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GB/T 20944.3-2008 相关标准英文版PDF, 自动发货

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GB/T 20944.3-2008 125 GB/T 20944.3-2008 3秒自动 纺织品　抗菌性能的评价　第3部分：振荡法
   
基本信息
标准编号 GB/T 20944.3-2008 (GB/T20944.3-2008)
中文名称 纺织品　抗菌性能的评价　第3部分：振荡法
英文名称 Textiles - Evaluation for antibacterial activity - Part 3: Shake flask method
行业 国家标准 (推荐)
中标分类 W04
国际标准分类 59.080.01
字数估计 9,971
发布日期 2008-04-29
实施日期 2008-12-01
引用标准 GB/T 12490
标准依据 国家标准批准发布公告2008年第6号(总第119号)
发布机构 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会
范围 GB/T 20944的本部分规定了采用振荡法测定纺织品抗菌性能的定量试验和评价方法。本部分适于羽绒、纤维、纱线、织物, 以及特殊形状制品等各类纺织产品, 尤其适用于非溶出型抗菌纺织产品。本部分不涉及抗菌产品安全性的评价。

GB/T 20944.3-2008: 纺织品　抗菌性能的评价　第3部分：振荡法 GB/T 20944.3-2008 英文名称: Textiles -- Evaluation for antibacterial activity -- Part 3: Shake flask method ICS ５９．０８０．０１ W０４ 中华人民共和国国家标准 １　范围 GB/T ２０９４４的本部分规定了采用振荡法测定纺织品抗菌性能的定量试验和评价方法。 本部分适用于羽绒、纤维、纱线、织物，以及特殊形状的制品等各类纺织产品，尤其适用于非溶出型抗菌纺织产品。 本部分不涉及抗菌产品安全性的评价。 ２　规范性引用文件 下列文件中的条款通过GB/T ２０９４４的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文 件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。 纺织品　色牢度试验　耐家庭和商业洗涤色牢度 ３　术语和定义下列术语和定义适用于GB/T ２０９４４的本部分。 ３．１纺织品所具有的能抑制织物上的细菌生长繁殖的性能。 ３．２用于验证试验微生物生长条件的、不经任何处理的１００％棉织物。 注：已被证明采用色牢度试验用的棉标准贴衬织物，经高温蒸煮和蒸馏水洗涤后作为对照样是合适的。 ４　安全预防措施 安全须知：本试验所采用的试验菌能使人感染致病，应采取一切必要的预防措施，免除对人员和环 境的危害，试验应由经过培训的人员进行。 ５　原理将试样与对照样分别装入一定浓度的试验菌液的三角烧瓶中，在规定的温度下振荡一定时间，测定 三角烧瓶内菌液在振荡前及振荡一定时间后的活菌浓度，计算抑菌率，以此评价试样的抗菌效果。 ６　试验器具 ６．１　分光光度计：检测波长４７５ｎｍ或６６０ｎｍ适合于测试试验菌液的浓度。 ６．