| 标准编号 | GB/T 21866-2025 (GB/T21866-2025) | | 中文名称 | 涂膜抗病毒活性和抗菌性测定法 | | 英文名称 | Test method for antiviral activity and antimicrobial of paints film | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | G50 | | 国际标准分类 | 87.040 | | 字数估计 | 30,366 | | 发布日期 | 2025-08-01 | | 实施日期 | 2026-02-01 | | 旧标准 (被替代) | GB/T 21866-2008 | | 发布机构 | 国家市场监督管理总局、国家标准化管理委员会 | GB/T 21866-2025: 涂膜抗病毒活性和抗菌性测定法
ICS 87.040
CCSG50
中华人民共和国国家标准
代替GB/T 21866-2008
涂膜抗病毒活性和抗菌性测定法
2025-08-01发布
2026-02-01实施
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布
目次
前言 Ⅲ
1 范围 1
2 规范性引用文件 1
3 术语和定义 1
4 抗病毒活性试验 1
4.1 概述 1
4.2 实验室要求 2
4.3 设备和材料 2
4.4 试剂和培养基 2
4.5 试验准备 4
4.6 试验程序 6
4.7 病毒感染滴度的计算 10
4.8 抗病毒耐久性试验 12
5 抗菌性能试验 12
5.1 概述 12
5.2 实验室要求 12
5.3 设备和材料 12
5.4 试剂和培养基 12
5.5 试验菌种 14
5.6 试样 14
5.7 试验程序 14
5.8 结果计算和试验有效性 16
5.9 抗菌耐久性试验 16
6 试验报告 17
附录A(规范性) 多孔膜制备方法 18
A.1 打孔器的结构和材质要求 18
A.2 多孔膜制备方法 19
附录B(规范性) EMEM培养基 20
附录C(规范性) 涂膜吸水性的判定及试样预处理方法 21
C.1 涂膜吸水性的判定 21
C.2 涂膜试样预处理方法 21
附录D(资料性) 病毒感染滴度计算示例 22
参考文献 23
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
本文件代替GB/T 21866-2008《抗菌涂料(漆膜)抗菌性测定法和抗菌效果》,与GB/T 21866-
2008相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下:
a) 更改了“范围”(见第1章,2008年版的第1章);
b) 删除了“抑菌”“杀菌”“抗菌涂料”的术语和定义(见2008年版的3.1、3.2和3.4);更改了“抗菌”
的术语和定义(见3.1,2008年版的3.3);增加了“抗病毒”的术语和定义(见3.2);
c) 增加了“抗病毒活性试验”(见第4章);
d) 更改了“抗菌性能试验”(见第5章,2008年版的第4章~第8章);
e) 删除了“抗菌涂料抗菌效果”(2008年版的9.1);
f) 将“试验结果记录”更改为“试验报告”,并更改了相应内容(见第6章,2008年版的9.2);
g) 增加了“多孔膜制备方法”(见附录A);
h) 增加了“EMEM培养基”(见附录B);
i) 增加了“涂膜吸水性的判定及试样预处理方法”(见附录C)。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由中国石油和化学工业联合会提出。
