| 标准编号 | GB 31658.5-2021 (GB31658.5-2021) | | 中文名称 | | | 英文名称 | (National Food Safety Standard Determination of Florfenicol and Florfenicol Residues in Animal Foods Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry) | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X04 | | 字数估计 | 8,859 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31658.5-2021: 食品安全国家标准 动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
食品安全国家标准
动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留
量的测定 液相色谱-串联质谱法
中华人民共和国国家标准
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前言
本文件按照GB/T １１-２０２０«标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定
起草.
本文件系首次发布.
食品安全国家标准
动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量的测定
液相色谱Ｇ串联质谱法
１ 范围
本文件规定了动物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量检测的制样和液相色谱Ｇ串联质谱测定
方法.
本文件适用于鸡、猪、牛、羊的肌肉、皮＋脂肪、肝脏和肾脏组织中氟苯尼考及氟苯尼考胺残留量的
测定.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试料中残留的氟苯尼考与氟苯尼考胺,用碱化的乙酸乙酯提取,正己烷除脂,固相萃取柱净化,液相色
谱Ｇ串联质谱法测定,内标法定量.
５ 试剂与材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５１ 试剂
５１１ 乙腈(CH３CN):色谱纯.
５１２ 甲醇(CH３OH):色谱纯.
５１３ 甲酸(HCOOH):色谱纯.
５１４ 乙酸乙酯(CH３COOC２H５).
５１５ 氨水(NH３H２O).
５１６ 乙酸(CH３COOH).
５２ 溶液配制
５２１ ５％乙酸水溶液:取乙酸５mL,用水溶解并稀释至１００mL.
５２２ １０％氨甲醇溶液:取氨水５mL,用甲醇溶解并稀释至５０mL,现用现配.
５２３ ３０％乙腈水溶液:取乙腈３０mL,用水溶解并稀释至１００mL.
５２４ 乙酸乙酯Ｇ氨水溶液:取乙酸乙酯９８mL,加氨水２mL,混匀.
５３ 标准品
５３１ 氟苯尼考(Florfenicol,C１２H１４Cl２FNO４S,CAS号:７３２３１Ｇ３４Ｇ２):含量≥９９０％.
５３２ 氟苯尼考胺(Florfenicolamine,C１０H１４FNO３S,CAS号:７６６３９Ｇ９３Ｇ５):含量≥９７６％.
GB ３１６５８５-２０２１
５３３ 氘代氯霉素(ChloramaphenicolD５,d５ＧCAP,CAS号:２０２４８０Ｇ６８Ｇ０):含量为１００ng/mL.
５４ 标准溶液制备
５４１ 氟苯尼考、氟苯尼考胺标准储备液:取氟苯尼考、氟苯尼考胺标准品各２５mg,精密称定,加乙腈适
量使溶解并稀释定容至２５mL容量瓶,分别制成氟苯尼考和氟苯尼考胺标准储备液.-１８℃以下保存,
有效期６个月.
５４２ １０μg/mL混合标准工作液:分别精密量取氟苯尼考、氟苯尼考胺标准储备液各１mL,于１００mL
容量瓶,用乙腈稀释至刻度,制成浓度为１０μg/mL混合标准工作液.２℃~８℃保存,有效期１个月.
５４３ １μg/mL混合标准工作液:精密量取１０μg/mL混合标准工作液１mL,于１０mL容量瓶,用乙腈
稀释至刻度,制成浓度为１μg/mL混合标准工作液.２℃~８℃保存,有效期１个月.
５５ 材料
MCX固相萃取柱６０mg/３mL,或相当者.
６ 仪器和设备
６１ 超高效液相色谱Ｇ串联质谱仪:配电喷雾离子源.
６２ 分析天平:感量０００００１g和００１g.
６３ 高速离心机.
６４ 涡旋混合器.
６５ 水平振荡器.
６６ 均质机.
６７ 固相萃取装置.
６８ 氮吹仪.
６９ 滤膜:有机相,０２２μm.
６１０ 鸡心瓶:１００mL.
７ 试料的制备与保存
７１ 试料的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎,并使均质.
a) 取均质的供试样品,作为供试试料;
b) 取均质的空白样品,作为空白试料;
c) 取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料.
７２ 试料的保存
-１８℃以下保存.
８ 测定步骤
８１ 提取
称取试料２g(准确到±００２g),于５０mL离心管中,加氘代氯霉素内标溶液１００μL,涡动混
匀,静置１５min.加乙酸乙酯Ｇ氨水溶液１０mL,涡动１min,３０００r/min离心５min,取上清液于
１００mL鸡心瓶中,残渣重复提取２次,合并３次提取液.鸡心瓶中加５％乙酸２mL,振摇混匀,于
４０℃水浴中浓缩至１５mL.转至另一５０mL离心管中,用５％乙酸２mL洗涤鸡心瓶,洗涤液转至
同一离心管,加正己烷５mL脱脂,涡动１min,３０００r/min离心５min,弃上层,下层提取液重复脱脂
一次,备用.
８２ 净化
MCX固相萃取柱依次用甲醇２mL和水２mL活化.备用液过柱,用５％乙酸２mL淋洗,用１０％氨
甲醇５mL洗脱.收集洗脱液,于４０℃氮气吹干.用３０％乙腈水溶液５００μL溶解残余物,滤膜过滤,供
超高效液相色谱Ｇ串联质谱测定.
８３ 基质匹配标准曲线的制备
精密量取１μg/mL混合标准工作液５μL、２５μL和５０μL,１０μg/mL混合标准工作液１０μL、２５μL
和５０μL,依次加入６份经提取和净化处理的空白试料浓缩液中,同时分别加入１００ng/mL氘代氯霉素内
标溶液１００μL,加３０％乙腈水溶液溶解并稀释至０５mL,配制成浓度为１０ng/mL、５０ng/mL、
１００ng/mL、２００ng/mL、５００ng/mL、１０００ng/mL的基质匹配系列标准溶液,滤过,供液相色谱Ｇ串联质
谱测定.以测得特征离子质量色谱峰峰面积比为纵坐标、对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制基质匹配标
准曲线.求回归方程和相关系数.
８４ 测定
８４１ 色谱条件
a) 色谱柱:C１８(１００mm×２１mm,１７μm),或相当者;
b) 流动相:A:水溶液,B:乙腈溶液;
c) 梯度洗脱:梯度洗脱条件见表１;
d) 流速:０２５mL/min;
e) 柱温:３０℃;
f) 进样量:１０μL.
８４２ 质谱条件
a) 离子源:电喷雾离子源;
b) 扫描方式:正离子扫描(氟苯尼考胺)和负离子扫描(氟苯尼考和氘代氯霉素);
c) 检测方式:多反应监测;
d) 电离电压:２８kV;
e) 源温:８０℃;
f) 雾化温度:３００℃;
g) 锥孔气流速:３０L/h;
h) 雾化气流速:６００L/h;
i) 测试药物定性离子对、定量离子对及对应的锥孔电压、碰撞能量见表２.
８４３ 测定法
取试料溶液和基质匹配标准溶液,作单点或多点校准,按内标法以色谱峰面积定量.试样溶液和基质
匹配标准溶液中氟苯尼考和氟苯尼考胺的特征离子质量色谱峰峰面积均应在仪器检测的线性范围之内.
试样溶液中的相对离子丰度与基质匹配标准溶液中的相对离......
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