| 标准编号 | GB 31658.25-2022 (GB31658.25-2022) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 动物性食品中10种利尿药残留量的测定液相色谱-串联质谱法 | | 英文名称 | (National Food Safety Standard Determination of 10 Diuretic Drug Residues in Animal Foods by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry) | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X04 | | 字数估计 | 16,149 | | 发布日期 | 2022-09-20 | | 实施日期 | 2023-02-01 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31658.25-2022: 食品安全国家标准 动物性食品中10种利尿药残留量的测定液相色谱-串联质谱法
GB 31658.25-2022 英文名称: (National Food Safety Standard Determination of 10 Diuretic Drug Residues in Animal Foods by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry)
中华人民共和国国家卫生健康委员会
食品安全国家标准
动物性食品中10种利尿药残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
中华人民共和国国家标准
发 布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前 言
本文件按照GB/T １１-２０２０«标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定
起草.
本文件系首次发布.
食品安全国家标准
动物性食品中１０种利尿药残留量的测定
液相色谱Ｇ串联质谱法
１ 范围
本文件规定了动物性食品中１０种利尿药残留量的制样和液相色谱Ｇ串联质谱测定方法.
本文件适用于猪、牛、羊、鸡、鸭的肌肉、鸡蛋和牛奶中乙酰唑胺、４Ｇ氨基Ｇ６Ｇ氯苯Ｇ１,３Ｇ二磺酰胺、氯噻
嗪、氢氯噻嗪、氯噻酮、呋塞米、卞氟噻嗪、氨苯蝶啶、螺内酯、坎利酮１０种利尿药残留量的测定.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试样经乙腈Ｇ水溶液提取,正己烷除脂,反相混合型亲水亲脂固相萃取柱净化,液相色谱Ｇ串联质谱仪
测定,内标法定量.
５ 试剂与材料
除另有规定外,所有试剂均为色谱纯,水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５１ 试剂
５１１ 乙腈(CH３CN).
５１２ 甲醇(CH３OH).
５１３ 正己烷(C６H１４).
５１４ 二甲基亚砜(C２H６OS).
５１５ 乙酸铵(CH３COONH４).
５２ 溶液配制
５２１ ９０％乙腈水溶液:取乙腈９００mL,加水稀释至１０００mL.
５２２ ５０％乙腈水溶液:取乙腈５０mL,加水稀释至１００mL.
５２３ ５mmol/L乙酸铵缓冲溶液:取乙酸铵０３８５g,加水溶解,稀释至１０００mL.
５２４ ９０％乙腈甲醇溶液:取甲醇１０mL,用乙腈稀释至１００mL,混匀.
５２５ 乙腈饱和正己烷溶液:取相同体积的乙腈和正己烷,置于分液漏斗中,振荡,静置分层,取上层
溶液.
５３ 标准品
５３１ 利尿药标准品:乙酰唑胺、４Ｇ氨基Ｇ６Ｇ氯苯Ｇ１,３Ｇ二磺酰胺、氯噻嗪、氢氯噻嗪、氯噻酮、呋塞米、卞氟
噻嗪、氨苯蝶啶、螺内酯、坎利酮,纯度均≥９８０％.或经国家认证并授予标准物质证书的标准品.标准品
信息见附录A中的表A１.
５３２ 同位素内标标准品:乙酰唑胺ＧD３、４Ｇ氨基Ｇ６Ｇ氯苯Ｇ１,３Ｇ二磺酰胺Ｇ１５N２、氯噻酮ＧD４、氢氯噻嗪Ｇ１３CD２、
氯噻嗪Ｇ１３C１５N２、呋塞米ＧD５、卞氟噻嗪ＧD５、氨苯蝶啶ＧD５、坎利酮ＧD６,纯度均≥９８０％.或经国家认证并授
予标准物质证书的标准品.同位素内标信息见附录A中的表A１.
５４ 标准溶液制备
５４１ 标准储备液(０１mg/mL):分别称取利尿药标准品各约１０mg,精密称定,用甲醇溶解并定容至
１００mL棕色容量瓶中,混匀,配制成浓度为０１mg/mL的利尿药标准储备液.氨苯蝶啶标准品需先用
１mL二甲基亚砜溶解,再用甲醇稀释并定容至刻度.-２０℃保存,有效期６个月.
５４２ 内标储备液(０１mg/mL):分别称取利尿药内标标准品各约１０mg,精密称定,用甲醇溶解并定容
至１００mL棕色容量瓶中,混匀,配制成浓度为０１mg/mL的利尿药内标标准储备液.氨苯蝶啶ＧD５标准
品需先用１mL二甲基亚砜溶解,再用甲醇稀释并定容至刻度.-２０℃保存,有效期６个月.
５４３ 混合标准工作液:精密量取氯噻嗪、氢氯噻嗪、卞氟噻嗪和坎利酮的标准储备液(０１mg/mL)各
１mL,氯噻酮、乙酰唑胺、呋塞米、螺内酯、４Ｇ氨基Ｇ６Ｇ氯苯Ｇ１,３Ｇ二磺酰胺、氨苯蝶啶的标准储备液
(０１mg/mL)各２５mL,于同一１００mL棕色容量瓶中,用甲醇定容至刻度,配制成的混合标准工作液中
氯噻嗪、氢氯噻嗪、卞氟噻嗪和坎利酮的浓度为１μg/mL;氯噻酮、乙酰唑胺、呋塞米、螺内酯和４Ｇ氨基Ｇ６Ｇ
氯苯Ｇ１,３Ｇ二磺酰胺、氨苯蝶啶的浓度为２５μg/mL.４℃以下避光保存,有效期１个月.