本文件由全国涂料和颜料标准化技术委员会(SAC/TC5)归口。
本文件起草单位:广东省科学院微生物研究所(广东省微生物分析检测中心)、中国建筑材料科学研
究总院有限公司、中海油常州涂料化工研究院有限公司、立邦涂料(中国)有限公司、德爱威(中国)有限
公司、阿克苏诺贝尔漆油(上海)有限公司、北新嘉宝莉涂料(广东)有限公司、广东迪美生物技术有限公
司、国恒信(常州)检测认证技术有限公司、广东巴德富新材料有限公司、上海保立佳化工股份有限公司、
福建万安实业集团有限公司、浙江亘元涂料科技有限公司、雅士利涂料(苏州)有限公司、美巢集团股份
公司、中国国检测试控股集团股份有限公司、惠州市百时达化工有限公司、广东睿智环保科技股份有限
公司、新昌县槃古环保科技有限公司、汉宁化学(上海)有限公司、常州市天安特种涂料有限公司、上海建
科检验有限公司、华南理工大学、冶建新材料股份有限公司、成都信达高分子材料有限公司、广东省华微
检测股份有限公司、洛阳冠银生物科技有限公司、上海工微所科技有限公司。
本文件主要起草人:刘蕊蕊、谢小保、穆志超、彭如群、王静、刘琳、黎玉莲、冀志江、戴俊、潘秀伟、
唐玫、蔡正伟、赵春艳、关红艳、袁宏宇、曾庆乐、徐健、史立平、邱显锋、夏斯琴、黄文、王立新、闪晓刚、
徐宴华、陈杰、马春风、张皓栋、郝立腾、胡乐晖、高杰、史建群、陈君、赵培静、张玉清、王薇。
本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为:
---2008年首次发布为GB/T 21866-2008;
---本次为第一次修订。
涂膜抗病毒活性和抗菌性测定法
警示---使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验,本文件并未指出所有可能的安全问
题,使用者有责任采取适当的安全和健康措施,并保证符合国家有关法规规定的条件。
1 范围
本文件描述了一种通过比较试样和对照样中的存活病毒数量和/或活菌数来测定涂膜抗病毒活性
和/或抗菌性的测试方法。
本文件适用于施涂于建筑和木器表面具有抗病毒和/或抗菌功能的涂膜。
其他用途涂膜抗病毒和/或抗菌性能的测定也可参照使用。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文
件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于
本文件。
GB/T 1727 漆膜一般制备法
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定
GB/T 9278 涂料试样状态调节和试验的温湿度
GB/T 19258.1 杀菌用紫外辐射源 第1部分:低气压汞蒸气放电灯
GB 19489 实验室 生物安全通用要求
GB 41918 生物安全柜
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
抗菌 antimicrobial
采用物理、化学等方法灭活细菌、真菌等微生物和/或抑制细菌、真菌等微生物生长繁殖及其活性的
过程。
3.2
抗病毒 antiviral
采用物理、化学等方法灭活病毒或使病毒失去感染性的过程。
4 抗病毒活性试验
4.1 概述
将病毒接种于制备好的试样表面,经接触一定的时间后,通过比较抗病毒试样和对照样中的存活病
毒数量计算抗病毒率和抗病毒活性值,以抗病毒率或抗病毒活性值来表征抗病毒活性。
4.2 实验室要求
