| 标准编号 | GB 31658.6-2021 (GB31658.6-2021) | | 中文名称 | | | 英文名称 | National food safety standard - Determination of tetracylines residues in animal derived food by high performance liquid chromatography method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X04 | | 字数估计 | 8,846 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31658.6-2021: 食品安全国家标准 动物性食品中四环素类药物残留量的测定 高效液相色谱法
食品安全国家标准
动物性食品中四环素类药物残留量的测定
高效液相色谱法
中华人民共和国国家标准
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前言
本文件按照GB/T １１-２０２０«标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定
起草.
本文件系首次发布.
食品安全国家标准
动物性食品中四环素类药物残留量的测定
高效液相色谱法
１ 范围
本文件规定了动物性食品中四环素类药物残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法.
本文件适用于猪、牛、羊、鸡的肌肉、肝脏和肾脏,猪、鸡的皮＋脂肪,鸡蛋,牛奶,鱼皮＋肉,虾肌肉中土
霉素、四环素、金霉素、多西环素残留量的检测.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅
该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试料中残留的四环素类药物,经EDTA２NaＧMclvaine缓冲溶液提取,固相萃取柱净化,高效液相色
谱Ｇ紫外法测定,外标法定量.
５ 试剂与材料
以下所用的试剂,除特别注明外均为分析纯试剂;水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５１ 试剂
５１１ 甲醇(CH３OH):色谱纯.
５１２ 乙腈(CH３CN):色谱纯.
５１３ 三氟乙酸(CF３COOH).
５１４ 二氯甲烷(CH２Cl２).
５１５ 乙二胺四乙酸二钠(C１０H１４N２Na２O８).
５１６ 枸橼酸(C６H８O７H２O).
５１７ 磷酸氢二钠(NaH２PO４１２H２O).
５１８ 草酸(H２C２O４２H２O).
５１９ 硫酸(H２SO４).
５１１０ 钨酸钠(Na２WO４).
５２ 标准品
盐酸土霉素含量≥９７０％,盐酸四环素含量≥９７５％,盐酸金霉素含量≥９３１％,盐酸多西环素含量
≥９８２％,见附录A.
５３ 溶液配制
５３１ 柠檬酸溶液:取柠檬酸２１０１g,用水溶解并稀释至１０００mL.
５３２ 磷酸氢二钠溶液:取磷酸氢二钠７１６３g,用水溶解并稀释至１０００mL.
GB ３１６５８６-２０２１
５３３ Mclvain缓冲溶液(pH４０):取枸橼酸溶液１０００mL、磷酸氢二钠溶液６２５mL,混匀,用盐酸或
氢氧化钠溶液调pH至４０±００５.
５３４ EDTA２NaＧMclvaine缓冲溶液:取乙二胺四乙酸二钠 ６０５g,加 Mclvaine缓冲溶液
１６２５mL,溶解,混匀.
５３５ 草酸溶液(００１mol/L):取草酸１２６g,用水溶解并稀释至１０００mL.
５３６ 三氟乙酸溶液:取三氟乙酸０８mL,用水溶解并稀释至１０００mL.
５３７ 硫酸溶液:取硫酸１８５mL,用水溶解并稀释至１００mL.
５３８ 钨酸钠溶液:取钨酸钠７g,用水溶解并稀释至１００mL.
５３９ 草酸溶液(１mol/L):取草酸１２６g,用水溶解并稀释至１００mL.
５３１０ 草酸Ｇ乙腈溶液:取草酸溶液(１mol/L)２０mL,用乙腈溶解并稀释至１００mL.
５４ 标准溶液制备
５４１ 标准储备液:取盐酸土霉素、盐酸四环素、盐酸金霉素和盐酸多西环素标准品各约１０mg,精密称
定,用甲醇溶解并稀释定容至１０mL容量瓶,配制成浓度为１mg/mL的土霉素、四环素、金霉素和多西环
素标准储备液.-１８℃以下保存,有效期１个月.
５４２ 混合标准工作液:精密量取土霉素、四环素、金霉素和多西环素标准储备液各１mL,于１００mL容
量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度为１０μg/mL的混合标准工作液.２℃~８℃保存.现用现配.
５５ 材料
５５１ HLB固相萃取柱:５００mg/６mL,亲脂性二乙烯苯和亲水性NＧ乙烯吡咯烷酮按特定比例形成的
聚合物,或相当者.
５５２ LCX固相萃取柱１):５００mg/６mL,填料为磷酸化聚苯乙烯二乙烯苯高聚物,或相当者.
１) 本实验所列LCX固相萃取柱由Agela公司研制提供的,此处列出固相萃取柱仅为提供参考,并不涉及商业目的,鼓励标准使用者
尝试采用不同厂家或型号的固相萃取柱.
