| 标准编号 | GB 31658.17-2021 (GB31658.17-2021) | | 中文名称 | | | 英文名称 | (National Food Safety Standard Determination of Tetracyclines, Sulfonamides and Quinolones Residues in Animal Foods Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry) | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X04 | | 字数估计 | 12,172 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31658.17-2021: 食品安全国家标准 动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
食品安全国家标准
动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药
物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
中华人民共和国国家标准
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前言
本文件按照GB/T １.１-２０２０«标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.
本文件系首次发布.
１ 范围
本文件规定了动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法.
本文件适用于牛、羊、猪和鸡的肌肉、肝脏和肾脏组织中四环素类(四环素、金霉素、土霉素、多西环素)、磺胺类(乙酰磺胺、磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲 唑、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲异 唑、磺胺甲噻二唑、苯甲酰磺胺、磺胺二甲异嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺苯吡唑、酞磺胺噻唑)和喹诺酮类(诺氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、麻保沙星、沙拉沙星、二氟沙星、喹酸、氟甲喹)药物残留量的测定.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试样中残留的四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物,用 Mclvaine-Na２EDTA缓冲液提取,亲水亲脂平衡
型固相萃取柱净化,液相色谱-串联质谱法测定,外标法定量.
５ 试剂与材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５.１ 试剂
５.１.１ 乙腈(CH３CN):色谱纯.
５.１.２ 甲醇(CH３OH):色谱纯.
５.１.３ 乙酸乙酯(C４H８O２):色谱纯.
５.１.４ 甲酸(HCOOH):色谱纯.
５.１.５ 乙二胺四乙酸二钠.二水(C１０H１４N２Na２O８.２H２O).
５.１.６ 浓氨水(NH３H２O).
５.１.７ 磷酸氢二钠.十二水(Na２HPO４.１２H２O).
５.１.８ 磷酸二氢钠.二水(NaH２PO４.２H２O).
５.１.９ 柠檬酸.一水(C６H８O７.H２O).
５.１.１０ 氢氧化钠(NaOH).
５.２ 溶液配制
５.２.１ ０.０５mol/L磷酸二氢钠溶液:取磷酸二氢钠.二水７.８g,用水溶解并稀释至１０００mL.
５.２.２ ０.０５mol/L磷酸氢二钠溶液:取磷酸氢二钠.十二水１７.９g,用水溶解并稀释至１０００mL.
５.２.３ 磷酸盐缓冲液:取０.０５mol/L磷酸二氢钠溶液１９０mL,用０.０５mol/L磷酸氢二钠溶液稀释至１０００mL.
５.２.４ １mol/L氢氧化钠溶液:取氢氧化钠４g,用水溶解并稀释至１００mL.
５.２.５ ０.０３mol/L氢氧化钠溶液:取１mol/L氢氧化钠溶液３mL,用水稀释至１００mL.
５.２.６ Mclvaine-Na２EDTA 缓冲液:取柠檬酸.一水１２.９g、磷酸氢二钠.十二水１０.９g、乙二胺四乙酸二钠.二水３９.２g,加水９００mL,用１mol/L的氢氧化钠溶液调pH至５.０±０.２,用水稀释至１０００mL.
５.２.７ 洗脱液:取甲醇１５０mL,加乙酸乙酯１５０mL、浓氨水６mL,混匀.
５.２.８ 复溶液:取水４０mL,加甲醇５mL、乙腈５mL、甲酸０.０５mL,混匀.
５.３ 标准品
５.３.１ 四环素类:四环素、金霉素、土霉素、多西环素含量均≥９５.０％.具体见附录A.
５.３.２ 磺胺类:乙酰磺胺、磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲 唑、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲异 唑、磺胺甲噻二唑、苯甲酰磺胺、磺胺二甲异嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺苯吡唑、酞磺胺噻唑含量均≥９５.０％.具体见附录A.
５.３.３ 喹诺酮类:诺氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、麻保沙星、沙拉沙星、二氟沙星、 喹酸、氟甲喹含量均≥９５.０％.具体见附录A.
５.４ 标准溶液制备
５.４.１ 标准储备液(１mg/mL):取标准品各适量(相当于各活性成分约１０mg),精密称定,于１０mL容量瓶中,四环素类、磺胺类药物加甲醇溶解并稀释至刻度;喹诺酮类药物加０.０３mol/L氢氧化钠溶液溶解并稀释至刻度,配制成浓度均为１mg/mL的标准储备液.-１８℃以下保存,有效期６个月.