实验室应满足GB 19489要求,试验应在BSL-2或以上安全级别的生物安全实验室操作,并确保实
验室生物安全。
4.3 设备和材料
4.3.1 高压蒸汽灭菌器:温度能保持(121±2)℃,压力能保持(103±5)kPa。
4.3.2 电热恒温干燥箱:温度能保持160℃~180℃,波动不超过±2℃。
4.3.3 天平:精度0.1g;精度0.1mg。
4.3.4 水浴箱:温度能保持(37±1)℃、(50±1)℃、(56±1)℃和(60±1)℃。
4.3.5 二氧化碳培养箱:能保持温度(34±1)℃、(37±1)℃和(5±0.5)%(体积分数)二氧化碳浓度。
4.3.6 冰箱:温度能保持2℃~10℃、(-20±2)℃和(-80±2)℃。
4.3.7 过滤器:孔径0.22μm。
4.3.8 倒置显微镜。
4.3.9 pH计:分度值0.01。
4.3.10 液氮罐。
4.3.11 培养箱:温度能保持(25±1)℃。
4.3.12 细胞培养瓶。
4.3.13 细胞培养板:6孔板或96孔板。
4.3.14 离心机:能保持温度(4±2)℃和离心力10000g。
4.3.15 培养皿:直径90mm~100mm。
4.3.16 覆盖膜:低密度聚乙烯薄膜(密度值为0.918g/cm3~0.928g/cm3),分无孔膜和144孔膜(按附
录A规定的方法制备)两种,标准尺寸为(40±2)mm×(40±2)mm、厚度为0.05mm~0.10mm。
4.3.17 微生物实验室用的涡旋器、镊子、量筒、烧瓶、试管、烧杯、离心管、移液器等。
4.4 试剂和培养基
4.4.1 一般规定
除另有规定外,在试验中仅使用化学纯及以上纯度的试剂和符合GB/T 6682中三级水要求的蒸馏
水或去离子水。
使用的试剂和材料满足生物学实验室要求,即对病毒和宿主细胞无毒无害。实验室可以选用按照
下列配方制备试剂,也可以按照所操作的病毒及宿主的情况自行购买适用的等效商品化试剂。
4.4.2 无菌水
将水按10mL/支分装到无色玻璃试管中,放入高压蒸汽灭菌器(4.3.1)中在(121±2)℃条件下灭
菌15min后备用。
4.4.3 最低基础培养基(EMEM)
配方应符合附录B的规定。使用商品培养基时,若有任何成分缺失,按配方表(见表B.1)添加。
4.4.4 7.5%碳酸氢钠溶液
将75g碳酸氢钠溶于925g水中制备碳酸氢钠溶液。使用孔径0.22μm过滤器(4.3.7)过滤除菌。
制备后如不立即使用,置于5℃~10℃条件下保藏。保存期不超过30d。
4.4.5 甲醛溶液
将100mL37%(质量分数)甲醛溶液加入900mL水中制备甲醛溶液。制备后如不立即使用,置于
20℃~25℃条件下保藏。保存期不超过30d。
4.4.6 亚甲基蓝溶液
将0.375g亚甲基蓝和62.5μL的1mol/L氢氧化钠溶液溶于1000mL水中制备亚甲基蓝溶液。
制备后如不立即使用,置于20℃~25℃条件下保藏。保存期不超过30d。
4.4.7 胎牛血清(FBS)
将胎牛血清置于(-20±2)℃冰箱(4.3.6)保存,使用前将冰冻的胎牛血清置于(37±1)℃水浴箱
(4.3.4)中水浴直至解冻。
如果需要自行进行胎牛血清灭活处理,应遵守水浴箱温度调至(56±1)℃,维持30min灭活原则。
4.4.8 生长培养基
将60mg硫酸卡那霉素和9.53gEMEM(4.4.3)溶于800mL水中,溶解并混合均匀再加水至
1000mL,混合液使用孔径0.22μm过滤器(4.3.7)过滤除菌。然后添加15mL的7.5%碳酸氢钠溶液
(4.4.4)和100mLFBS(4.4.7)充分均匀。配制后如不立即使用,置于5℃~10℃条件下保藏。保存期
不超过30d。
4.4.9 维持培养基
