| 标准编号 | GB/T 25168-2010 (GB/T25168-2010) | | 中文名称 | 畜禽cDNA文库构建与保存技术规程 | | 英文名称 | Technical regulation of farm animals cDNA library construction and preservation | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | B40 | | 国际标准分类 | 65.020.30 | | 字数估计 | 6,619 | | 发布日期 | 2010-09-26 | | 实施日期 | 2011-03-01 | | 引用标准 | GB/T 6682 | | 标准依据 | 国家标准批准发布公告2010年第6号(总第161号) | | 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会 | | 范围 | 本标准规定了畜禽cDNA文库构建方法;本标准适用于猪、牛、羊、马、驴、鸡、鸭、鹅等畜禽cDNA文库构建与保存; | GB/T 25168-2010
Technical regulation of farm animals cDNA library construction and preservation
ICS 65.020.30
B40
中华人民共和国国家标准
畜禽cDNA文库构建与保存技术规程
2010-09-26发布
2011-03-01实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会发布
前言
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC274)归口。
本标准起草单位:中国农业科学院北京畜牧兽医研究所。
本标准主要起草人:马月辉、关伟军、陆涛峰、李向臣、佟春玲、余露露、刘鹏。
畜禽cDNA文库构建与保存技术规程
1 范围
本标准规定了畜禽cDNA文库构建方法。
本标准适用于猪、牛、羊、马、驴、鸡、鸭、鹅等畜禽cDNA文库构建与保存。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有
的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究
是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
3.1
以成熟mRNA为模板,在反转录酶的作用下合成的cDNA链。
3.2
cDNA文库 cDNAlibrary
将处于特定发育阶段真核生物体的特定器官或组织中提取的总RNA,经过反转录等一系列的生化
反应合成双链cDNA群体后,再插入到适当的载体上,经转化寄主菌株构成特定的cDNA克隆群体。
3.3
寡核苷酸 oligonucleotide
一类只有20个以下碱基对的短链核苷酸的总称,常用作探针确定DNA或RNA的结构。
3.4
噬菌斑 plaque
被噬菌体感染的细菌所释放的子代噬菌体,会继续感染周围的细胞,致使在琼脂平板上生长的菌苔
中有大量的细胞发生裂解,形成的透明区域。
4 试剂及溶液配制
除另有规定外,试剂为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T 6682一级用水的要求。
在1000mL去离子水中加入1mLDEPC,37℃ 静置12h,高压灭菌(120℃30min)。
4.2 2mol/LMgSO4
称取246.50gMgSO4·H2O,加400mL双蒸水(doubledistiledH2O,ddH2O)溶解后,定容到
500mL,高压灭菌。
4.3 10mmol/LMgSO4
量取1mL2mol/LMgSO4 加ddH2O定容到200mL,高压灭菌,30min。
4.4 1mol/LTris-Cl(pH7.5)
称取121.14gTris,碱溶于800mLddH2O中,调pH......
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