法
取试样溶液和相应的标准溶液,作单点或多点校准,按外标法以色谱峰面积定量.标准工作液及试样
溶液中待测物响应值应在仪器检测的线性范围之内.试样中待测物峰的保留时间与标准工作液相应峰的保留时间相对偏差应在±２.５％以内.环丙氨嗪标准溶液色谱图见附录A.
８.５ 空白试验
取空白试料,除不加标准溶液外,采用相同的测定步骤进行平行操作.
９ ......
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