２　恒温培养箱：温控精度为±１℃。 ６．３　水浴锅：温度能保持在４６℃±２℃。 ６．４　恒温振荡器（摇床）：温度精度为±１℃。 ６．５　冰箱：温度能保持在５℃～１０℃。 ６．６　玻璃门冷藏箱：温度能保持在５℃～１０℃。 ６．７　高压灭菌锅：温度能保持在１２１℃，压力能保持在１０３ｋＰａ。 ６．８　带塞三角烧瓶：容量为２５０ｍＬ。 ６．９　培养皿：直径９０ｍｍ。 ６．１０　旋涡式振动器。 ６．１１　二级生物安全柜。 ６．１２　试管、吸管、烧瓶等实验室常用器具。 ７　培养基和试剂 试验所用试剂应是分析纯的或适合于微生物试验用的。试验用水应是纯水，如蒸馏水。 注：建议使用现有商业化的脱水原料制备培养基，并严格按照相关产品制造商的使用说明操作。 ７．１　营养肉汤 牛肉膏 ３ｇ蛋白胨 ５ｇ蒸馏水 （最终定容至）１０００ｍＬ灭菌后，ｐＨ值为６．８±０．２。 ７．２　营养琼脂培养基牛肉膏 ３ｇ蛋白胨 ５ｇ琼脂粉 １５ｇ 蒸馏水 （最终定容至）１０００ｍＬ灭菌后，ｐＨ值为６．８±０．２。 ７．３　沙氏琼脂培养基 葡萄糖 ４０ｇ蛋白胨 １０ｇ琼脂粉 ２０ｇ蒸馏水 （最终定容至）１０００ｍＬ 灭菌后，ｐＨ值为５．６±０．２。磷酸氢二钠 ２．８４ｇ磷酸二氢钾 １．３６ｇ 蒸馏水 （最终定容至）１０００ｍＬ灭菌后，ｐＨ值为７．２～７．４，５℃～１０℃保存备用。 ８　试验菌种８．１　菌种选一种； 注１：可使用加入世界菌种保藏联合会（ＷＦＣＣ）的菌种保藏机构提供的、与上述菌种等效的试验菌。 注２：如果需要，可采用其他的试验菌种，培养基成分、培养温度和培养方法应根据要求调整。 ８．２　菌种转种及保存 冻干菌激活后接种斜面试管培养，然后贮存于冰箱 （５℃～１０℃），作为保存菌。每一个月应转种一 次，转种后放于冰箱（５℃～１０℃）保存，转种次数不应超过１０代。若转种后保存时间超过一个月，不能用于下一次转种。 ８．３　标识对每个菌种应标注如下信息： ａ）　供应冻干菌的菌种保藏机构名称； ｂ）　冻干菌的名称和编号； ｃ）　冻干菌的批号； ｄ）　冻干菌激活日期； ｅ）　保存菌的贮藏日期； ｆ）　保存菌的实验室编号。 ９　试验菌液的准备 ９．１　细菌菌液的培养和准备 ９．１．１　两步预培养程序制备细菌接种菌悬液 从３代～１０代的细菌保存菌种（８．２）试管斜面中取一接种环细菌，在营养琼脂平板（７．２）上划线。 于３７℃±１℃，培养１８ｈ～２４ｈ。用接种环从平板中挑出一个典型菌落，接种于２０ｍＬ营养肉汤（７．１） 中。３７℃±１℃，１３０ｒ／ｍｉｎ，振荡培养１８ｈ～２０ｈ，即制成了接种菌悬液。菌液含量采用分光光度计法 或稀释法测定，活菌数应达到１×１０９ＣＦＵ／ｍＬ～５×１０９ＣＦＵ／ｍＬ。此新鲜菌液应在４ｈ内尽快使用，以保证接种菌的活性。 ９．１．２　细菌接种菌液的准备 用吸管从细菌悬液（９．１．１）中吸取２ｍＬ～３ｍＬ（参考数值。由此步骤调整接种活菌数目，大肠杆 菌取下限，金黄色葡萄球菌取上限），移入装有９ｍＬ营养肉汤（７．１）的试管中，充分混匀。吸取１ｍＬ移 入另一支装有９ｍＬ营养肉汤（７．１）的试管中，充分混匀。吸取１ｍＬ移入装有９ｍＬ０．０３ｍｏｌ／ＬＰＢＳ 缓冲液（７．４）的试管中，充分混匀。吸取５ｍＬ移入装有４５ｍＬ０．０３ｍｏｌ／ＬＰＢＳ缓冲液（７．４）的三角烧 瓶中。充分混匀，稀释至含活菌数目３×１０５ＣＦＵ／ｍＬ～４×１０５ＣＦＵ／ｍＬ（由此固定的４次稀释程序， 此接种菌液中含有微量的营养肉汤），用来对试样接种。此接种菌液应在４ｈ内尽快使用，以保持接种菌的活性。 ９．２　白色念珠菌菌液的培养和准备 ９．２．１　两步预培养程序制备白色念珠菌接种菌悬液 从３代～１０代的白色念珠菌保存菌种（８．２）试管斜面中取一接种环，在沙氏琼脂平板（７．３）上划 线，于３７℃±１℃，培养１８ｈ～２４ｈ。用接种环从平板中挑出典型的菌落，接种于沙氏琼脂培养基（７．３） 试管斜面，３７℃±１℃，培养１８ｈ～２４ｈ，得新鲜培养物，再往此试管中加入５ｍＬ０．０３ｍｏｌ／ＬＰＢＳ缓冲 液（７．４）。反复吹吸，洗下新鲜菌苔。然后用５ｍＬ吸管将洗脱液移至另一支无菌试管中，用旋涡式振 动器混合２０ｓ或在手上振摇８０次，使其充分混匀，即制成了接种菌悬液。此菌悬液含量采用分光光度 计法或稀释法测定，活菌数应达到１×１０８ＣＦＵ／ｍＬ～５×１０８ＣＦＵ／ｍＬ。此新鲜菌液应在４ｈ内尽快使 用，以保证接种菌的活性。 ９．２．２　白色念珠菌接种菌液的准备 用吸管从白色念珠菌悬液（９．２．１）中吸取２ｍＬ～４ｍＬ，移入装有９ｍＬ０．０３ｍｏｌ／ＬＰＢＳ缓冲液 （７．４）的试管中，进行１０倍系列稀释操作，充分混匀。吸取５ｍＬ移入装有４５ｍＬ０．０３ｍｏｌ／ＬＰＢＳ缓 冲液（７．４）的三角烧瓶中，充分混匀。稀释至含活菌数２．５×１０５ＣＦＵ／ｍＬ～３×１０５ＣＦＵ／ｍＬ，用来对试 样接种（可在此三角烧瓶中适量加入直径２ｍｍ～３ｍｍ的小玻璃球振摇，以利撞碎结块的菌团，使接种 菌液更均匀）。此接种菌液应在４ｈ内尽快使用，以保持接种菌的活性。 １０　试样的准备１０．１　样品洗涤 试样如需洗涤，应选用１０．１．１或１０．１．２的洗涤方法的一种进行操作，并在试验报告中注明采用的洗涤方法。 １０．１．１　耐洗色牢度试验机洗涤方法 从抗菌织物大样中取３个小样（每个尺寸１０ｃｍ×１０ｃｍ，剪成２块），按GB/T １２４９０中的试验条件 Ａ１Ｍ进行洗涤，采用ＥＣＥ无磷标准洗涤剂。下述程序相当于５次洗涤：水温４０℃±３℃，洗涤剂浓度 ０．２％，１５０ｍＬ溶液，钢珠１０粒，洗４５ｍｉｎ。洗涤后取出试样，在４０℃±３℃和１００ｍＬ的水中清洗两 次，每次１ｍｉｎ。重复此程序，直至规定的洗涤次数。为防止残留的洗涤剂干扰抗菌性能测试，最后一 个程序结束时充分清洗样品，然后晾干或烘干。 １０．１．２　家用双桶洗衣机洗涤方法 从抗菌织物大样中取２０ｇ以上的小样，试验条件为４０℃±３℃，浴比１∶３０，ＡＡＴＣＣ１９９３ＷＯＢ 无磷标准洗涤剂浓度０．２％。下述程序相当于５次洗涤（以２０ｇ布样为例，实际试验应根据试样按比例 增加水量及洗涤剂）：在洗衣机中加入４０℃±３℃热水６Ｌ，试样２０ｇ及陪洗织物１８０ｇ，洗涤剂１２ｇ，开 机洗涤２５ｍｉｎ。排水，６Ｌ自来水注洗２ｍｉｎ。取出织物，离心脱水１ｍｉｎ。再用６Ｌ自来水注洗２ｍｉｎ， 取出织物，离心脱水１ｍｉｎ。重复此程序，直至规定的洗涤次数。为防止残留的洗涤剂干扰抗菌性能测 试，最后一个程序结束时应充分清洗样品，然后晾干或烘干。 １０．２　试样 将抗菌织物样及对照样分别剪成约５ｍｍ×５ｍｍ大小的碎片，称取０．７５ｇ±０．０５ｇ作为一份试 样，用小纸片包好。根据试验需要称取多份试样，每份试样均用小纸片包好。 未经抗菌处理织物样若需检测也按此规定剪碎、称量并用小纸片包好。 １０．３　试样灭菌 将装有试样的小纸包放入高压灭菌锅，于１２１℃、１０３ｋＰａ灭菌１５ｍｉｎ。备用。 若试样不宜采用高压蒸汽灭菌，可采用其他方法灭菌，但所用的灭菌方法不应影响抗菌性能和检测 结果；对同一个检测样本的试样、对照样应采用同一种灭菌方法。 １１　试验操作 １１．１　试样及试剂装瓶 准备９个２５０ｍＬ三角烧瓶。在其中３个烧瓶中各加入对照样０．７５ｇ±０．０５ｇ，３个烧瓶中各加入 抗菌织物试样０．７５ｇ±０．０５ｇ，另３个烧瓶不加试样作为空白对照。然后在每个烧瓶中各加入 ７０ｍＬ±０．１ｍＬ０．０３ｍｏｌ／ＬＰＢＳ缓冲液（７．４）。 若需要，可另增加３个三角烧瓶，各装入０．７５ｇ±０．０５ｇ未经抗菌处理织物试样，并各加入 ７０ｍＬ±０．１ｍＬ０．０３ｍｏｌ／ＬＰＢＳ缓冲液（７．４），以考察未经抗菌处理织物试样的相关性能。 注：空白对照用于观察试验菌的接种浓度，并观察试验菌在试验期内的活性，防止因其自身的衰减获得虚高的试验结果。 １１．２　“０”接触时间制样 用吸管往３个对照样烧瓶和３个对照烧瓶中各加入５ｍＬ接种菌液（９．１．２或９．２．２）。盖好瓶塞， GB/T ２０９４４．３-２００８ 放在恒温振荡器上，在２４℃±１℃，以２５０ｒ／ｍｉｎ～３００ｒ／ｍｉｎ，振荡１ｍｉｎ±５ｓ，然后进行下一步“０”接触时间取样。 １１．３　“０”接触时间取样 用吸管在“０”接触时间制样的６个烧瓶中各吸取１ｍＬ±０．１ｍＬ溶液，移入装有９ｍＬ±０．１ｍＬ ０．０３ｍｏｌ／ＬＰＢＳ缓冲液（７．４）的试管中，充分混匀。用１０倍稀释法再进行１次稀释，充分混匀。吸取 １ｍＬ±０．１ｍＬ移入灭菌的平皿，倾注营养琼脂培养基（７．２）或沙氏琼脂培养基（７．３）约１５ｍＬ。每个 １０２ 稀释倍数的试管分别吸液制作两个平板作平行样。室温凝固，倒置平板，３７℃±１℃培养２４ｈ～４８ｈ （白色念珠菌４８ｈ～７２ｈ）。记录每个平板中的菌落数。 注：对照样接种 “０”接触时间取样并倾注平板培养后，在此１０２ 稀释倍数平板中，金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的平 均菌落数宜控制在２００ＣＦＵ～２５０ＣＦＵ的范围，白色念珠菌的平均菌落数宜控制在１５０ＣＦＵ～２００ＣＦＵ的范 围，否则影响试验精确度。 １１．４　定时振荡接触用吸管往３个抗菌织物试样烧瓶中各加入５ｍＬ接种菌液（９．１．２或９．２．２），盖好瓶塞。已完成 “０”接触时间取样且盖好瓶塞的另６个烧瓶不需再加接种液。再将此９个试样的烧瓶置于恒温振荡器 上，在２４℃±１℃，以１５０ｒ／ｍｉｎ，振荡１８ｈ。 注：若另增加了３个未经抗菌处理织物试样，则在此试样烧瓶中也各加入５ｍＬ接种菌液（９．１．２或９．２．２），并盖好 瓶塞。与其他试样在相同条件振荡１８ｈ。 １１．５　稀释培养及菌落数的测定 到规定时间后，从每个烧瓶中吸取１ｍＬ±０．１ｍＬ试液，移入装有９ｍＬ±０．１ｍＬ０．０３ｍｏｌ／ＬＰＢＳ 缓冲液（７．４）的试管中，充分混匀。用１０倍稀释法系列稀释至合适稀释倍数。用吸管从每个稀释倍数 的试管中分别吸取１ｍＬ±０．１ｍＬ移入灭菌的平皿，倾注营养琼脂培养基（７．２）或沙氏琼脂培养基 （７．３）约１５ｍＬ。每个稀释倍数的试管分别吸液制作两个平板作平行样。室温凝固，倒置平板， ３７℃±１℃培养２４ｈ～４８ｈ（白色念珠菌４８ｈ～７２ｈ）。 选择菌落数在３０ＣＦＵ～３００ＣＦＵ之间的合适稀释倍数的平板进行计数。若最小稀释倍数平板中 的菌落数＜３０，则按实际数量记录；若无菌落生长，则菌落数记为“＜１”。 两个平行平板的菌落数相差应在１５％以内，否则此数据无效，应重作试验。 １２　结果的计算及评价 １２．１　活菌浓度的计算 根据两个平板得到的菌落数，按式（１）计算每个试样烧瓶内的活菌......