| 标准编号 | GB 31658.7-2021 (GB31658.7-2021) | | 中文名称 | | | 英文名称 | National food safety standard - Determination of 17B-estradiol, estriol, ethinylestradiol and estrone residues in animal products by gas chromatography-mass spectrometry method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X04 | | 字数估计 | 9,912 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | GB 31658.7-2021: 食品安全国家标准 动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮残留量的测定 气相色谱-质谱法
食品安全国家标准
动物性食品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌
醇和雌酮残留量的测定 气相色谱-质谱法
中华人民共和国国家标准
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前言
本文件按照GB/T １１-２０２０«标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定
起草.
本文件系首次发布.
食品安全国家标准
动物性食品中１７βＧ雌二醇、雌三醇、炔雌醇和
雌酮残留量的测定 气相色谱Ｇ质谱法
１ 范围
本文件规定了牛、羊、猪、鸡肌肉和猪肝脏、肾脏、脂肪中类固醇激素类药物(１７βＧ雌二醇、雌三醇、炔雌
醇、雌酮)残留量检测的制样和气相色谱Ｇ质谱测定方法.
本文件适用于牛、羊、猪、鸡肌肉和猪肝脏、肾脏、脂肪中１７βＧ雌二醇、雌三醇、炔雌醇、雌酮残留量的
检测.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
３ 术语与定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
试样中残留的１７βＧ雌二醇、雌三醇、炔雌醇、雌酮,经酶解、提取、净化和衍生,气相色谱Ｇ质谱法测定,
外标法定量.
５ 试剂与材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５１ 试剂
５１１ 乙腈(CH３CN):色谱纯.
５１２ 甲醇(CH３OH):色谱纯.
５１３ 乙酸乙酯(CH３COOC２H５).
５１４ 正己烷(C６H１４).
５１５ 甲苯(C６H５CH３).
５１６ 氢氧化钠(NaOH).
５１７ 醋酸钠(NaC２H３O２３H２O).
５１８ 醋酸铵(NH４C２H３O２).
５１９ 冰醋酸(C２H４O２).
５１１０ 二硫赤藓糖醇(C４H１０O２S２,DTE).
５１１１ 三甲基碘硅烷(C３H９ISi,TMIS).
５１１２ 葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶.
５１１３ NＧ甲基三甲基硅基三氟乙酰氨(MSTFA).
５２ 标准品
５２１ １７βＧ雌二醇(１７βＧEstradiol,C１８H２４O２,CAS号:５０Ｇ２８Ｇ２):含量≥９８０％.
５２２ 雌三醇(Estriol,C１８H２４O３,CAS号:５０Ｇ２７Ｇ１):含量≥９８０％.
５２３ 炔雌醇(Ethinylestradiol,C２０H２４O２,CAS号:５７Ｇ６３Ｇ６):含量≥９８０％.
５２４ 雌酮(Estrone,C１８H２２O２,CAS号:２００Ｇ１６４Ｇ５):含量≥９８０％.
５３ 溶液配制
５３１ 氢氧化钠溶液(１.０mol/L):取氢氧化钠４０g,用水溶解并稀释至１０００mL.
５３２ 醋酸钠缓冲液(pH５.２):取醋酸钠１９.０g,用水溶解并稀释至５００mL,用醋酸调节pH至５２.
５３３ 醋酸铵溶液(２.０mol/L):取醋酸铵４６.２５g,用水溶解并稀释至３００mL.
５３４ 甲醇水溶液:取４００mL甲醇,加水至１０００mL.
５３５ 乙酸乙酯正己烷溶液:取乙酸乙酯１０mL,加正己烷使溶解并稀释至１００mL.
５３６ 衍生化试剂:称取二硫赤藓糖醇００１g,用NＧ甲基三甲基硅基三氟乙酰氨５mL溶解,在液面下加
入三甲基碘硅烷１０μL,混匀,２℃~８℃放置过夜,避光防潮密封保存.衍生化试剂应无色,如果发生棕
红色等颜色变化,表明试剂失效.
５４ 标准溶液的制备
５４１ 标准储备液(１００μg/mL):取１７βＧ雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮标准品各约１０mg,精密称定,分
别加甲醇适量使溶解并稀释定容至１００mL容量瓶,配成浓度为１００μg/mL的标准储备液.-１８℃以下
保存,有效期６个月.