将60mg硫酸卡那霉素和9.53gEMEM(4.4.3)溶于800mL水中,溶解并混合均匀再加水至
1000mL,混合液使用孔径0.22μm过滤器(4.3.7)过滤除菌。然后添加15mL的7.5%碳酸氢钠溶液
(4.4.4)充分混匀。制备后如不立即使用,置于5℃~10℃条件下保藏。保存期不超过30d。
4.4.10 双倍浓度维持培养基
将60mg硫酸卡那霉素和19.06gEMEM(4.4.3)溶于800mL水中,溶解并混合均匀再加水至
1000mL,混合液使用孔径0.22μm过滤器(4.3.7)过滤除菌。制备后如不立即使用,置于5℃~10℃
条件下保藏。保存期不超过30d。
4.4.11 磷酸缓冲液(PBS)
将8.0g氯化钠、0.2g氯化钾、2.9g十二水合磷酸氢二钠和0.2g磷酸二氢钾溶于水中,溶解并混
合均匀再加水至1000mL。用高压蒸汽灭菌器(4.3.1)灭菌。制备后如不立即使用,置于5℃~10℃
条件下保藏。保存期不超过30d。
4.4.12 牛胰蛋白酶PBS溶液
将1.0g牛胰蛋白酶溶于100mLPBS(4.4.11)中,溶解并充分混匀2h,混合液使用孔径0.22μm
过滤器(4.3.7)过滤除菌。如不立即使用,则分装于试管后放在(-80±2)℃冰箱(4.3.6)里保藏。使用
前,于(37±1)℃水浴箱(4.3.4)中水浴解冻。
牛胰蛋白酶PBS溶液制备:将1mL上述混合液加入9mLPBS中,充分混合,分装于试管后保存
在(-20±2)℃的冰箱中。使用前,置于(37±1)℃水浴箱中水浴解冻。
4.4.13 胰蛋白酶EDTA溶液
将2.5g蛋白酶、0.1g硫酸卡那霉素、2mg两性霉素B和0.014mol/LEDTA溶于1000mL的
PBS(4.4.11)中,溶解并充分混匀,混合液使用孔径0.22μm过滤器(4.3.7)过滤除菌。将溶液分装于试
管后保存在(-20±2)℃的冰箱(4.3.6)中。使用前,置于(37±1)℃水浴箱(4.3.4)中水浴解冻。
4.4.14 DEAE-葡聚糖溶液
将20gDEAE-葡聚糖溶于1000mL水中,溶解并充分混匀,混合液使用孔径0.22μm 过滤器
(4.3.7)过滤除菌。制备后如不立即使用,置于5℃~10℃条件下保藏。保存期不超过30d。
4.4.15 琼脂培养基
4.4.15.1 A溶液
将10mLDEAE-葡聚糖溶液(4.4.14)和40mL7.5%碳酸氢钠溶液(4.4.4)加入1000mL双倍浓
度维持培养基(4.4.10)混合均匀。
仅在流感病毒试验时,添加3mL牛胰蛋白酶PBS溶液(4.4.12)。使用前把溶液放(37±1)℃水浴
箱(4.3.4)温浴。
4.4.15.2 B溶液
将15g细胞培养琼脂溶于1000mL水中,混合均匀。使用高压蒸汽灭菌器(4.3.1)灭菌。使用前
将溶液放(60±1)℃水浴箱(4.3.4)温浴。
用于噬斑试验,使用前等比混合A溶液和B溶液。
4.4.16 SCDLP液体培养基
将17.0g酪蛋白胨、3.0g大豆蛋白胨、5.0g氯化钠、2.5g磷酸氢二钾、2.5g葡萄糖和1.0g卵磷脂
溶入1000mL水中,溶解并充分混合后添加7.0g非离子表面活性剂,充分混合。用氢氧化钠或盐酸
调节pH为7.0±0.2。使用高压蒸汽灭菌器(4.3.1)灭菌。制备后如不立即使用,置于5℃~10℃条件
下保藏。保存期不超过30d。
4.5 试验准备
4.5.1 复苏宿主细胞
将低温储存的宿主细胞置于(37±1)℃水浴箱(4.3.4)中水浴,使其迅速解冻,将解冻的细胞加入含
有5mL细胞生长培养基(4.4.8)的离心管中,3000r/min离心5min,去除上清液,加入新的细胞生长