５４４ 内标工作液:精密量取内标储备液(０１mg/mL)各１mL,于１００mL棕色容量瓶中,用甲醇定容
至刻度,配制成浓度为１μg/mL的内标标准工作液.４℃以下避光保存,有效期１个月.
５４５ 混合标准系列工作液
精确吸取利尿药混合标准工作液１００μL、２００μL、５００μL、１００μL、２００μL、５００μL以及内标工作
液２００μL,分别置于１０mL棕色容量瓶中,用５０％乙腈水溶液定容至刻度.其中氯噻嗪、氢氯噻嗪、卞
氟噻嗪和坎利酮的浓度依次为１００ng/mL、２００ng/mL、５００ng/mL、１００ng/mL、２００ng/mL、
５００ng/mL;氯噻酮、乙酰唑胺、呋塞米、螺内酯、４Ｇ氨基Ｇ６Ｇ氯苯Ｇ１,３Ｇ二磺酰胺、氨苯蝶啶的浓度依次为
２５０ng/mL、５００ng/mL、１２５ng/mL、２５０ng/mL、５００ng/mL、１２５ng/mL,标准系列工作液中内标
溶液的浓度为２００ng/mL.现用现配.
５５ 材料
５５１ 固相萃取柱:通过式反相混合型亲水亲脂平衡共聚物固相萃取柱,２００mg/６mL,或性能相当者.
５５２ 有机滤膜:０２２μm.
６ 仪器和设备
６１ 液相色谱Ｇ串联质谱仪:配电喷雾离子源.
６２ 分析天平:感量分别为０００００１g和００１g.
６３ 氮吹浓缩仪.
６４ 涡旋混合器.
６５ 超声波发生器.
６６ 离心机:转速不低于８０００r/min.
６７ 固相萃取装置.
６８ 均质机.
７ 试样的制备与保存
７１ 试样制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试肌肉组织,绞碎,并均质.
取适量新鲜或冷藏的空白或供试鸡蛋,去壳后混合均匀.
取适量新鲜或冷藏的空白或供试牛奶,混合均匀.
a) 取均质后的供试样品,作为供试试样;
b) 取均质后的空白样品,作为空白试样;
c) 取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试样.
７２ 试样保存
猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、鸭肉和鸡蛋试样于-１８℃以下保存,牛奶试样于０℃~４℃保存.
８ 分析步骤
８１ 提取
８１１ 猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、鸭肉
称取试料２g(准确至±００５g),置于５０mL离心管中,加入４００μL内标工作液,加入９０％乙腈水
溶液８０mL,于涡旋振荡器上剧烈振荡２min.超声提取１５min,８０００r/min离心５min,取上清液至离
心管中.残渣加９０％乙腈水溶液８０mL重复提取１次,合并上清液.加入５mL乙腈饱和正己烷溶液,
低速涡旋１０s,８０００r/min离心３min,取下层清液,用９０％乙腈水溶液稀释至２００mL备用.
８１２ 鸡蛋、牛奶
称取试料２g(准确至±００２g),于５０mL离心管中,加入４００μL内标工作液,加入乙腈８０mL,于
涡旋振荡器上剧烈振荡２min.超声提取１５min,８０００r/min离心５min,取上清液至离心管中.残渣加
乙腈８０mL重复提取１次,合并上清液.加入５mL乙腈饱和正己烷溶液,低速涡旋１０s,８０００r/min
离心３min,取下层清液,用乙腈稀释至２００mL备用.
８２ 净化
取备用液１００mL过固相萃取柱,以不大于１mL/min的速率通过固相萃取柱,接收流出的样液,并
用１mL９０％乙腈甲醇溶液洗脱,接收全部洗脱液,于４０℃下氮气吹干.用１０mL５０％乙腈水溶液溶解
残余物,涡旋混匀,过０２２μm滤膜,供液相色谱Ｇ串联质谱仪测定.
８３ 测定
８３１ 液相色谱参考条件
a) 色谱柱:C１８色谱柱(１００mm×２１mm,１８μm),或相当者;
b) 流动相:A为５mmol/L乙酸铵水溶液,B为乙腈,梯度洗脱条件见表１;
c) 流速:０３mL/min;
d) 柱温:３５℃ ;
e) 进样量:５μL.
８３２ 质谱参考条件
a) 离子源:电喷雾(ESI)离子源;
b) 扫描方式:氨苯蝶啶、螺内酯、坎利酮为正离子模式;乙酰唑胺、４Ｇ氨基Ｇ６Ｇ氯苯Ｇ１,３Ｇ二磺酰胺、氯
噻嗪、氢氯噻嗪、氯噻酮、呋塞米、卞氟噻嗪为负离子模式;
c) 检测方式:多反应监测;
d) 离子化电压:正模式５５００V,负模式-４５００V;
e) 温度:５００℃;
f) 气帘气:２４１kPa;
g) 雾化气:３４５kPa;
h) 辅助加热气:３４５kPa;
i) 定性离子对、定量离子对、去簇电压及碰撞电压见附录B.
８３３ 测定法
８３３１ 定性测定
在相同实验条件下,样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在±２５％之内;
且样品中被测组分定性离子的相对离子丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对离子丰度进
行比较,偏差不超过表２规定的范围,则可判定为样品中存在对应的待测物.
１０种利尿药标准工作液和内标工作液的特征离子质量色谱图见附录C.
８３３２ 定量测定
按８３１和８３２设定仪器条件,取试样溶液和标准溶液,作单点或多点校准,按内标法以峰面积比
计算.试样溶液及标准溶液中的１０种利尿药的峰面积与其相应内标的峰面积比应在仪器检测的线性范
围之内.１０种利尿药的多反应检测特征离子质量色谱图见附录C.
８４ 空白试验
称取空白试样,除不加药物外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作.
９ 结果计算和......
|