５.４.２ 混合标准工作液(１０μg/mL):分别取１mg/mL的标准储备液各０.１mL,于１０mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为１０μg/mL的混合标准工作液.-１８℃以下保存,有效期１个月.
５.４.３ 混合标准工作液(１μg/mL):精密量取１０μg/mL的混合标准工作液１mL,于１０mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为１μg/mL的混合标准工作液.-１８℃以下保存,有效期１个月.
５.４.４ 混合标准工作液(０.１μg/mL):精密量取１０μg/mL的混合标准工作液０.１mL,于１０mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为０.１μg/mL的混合标准工作液.-１８℃以下保存,有效期１个月.
５.５ 材料
５.５.１ 亲水亲脂平衡型固相萃取柱:２００mg/６mL,或相当者.
５.５.２ 微孔尼龙滤膜:０.２２μm.
６ 仪器和设备
６.１ 液相色谱-串联质谱仪:配电喷雾离子源.
６.２ 分析天平:感量０.００００１g和０.０１g.
６.３ 高速冷冻离心机:-２℃、１４０００r/min.
６.４ 组织匀浆机.
６.５ 涡旋混合器.
６.６ 固相萃取装置.
６.７ 氮吹仪.
６.８ 超声波清洗仪.
７ 试料的制备与保存
７.１ 试料的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎,并使均质.
a) 取均质后的供试样品,作为供试试料;
b) 取均质后的空白样品,作为空白试料;
c) 取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料.
７.２ 试料的保存
-１８℃以下保存.
８ 测定步骤
８.１ 提取
称取试料１g(准确至±０.０１g),加 Mclvaine-Na２EDTA缓冲液８mL,涡旋１min,超声２０min,
-２℃、１００００r/min离心５min,收集上清液.残渣中加磷酸盐缓冲液８mL,重复提取１次,合并２次提取液,混匀,备用.
８.２ 净化
固相萃取柱依次用甲醇５mL和水５mL活化,取备用液过柱,依次用水５mL和２０％甲醇水溶液
５mL淋洗,抽干,用洗脱液１０mL洗脱.收集洗脱液,４５℃水浴氮气吹干.加入复溶液１.０mL,涡旋
１min溶解残余物,１４０００r/min离心５min,微孔滤膜过滤,液相色谱-串联质谱测定.
８.３ 基质匹配标准曲线的制备
精密量取混合标准工作液适量,分别加入６份经提取和净化的空白试样残渣中,４５℃水浴氮气吹干,
加入复溶液１.０mL涡旋溶解残余物,配制成浓度为２μg/L、１０μg/L、５０μg/L、１００μg/L、２５０μg/L和５００μg/L的基质匹配系列混合标准溶液,微孔滤膜过滤,液相色谱-串联质谱仪测定.以测得特征离子峰面积为纵坐标、对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线,求回归方程和相关系数.
８.４ 测定
８.４.１ 液相色谱参考条件
a) 色谱柱:C１８(５０mm×２.１mm,１.７μm),或相当者;
b) 柱温:３５℃;
c) 进样量:１０μL;
d) 流速:０.３mL/min;
e) 流动相:A为０.１％甲酸水溶液,B为甲醇∶乙腈(２∶８,含０.１％甲酸,体积比)溶液,梯度洗脱条
件见表１.
８.４.２ 质谱参考条件
a) 离子源:电喷雾离子源;
b) 扫描方式:正离子扫描;
GB ３１６５８.１７-２０２１
c) 检测方式:多反应监测;
d) 离子源温度:１００℃;
e) 雾化温度:４５０℃;
f) 电离电压:３.０kV;
g) 锥孔气流速:３０L/h;
h) 雾化气流速:１０００L/h;
i) 定性离子对、定量离子对及锥孔电压和碰撞能量见表２.
８.４.３ 定性测定
在同样测试条件下,试样溶液中四环素类、磺胺类、喹诺酮类药物的保留时间与基质匹配标准溶液中
相应四环素类、磺胺类、喹诺酮类药物的保留时间,偏差在±２.５％以内,且检测到的相对离子丰度,应当与
浓度相当的基质匹配标准溶液相对离子丰度一致.其允许偏差应......
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