培养基重悬离心管底部的细胞,再将其转移到含有20mL细胞生长培养基的T75细胞培养瓶(4.3.12)
里,使用移液器轻柔吹打混匀。将细胞培养瓶置于二氧化碳培养箱(4.3.5)中,(37±1)℃培养24h。使
用倒置显微镜(4.3.8)观察细胞。如证实增殖再进行下一步,如没有增殖则继续培养。
4.5.2 宿主细胞的传代培养
4.5.2.1 确认4.5.1宿主细胞生长到90%以上后,弃掉细胞培养瓶(4.3.12)中旧培养基,添加5mL
PBS(4.4.11)洗涤细胞2次。移除PBS,添加1mL~2mL胰蛋白酶EDTA溶液(4.4.13),覆盖细胞表
面,将细胞培养瓶置于二氧化碳培养箱(4.3.5)中,在(37±1)℃下保持5min,随时观察瓶中的细胞,如
果70%细胞从瓶壁脱落,立即加入5mL细胞生长培养基(4.4.8),使用移液器轻轻吹打分散细胞,得到
细胞悬液,此过程宜避免细胞损伤。
4.5.2.2 取一个新的细胞培养瓶(4.3.12),加入1mL细胞悬液(见4.5.2.1),并补足细胞生长培养基
(4.4.8)至20mL。可根据需要调整细胞悬浮液与生长培养基的比例。将细胞培养瓶置于二氧化碳培
养箱(4.3.5)中,(37±1)℃培养,视细胞生长情况可传代或换液。
4.5.3 细胞培养做病毒感染滴度测定
细胞传代后,可以铺板做病毒感染滴度的测定。噬斑法使用6孔板,TCID50法使用96孔板。铺好
细胞后,将培养板置于二氧化碳培养箱(4.3.5)中,在(37±1)℃下培养18h~24h,待细胞长满后即可
进行下一步试验。
4.5.4 病毒悬液制备
4.5.4.1 病毒株和宿主细胞
试验使用的病毒株、宿主细胞和培养基见表1。经有关方商定后,也可选用其他低致病性或非致病
性微生物作为试验病毒株,实验室等级应满足相应微生物试验要求,且所有微生物应由相应保藏机构提
供并在试验报告中注明名称及保藏号。如选用其他商定病毒作检验病毒,试验条件可根据选用的病毒
进行相应的调整。
表1 病毒、宿主细胞和培养基
病毒种类 甲型流感病毒 肠道病毒
病毒株
甲型流感病毒 H3N2
ATCCVR-1679
肠道病毒EV71
ATCCVR-1432
宿主细胞 MDCK细胞 Vero细胞
培养基 EMEM培养基 EMEM培养基
病毒株、宿主细胞应从有相应资质的机构获取。其他单位宿主细胞、培养基经验证后也可使用
4.5.4.2 甲型流感病毒H3N2
4.5.4.2.1 移除已培养好单层细胞(见4.5.2.2)中的培养基,使用新鲜的细胞维持培养基(4.4.9)或
PBS(4.4.11)清洗培养细胞表面2次。
4.5.4.2.2 将低温储存的病毒储备液取出,置于(37±1)℃水浴箱(4.3.4)中迅速解冻。将解冻的病毒
悬液转移至新的试管中,用维持培养基(见4.4.9)将病毒稀释至103PFU/mL(或 TCID50/mL)~
104PFU/mL(或TCID50/mL)。接种1mL~3mL稀释后的甲型流感病毒H3N2于培养好的细胞表面
(见4.5.4.2.1),并将其置于(34±1)℃二氧化碳培养箱(4.3.5)中保持1h,使病毒吸附细胞,之后在细胞
培养瓶内加入含0.15%牛胰蛋白酶PBS溶液(4.4.12)的维持培养基20mL。将细胞培养瓶置于二氧化
碳培养箱中,在(34±1)℃中培养1d~3d使病毒增殖。
4.5.4.2.3 使用倒置显微镜(4.3.8)观察,如果证实流感病毒增殖,80%以上细胞出现细胞病变后,则将
病毒混悬液放入离心管,于(4±2)℃及10000g离心力离心15min。离心后取上清液,即为流感病毒
混悬液。分装后储存在(-80±2)℃低温冰箱(4.3.6)中。
