| 标准编号 | GB 31658.18-2022 (GB31658.18-2022) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 动物性食品中三氮脒残留量的测定 高效液相色谱法 | | 英文名称 | (National Food Safety Standard - Determination of Triazine Residues in Animal Foods - High Performance Liquid Chromatography) | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X04 | | 字数估计 | 9,998 | | 发布日期 | 2022-09-20 | | 实施日期 | 2023-02-01 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31658.18-2022: 食品安全国家标准 动物性食品中三氮脒残留量的测定 高效液相色谱法
GB 31658.18-2022 英文名称: (National Food Safety Standard - Determination of Triazine Residues in Animal Foods - High Performance Liquid Chromatography)
中华人民共和国国家卫生健康委员会
食品安全国家标准
动物性食品中三氮脒残留量的测定
高效液相色谱法
中华人民共和国国家标准
发 布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前 言
本文件按照GB/T １１-２０２０«标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定
起草.
本文件系首次发布.
食品安全国家标准
动物性食品中三氮脒残留量的测定 高效液相色谱法
１ 范围
本文件规定了动物性食品中三氮脒残留量检测的制样和高效液相色谱检测方法.
本文件适用于牛、羊的肌肉、肝脏、肾脏组织和牛奶、羊奶中三氮脒残留量的检测.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试样中残留的三氮脒经乙腈水提取(奶中残留的三氮脒经乙酸乙腈溶液提取),弱阳离子交换固相萃
取柱净化,高效液相色谱Ｇ紫外法测定,外标法定量.
５ 试剂和材料
以下所用的试剂,除特别注明外均为分析纯试剂;水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５１ 试剂
５１１ 甲醇(CH３OH):色谱纯.
５１２ 甲酸(HCOOH):色谱纯.
５１３ 甲酸铵(CH５NO２):色谱纯.
５１４ 氨水(NH３H２O).
５１５ 冰乙酸(CH３COOH).
５２ 溶液配制
５２１ ６０％乙腈溶液:取乙腈６０mL,加水４０mL,混匀.
５２２ ０５％乙酸乙腈溶液:取冰乙酸２５mL,用乙腈稀释至５００mL,混匀.
５２３ ５％氨水溶液:取氨水５mL,加水９５mL,混匀.
５２４ 乙酸甲醇溶液(pH７０):取冰乙酸６mL,加甲醇９４mL,混匀,用氨水调节pH至７０±００５.
５２５ ００２mol/L甲酸铵溶液(pH４０):取甲酸铵１２６g,加水９００mL溶解,用甲酸调节pH至４０±
００５,加水稀释至１０００mL.
５３ 标准品
二乙酰胺三氮脒(Diminazeneaceturate,C１４H１５N７２C４H７NO３,CAS号:９０８Ｇ５４Ｇ３),含量≥９１％.
５４ 标准溶液制备
５４１ 标准储备液:取二乙酰胺三氮脒标准品适量(相当于三氮脒约１０mg),精密称定,加水适量使溶解
并稀释定容至１０mL棕色容量瓶,配制成浓度为１mg/mL的三氮脒标准储备液.４℃避光保存,有效期
１个月.
５４２ 标准工作液:精密量取１mg/mL标准储备液１mL,于１００mL棕色容量瓶中,用水稀释至刻度,
配制成浓度为１０μg/mL的三氮脒标准工作液.４℃避光保存,有效期７d.
５５ 材料
５５１ 弱阳离子交换固相萃取柱:６０mg/３mL,或相当者.
５５２ 微孔尼龙滤膜:０２２μm.
６ 仪器和设备
６１ 高效液相色谱仪:配紫外检测器或二极管阵列检测器.
６２ 分析天平:感量０００００１g和００１g.
６３ pH计.
６４ 涡旋混合器.
６５ 涡旋振荡器.
６６ 高速冷冻离心机:转速≥１００００r/min.
６７ 固相萃取装置.
７ 试样的制备与保存
７１ 试样的制备
７１１ 组织
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎,并均质.
a) 取均质的供试样品,作为供试试样;
b) 取均质的空白样品,作为空白试样;
c) 取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液,作为空白添加试样.
７１２ 奶
取适量新鲜或解冻的空白或供试奶样,混合均匀.
a) 取混合均匀的供试样品,作为供试试样;
b) 取混合均匀的空白样品,作为空白试样;
c) 取混合均匀的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液,作为空白添加试样.
７２ 试样的保存
-１８℃以下保存.
８ 测定步骤
８１ 提取
８１１ 组织
取试料２g(准确至±００５g),置５０mL聚丙烯离心管中,加６０％乙腈溶液１８mL,涡旋１min,用冰
乙酸调节pH至５５±０１,振荡１０min,１００００r/min离心５min,取上清液,用６０％乙腈溶液稀释至
２００mL,混匀,取２０mL(肌肉样品取１００mL),备用.
８１２ 奶
取试料５g(准确至±００５g),置５０mL聚丙烯离心管中,准确加入０５％乙酸乙腈溶液１０mL,涡旋
１min,振荡１０min,１００００r/min离心１０min,移取全部上清液,备用.
８２ 净化
取弱阳离子交换固相萃取柱,依次用甲醇３mL、水３mL活化.取备用液过柱,再依次用５％氨水溶
液３mL、甲醇３mL淋洗,抽干,加乙酸甲醇溶液(pH７０)１０mL,洗脱,抽干,收集洗脱液,过微孔尼龙
滤膜,供高效液相色谱仪测定.
８３ 标准曲线的制备
精密量取标准工作液适量,用乙酸甲醇溶液(pH７０)稀释,配制成浓度为００５μg/mL、０１μg/mL、
０２μg/mL、０５μg/mL、１μg/mL、２μg/mL、５μg/mL的系列标准溶液,过微孔尼龙滤膜,供高效液相
色谱仪测定.以三氮脒色谱峰面积为纵坐标、标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线.求回归方程和
相关系数.
８４ 测定
８４１ 液相色谱参考条件
a) 色谱柱:C１８柱(２５０mm×４６mm,粒径５μm),或相当者;
b) 流动相:A为００２mol/L甲酸铵溶液(pH４０);B为甲醇;
c) 梯度洗脱:洗脱条件见表１;
d) 柱温:３０℃;
e) 进样量:２０μL;
f) 检测波长:３７０nm.
８４２ 测定法
取试料溶液和相应的标准溶液,作单点或标准曲线校准,按外标法以峰面积计算.标准工作液及试样
溶液中三氮脒响应值应在仪器检测的线性范围之内.试料中三氮脒的保留时间与标准溶液中三氮脒的保
留时间相对偏差应在±２５％以内.标准溶液的色谱图见附录A.
８５ 空白试验
取空白试料,除不加药物外,采用完全相同的测定步骤进行测定.
９ 结果计算和表述
试样中待测物含量以质量分数X 表示,单位为毫克每千克(mg/kg),按公式(１)计算.
１０ 检测方法灵敏度、准确度和精密度
１０１ 灵敏度
本方法在牛肉和羊肉中的检测限为００５mg/kg,定量限为０１mg/kg,在牛肝、牛肾、羊肝和羊肾中
的检测限为０２mg/kg,定量限为０５mg/kg,在牛奶和羊奶中的检测限为００１mg/kg,定量限......
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