| 标准编号 | GB 31659.1-2021 (GB31659.1-2021) | | 中文名称 | 食品安全国家标准 牛奶中赛拉嗪残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 | | 英文名称 | National food safety standard--Determination of xylazine residue in milk by liquid chromatography -tandem mass spectrometric method | | 行业 | 国家标准 | | 中标分类 | X16 | | 国际标准分类 | 67.100 | | 字数估计 | 12,193 | | 发布日期 | 2021-09-16 | | 实施日期 | 2022-02-01 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家卫生健康委员会、国家市场监督管理总局 | | 范围 | 本文件规定了牛奶中赛拉嗪残留量检测的制样和液相色谱串联质谱测定方法。本文件适用于牛奶中赛拉嗪残留量的定性、定量检测。 | GB 31659.1-2021: 食品安全国家标准 牛奶中赛拉嗪残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
食品安全国家标准
牛奶中赛拉嗪残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
中华人民共和国国家标准
中华人民共和国国家卫生健康委员会发布
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
中华人民共和国农业农村部
前言
本文件按照GB/T １.１-２０２０«标准化工作导则 第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.
本文件系首次发布.
１ 范围
本文件规定了牛奶中赛拉嗪残留量检测的制样和液相色谱Ｇ串联质谱测定方法.
本文件适用于牛奶中赛拉嗪残留量的定性、定量检测.
２ 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件.
GB/T ６６８２ 分析实验室用水规格和试验方法
３ 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
４ 原理
牛奶中残留的赛拉嗪,经乙腈提取并沉淀蛋白,固相萃取柱净化,液相色谱Ｇ串联质谱仪测定,基质匹
配标准溶液外标法定量.
５ 试剂和材料
除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为符合GB/T ６６８２规定的一级水.
５.１ 试剂
５.１.１ 甲醇(CH３OH):色谱纯.
５.１.２ 乙腈(CH３CN):色谱纯.
５.１.３ 浓氨水(NH３.H２O).
５.１.４ 甲酸(HCOOH).
５.２ 溶液的配制
５.２.１ ２％甲酸甲醇溶液:取甲酸２mL,加甲醇稀释至１００mL,混匀,即得.
５.２.２ ０.５％氨水溶液:取浓氨水０.５mL,加水稀释至１００mL,混匀,即得.
５.２.３ ２０％乙腈溶液:取乙腈２００mL,加水稀释至１０００mL,混匀,即得.
５.２.４ 流动相A:０.１％甲酸乙腈溶液:取甲酸０.１mL,加乙腈稀释至１００mL,混匀,即得.
５.２.５ 流动相B:０.１％甲酸溶液:取甲酸０.１mL,加水稀释至１００mL,混匀,即得.
５.３ 标准品
赛拉嗪(Xylazine,C１２H１６N２S,CAS号:７３６１Ｇ６１Ｇ７),含量≥９８.０％.
５.４ 标准溶液的制备
５.４.１ 标准储备液(１mg/mL):取赛拉嗪标准品约１０mg,精密称定,用乙腈溶解并定容至１０mL容量瓶中摇匀,即得-１８℃以下保存,有效期３个月.
５.４.２ 标准中间液(１０μg/mL):精密量取上述标准储备液１００μL,于１０mL容量瓶中,加乙腈稀释至刻度,摇匀,即得.２℃~８℃保存,有效期１个月.
５.４.３ 标准工作液(１００ng/mL):精密量取上述标准中间液１００μL,于１０mL容量瓶中,加２０％乙腈溶液稀释至刻度,摇匀,即得.２℃~８℃保存,有效期１个月.
５.５ 材料
５.５.１ 固相萃取柱:HLB(６０mg/３mL),或相当者.
５.５.２ 微孔滤膜:０.２２μm.
６ 仪器和设备
６.１ 液相色谱Ｇ串联质谱仪:配电喷雾离子源.
６.２ 天平:感量０.０１g.
６.３ 分析天平:感量０.００００１g.
６.４ 涡旋混合器.
６.５ 振荡器.
６.６ 离心机.
６.７ 氮吹仪.
６.８ 超声波仪.
７ 试料的制备与保存
７.１ 试料的制备
试料的制备包括:
a) 取混匀后的供试样品,作为供试试料;
b) 取混匀后的空白样品,作为空白试料;
c) 取混匀后的空白样品,添加适宜浓度的标准工作液,作为空白添加试料.
７.２ 试料的保存
-１８℃以下保存.
８ 测定步骤
８.１ 提取
称取试料２(±０.０２)g,加乙腈８mL,涡旋混合２０s,振荡提取５min,５℃下８０００r/min离心５min,取上清液于１０mL离心管,４０℃水浴氮气流下浓缩至小于２mL,加０.５％的氨水溶液４mL,涡旋混合,备用.
８.２ 净化
依次用甲醇３mL、水３mL、０.５％氨水溶液３mL活化固相萃取柱.取备用液全部过柱,用水３mL
淋洗,真空抽干,用２％甲酸甲醇溶液３mL洗脱.将洗脱液于４０℃水浴中氮气吹干,残余物中加入２０％乙腈溶液０.５mL,涡旋后超声溶解５min,经０.２μm滤膜过滤后,供液相色谱Ｇ串联质谱仪分析.
８.３ 基质匹配标准曲线的制备
精密量取标准工作液适量,用 ２０％ 乙腈溶液稀释成 ０.５ng/mL、１.０ng/mL、２.０ng/mL、
５.０ng/mL、１０ng/mL、２０ng/mL、５０ng/mL的系列工作溶液.将空白牛奶样品经提取、净化、氮气吹干后,用上述系列标准工作液０.５mL溶解,制成系列浓度的基质匹配标准溶液.采用液相色谱Ｇ串联质谱
仪测定,以待测物的特征离子质量色谱峰面积为纵坐标,以基质匹配标准溶液浓度为横坐标,绘制标准工作曲线,计算线性方程及回归系数.
８.４ 测定
８.４.１ 液相色谱参考条件
a) 色谱柱:C１８色谱柱(５０mm×２.１mm,１.７μm)或相当者;
GB ３１６５９.１-２０２１
b) 流动相:A为０.１％甲酸乙腈溶液,B为０.１％甲酸溶液;
c) 流速:０.３mL/min;
d) 进样量:１０μL;
e) 柱温:３０℃;
f) 流动相梯度洗脱程序:０min~２.５min,A相由５％线性变化至５０％;２.５min~３min,保持A相
比例１００％;３min~４.５min,保持A相比例为５％.
８.４.２ 串联质谱参考条件
a) 离子源:电喷雾离子源;
b) 扫描方式:正离子扫描
c) 检测方式:多反应监测(MRM);
d) 定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量参考值见表１.
８.４.３ 测定
试样溶液中待测药物的保留时间在基质匹配标准溶液待测物药物保留时间±２.５％之内,试样溶液中
的相对离子丰度与基质匹配标准溶液中的相对离子丰度相比,应符合表２的要求.
８.５ 空白试验
取空白试料,除不加药物外,采用完全相同的测定步骤进行测定.
９ 结果......
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