4.5.4.2.4 测定病毒感染滴度是否大于107PFU/mL(或TCID50/mL),如滴度小于107PFU/mL(或
TCID50/mL),则从4.5.4.2.1重新制备。使用前将冷冻的病毒放入(37±1)℃水浴箱(4.3.4)中水浴,使
其迅速解冻。解冻后稀释至合适滴度,即为检测用病毒悬液,如不立即使用,于2℃~8℃条件下保存
不超过4h。
4.5.4.3 肠道病毒EV71
4.5.4.3.1 移除已培养好单层细胞(见4.5.2.2)中的培养基,使用新鲜的细胞维持培养基(4.4.9)或
PBS(4.4.11)清洗培养细胞表面2次。
4.5.4.3.2 将低温储存的病毒储备液取出,置于(37±1)℃水浴箱(4.3.4)中迅速解冻。将解冻的病毒
悬液转移至新的试管中,用维持培养基(4.4.9)将病毒稀释至103PFU/mL(或 TCID50/mL)~
104PFU/mL(或TCID50/mL)。接种1mL~3mL稀释后的肠道病毒EV71于培养好的细胞表面(见
4.5.4.3.1),并将其置于(37±1)℃二氧化碳培养箱(4.3.5)中保持1h,使病毒吸附细胞,补足维持培养
基20mL。将细胞培养瓶(4.3.12)置于二氧化碳培养箱中,在(37±1)℃中培养1d~3d使病毒增殖。
4.5.4.3.3 使用倒置显微镜(4.3.8)观察,如果证实EV71病毒增殖,80%以上细胞出现细胞病变后,则
病毒混悬液放入离心管,于(4±2)℃及10000g离心力离心15min。离心后取上清液,即为EV71病
毒混悬液。分装后储存在(-80±2)℃低温冰箱(4.3.6)中。
4.5.4.3.4 测定病毒感染滴度是否大于107PFU/mL(或TCID50/mL),如滴度小于107PFU/mL(或
TCID50/mL),则从4.5.4.3.1重新制备。使用前将冷冻的病毒放入(37±1)℃水浴箱(4.3.4)中水浴,使
其迅速解冻。解冻后稀释至合适滴度,即为检测用病毒悬液,如不立即使用,于2℃~8℃条件下保存
不超过4h。
4.5.5 试样
4.5.5.1 对照样
尺寸为(50±2)mm×(50±2)mm的聚乙烯薄膜,至少准备12片。
4.5.5.2 抗病毒试样
添加抗病毒成分的涂膜。
除另有规定外,试验底材采用灭菌的铝、玻璃或不锈钢等不易生锈和不易吸潮的材质,尺寸为(50±
2)mm×(50±2)mm,厚度至少为1mm,至少准备9片。
按GB/T 1727或产品说明书要求制备涂膜,涂膜应平整、无锈、无油污等。制备好的涂膜,应在
GB/T 9278规定的条件下放置规定时间后作为试验样品。
4.5.5.3 试样前处理
按附录C的规定进行。
4.6 试验程序
4.6.1 预试验
4.6.1.1 预试验目的
确定检测样品中和剂(SCDLP液体培养基)洗脱后的液体对细胞有无毒性及对样品抗病毒剂的抑
制效果。
4.6.1.2 细胞毒性试验
细胞毒性试验步骤如下所述。
a) 取对照样及抗病毒试样各3片,放在培养皿中,测试面朝上,加入10mL的SCDLP液体培养
基(4.4.16)或其他适宜而有效的中和剂,使用移液器吹打,以确保试样经过充分洗脱。以该洗
脱液作为试验样液,接种96孔板并培养,用倒置显微镜(4.3.8)观察细胞有无病变。
b) 若未观察到细胞毒性,继续下一步骤。
c) 若观察到有细胞毒性,则需酌情修改中和剂配方或增加中和剂的使用量。
d) 若修改中和剂配方或增加中和剂的使用量,则在后续试验中应使用相同的中和剂。
4.6.1.3 细......
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