５４２ 混合标准工作液(１μg/mL):分别精密量取１７βＧ雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮标准储备液各
１mL于１００mL容量瓶,用甲醇稀释至刻度,配制成浓度均为１μg/mL的混合标准工作液.２℃~８℃保
存,有效期１个月.
５５ 材料
５５１ C１８固相萃取柱:５００mg/３mL,或相当者.
５５２ 硅胶固相萃取柱:５００mg/３mL,或相当者.
６ 仪器和设备
６１ 气相色谱Ｇ质谱联用仪:配EI源.
６２ 分析天平:感量０.００００１g和０.０１g.
６３ 氮吹仪.
６４ 固相萃取装置.
６５ 移液器:量程２００μL~１０００μL.
６６ 移液器:量程２０μL~１００μL.
６７ 均质机.
６８ 涡旋混合器.
６９ 离心机:１００００r/min.
６１０ 烘箱.
６１１ pH计.
６１２ 旋转蒸发仪.
６１３ 鸡心瓶:１００mL.
７ 试料的制备与保存
７１ 试料的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织,绞碎,并使均质.
a) 取均质后的供试样品,作为供试试料;
b) 取均质后的空白样品,作为空白试料;
c) 取均质后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料.
７２ 试料的保存
-１８℃以下保存,３个月内进行分析检测.
８ 测定步骤
８１ 提取
取试样５g(准确至±０.０２g),于５０mL离心管,加醋酸钠缓冲液１０mL,均质１min,涡旋振荡
２min,加葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶２０μL,５０℃酶解２h,加乙酸乙酯２０mL,涡旋振荡３min,
１００００r/min离心５min,收集上清液于１００mL鸡心瓶中,残渣中加乙酸乙酯２０mL,重复提取１次,合并
上清液,４０℃水浴旋转蒸发至近干,用氢氧化钠溶液６mL分３次溶解洗涤鸡心瓶,洗液转入５０mL离心
管中,加正己烷２０mL,涡旋振荡１min,１００００r/min离心５min,收集下层清液,加醋酸铵溶液１mL,用
冰醋酸调pH至５.０~５.２,备用.
８２ 净化
取C１８固相萃取柱,依次用甲醇、水各５mL活化.取备用液,过柱,分别用水、甲醇水溶液各５mL淋
洗,抽干,加甲醇５mL,洗脱,收集洗脱液,５０℃水浴氮气吹干.加乙酸乙酯正己烷溶液５mL使溶解,备
用;取硅胶固相萃取柱,加正己烷５mL活化,取备用液过柱,淋洗,抽干,加乙腈５mL,洗脱,收集洗脱液,
５０℃水浴氮气吹干.
８３ 衍生
加甲苯、衍生化试剂各１００μL于上述氮气吹干的玻璃试管中,振荡混合,封口,于８０℃烘箱中衍生
６０min,冷却,供GCＧMS测定.
８４ 标准工作曲线制备
精密量取混合标准工作液适量,用甲醇稀释成浓度分别１０μg/L、５０μg/L、１００μg/L、２００μg/L、
５００μg/L、１０００μg/L系列标准溶液,各准确量取５００μL,５０℃水浴氮气吹干,按步骤７３进行衍生,冷
却后再各加甲苯３００μL进行GCＧMS测定.以１７βＧ雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮各浓度为横坐标,相应
的定量离子峰面积为纵坐标,绘制标准曲线或求线性回归方程.
８５ 测定
８５１ 色谱参考条件
a) 色谱柱:MS石英毛细管色谱柱(３０m×０.２５mm,０.２５μm),或相当者;
b) 载气为高纯He,恒流１.０mL/min;
c) 进样口温度２２０℃;
d) 不分流进样;
e) 进样体积:１μL;
f) 色谱柱起始温度１００℃,保持１min;２０℃/min的升温速率升至２００℃,保持３min;２０℃/min
的升温速率升至２６０℃,保持５min;再以２０℃/min的升温速率升至２８０℃,保持３min.
８５２ 质谱参考条件
a) 离子源(EI)温度:２３０℃;
b) EM电压:高于调谐电压２００V;
c) 电子能量:７０eV;
d) GC/MS传输线温度:２８０℃;
e) 四极杆温度:１５０℃;
f) 选择离子监测(SIM):１７βＧ雌二醇、雌三醇、炔雌醇和雌酮衍生物的监测......
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