６ 仪器和设备
６１ 高效液相色谱仪:配紫外检测器.
６２ 分析天平:感量０００００１g和００１g.
６３ 组织匀浆器.
６４ 涡旋混合器:３０００r/min.
６５ 低温离心机:转速可达８５００r/min.
６６ 固相萃取装置.
６７ 氮吹仪.
６８ 尼龙微孔滤膜:０２２μm.
６９ 离心管:５０mL.
７ 试料的制备与保存
７１ 试料的制备
７１１ 组织
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织绞碎,并使均质.
a) 取均质的供试样品,作为供试试料;
b) 取均质的空白样品,作为空白试料;
c) 取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液,作为空白添加试料.
７１２ 牛奶
取适量新鲜或冷藏的空白或供试牛奶,混合均匀.
a) 取均质的供试样品,作为供试试料;
b) 取均质的空白样品,作为空白试料;
c) 取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液,作为空白添加试料.
７１３ 鸡蛋
取适量新鲜的供试鸡蛋,去壳,并使均质.
a) 取均质的供试样品,作为供试试料;
b) 取均质的空白样品,作为空白试料;
c) 取均质的空白样品,添加适宜浓度的标准溶液,作为空白添加试料.
７２ 试料的保存
-１８℃以下保存,３个月内进行分析检测.
８ 测定步骤
８１ 提取
８１１ 皮＋脂肪
取试料５g(准确至±００２g),加二氯甲烷１５mL,涡旋１min,振荡５min,加EDTA２NaＧMclvaine
缓冲溶液１５mL,涡旋１min,振荡５min,８５００r/min离心５min,取上清液.下层溶液用EDTA２NaＧ
Mclvaine缓冲溶液重复萃取２次,每次１５mL,合并上清液,中性滤纸过滤,备用.
８１２ 肌肉、肝脏、肾脏、牛奶、鸡蛋
称取试料５g(准确至±００２g),加 EDTA２NaＧMclvaine缓冲溶液２０mL,涡旋１min,振荡
１０min,加硫酸溶液５mL、钨酸钠溶液５mL,涡旋１min,８５００r/min离心５min,取上清液.残渣用
EDTA２NaＧMclvaine缓冲溶液２０mL、１０mL各提取２次,合并上清液,中性滤纸过滤,备用.
８２ 净化
HLB柱依次用甲醇、水和EDTA２NaＧMclvaine缓冲溶液各５mL活化.备用液过柱,待全部备用液流
出后,依次用水、５％甲醇溶液各１０mL淋洗,抽干３０s,用甲醇６mL洗脱,收集洗脱液于刻度试管中,加水
２mL,混匀,过甲醇５mL、水５mL活化的LCX柱,待全部液体流出后,用水、甲醇各５mL淋洗,抽干１min,
草酸Ｇ乙腈溶液６mL洗脱,收集洗脱液,于４０℃水浴氮气吹至０５mL~１０mL,再加甲醇０４mL,用草酸
溶液(００１mol/L)稀释至２０mL,微孔滤膜过滤,高效液相色谱测定(上机溶液应在２４h内完成测定).
８３ 标准曲线的制备
精密量取混合标准工作液适量,用草酸溶液(００１mol/L)稀释成浓度为００５μg/mL、０１μg/mL、
０２μg/mL、０５μg/mL、１μg/mL、２μg/mL、５μg/mL的系列混合标准液,供高效液相色谱测定.以测得
的峰面积为纵坐标、对应的标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线.求回归方程和相关系数.
８４ 测定
８４１ 液相色谱参考条件
a) 色谱柱:C１８(１５０mm×４６mm,５μm),或相当者;
b) 流动相:A为三氟乙酸溶液,B为乙腈,梯度洗脱条件见表１;
c) 检测波长:３５０nm;
d) 进样量:５０μL;
e) 柱温:３０℃.
８４２ 测定法
取试料溶液和相应的标准溶液,作单点或多点校准,以色谱峰面积定量,按外标法计算.标准溶液及
试料溶液中四环素类药物响应值应在仪器检测的线性范围之内.试料中四环素类药物的保留时间与标准
工作液相应峰的保留时间相对偏差应在±２５％以内.在上述色谱条件下,标准溶液的高效液相色谱图分
别见附录B.
８５ 空白试验
取空白试料,除不加标准溶液外,采用相同的测定步骤进行平行操作.
９ 结果计算和表述
试料中四环素类药物的残留量按标准曲线或公式(１)计算.
１０ 检测方法的灵敏度、准确度和精密度
１０１ 灵敏度
本方法在猪、牛、羊、鸡的肌肉,鸡蛋,牛奶,鱼皮＋肉、虾肌肉中检测限为２０μg/kg,定量限为
５０μg/kg;在猪、牛、羊、鸡的肝脏、肾脏,猪、鸡的皮＋脂......
|