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| 标准编号 | GB/T 26352-2026 (GB/T26352-2026) | | 中文名称 | 蜚蠊抗药性检测方法 德国小蠊生物测定法 | | 英文名称 | Test methods of cockroach resistance to insecticides - The bioassay methods for Blattella germanica | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | C05 | | 国际标准分类 | 11.020 | | 字数估计 | 10,124 | | 发布日期 | 2026-05-25 | | 实施日期 | 2026-12-01 | | 旧标准 (被替代) | GB/T 26352-2010 | | 发布机构 | 国家市场监督管理总局、国家标准化管理委员会 | GB/T 26352-2026: 蜚蠊抗药性检测方法 德国小蠊生物测定法
GB/T 26352-2026 英文版: Test methods of cockroach resistance to insecticides - The bioassay methods for Blattella germanica
ICS 11.020
CCSC05
中华人民共和国国家标准
代替GB/T 26352-2010
蜚蠊抗药性检测方法
德国小蠊生物测定法
2026-05-25发布
2026-12-01实施
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布
1 范围
本文件规定了德国小蠊(Blattellagermanica)对有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类、新烟碱
类等杀虫剂抗药性检测时,试虫、仪器设备和测试条件的要求,描述了诊断剂量法和敏感基线法的生物
测定方法。
本文件适用于德国小蠊对杀虫剂抗药性的生物测定。
2 规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件。
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
4 试虫
4.1 敏感品系
实验室标准化饲养的形态完整、活动灵敏、体型大小一致的雄性成虫。
4.2 待测种群
现场采集德国小蠊,室内饲养繁殖得到的形态完整、活动灵敏、体型大小一致的第一代(F1)或第二
代(F2)代雄性成虫。
5 试剂
丙酮(分析纯)或其他有机溶剂,二氧化碳或无水乙醚,杀虫剂原药,凡士林(分析纯)与液体石蜡(密
度:0.84g/mL~0.86g/mL)混合物(1∶1)。
6 仪器设备
具可控光照和温湿度的培养箱或房间,移液枪(管),500mL透明磨砂广口瓶,微量点滴器或微量
点滴仪。
注:广口瓶尺寸为高16cm,底部直径8cm,瓶口直径5.5cm,内表面积约为350cm2。
7 测试条件
7.1 温度:26℃±2℃。
7.2 相对湿度:(60±10)%。
8 敏感基线法
8.1 原理
依据杀虫剂使用浓度(剂量)的对数值和试虫死亡率机率值关系建立毒力回归方程,以敏感品系建
立的杀虫剂毒力回归线作为敏感基线,以待测试虫种群得到的杀虫剂毒力回归线与敏感基线对比,通过
比较由毒力回归线计算得到的致死中浓度(致死中量)[LC50(LD50)]的变化来确定待测种群抗性水平。
8.2 操作步骤
8.2.1 药膜法
8.2.1.1 预试验浓度的确定
8.2.1.1.1 用丙酮或其他适宜的溶剂将供试杀虫剂原药配成一定浓度的母液,结合试虫采集地点环境
和用药历史,使用相应溶剂将杀虫剂母液稀释成一定浓度的测试药液进行预试验。取测试药液2.5mL
加入500mL广口瓶中,立即不断转动广口瓶或用滚瓶机滚瓶,使药液均匀分布于瓶口磨砂表面以下所
有内壁,直至肉眼看不到液体流动,置于通风橱中待溶剂完全挥发。瓶口磨砂玻璃处涂抹凡士林与液体
石蜡混合物(1∶1),每瓶放试虫10头,接触1h后,将试虫移入清洁容器内正常饲养。24h后记录死
亡数。
8.2.1.1.2 每个浓度试验至少重复2次,以相应溶剂处理为对照组。根据试虫死亡率调整测试药液浓
度,直至最低浓度药液组试虫死亡率在0%~20%,最高浓度药液组试虫死亡率在80%~100%,将其作
为正式试验的杀虫剂浓度范围。
8.2.1.2 正式测定
根据预试验确定的杀虫剂浓度范围,使用相应溶剂将杀虫剂母液按等比或等差系列稀释成5个~
7个浓度作为正式试验的测试药液。
每个浓度试验至少重复3次,以相应溶剂处理为对照组,药膜制备、试虫处理的具体操作同预试验。
8.2.2 点滴法
8.2.2.1 预试验浓度的确定
8.2.2.1.1 用丙酮或其他适宜的溶剂将供试杀虫剂原药配成一定浓度的母液,结合试虫采集地点环境
和用药历史,使用相应溶剂将杀虫剂母液稀释成一定浓度的测试药液进行预试验。试虫用二氧化碳或
乙醚麻醉,用微量点滴器将1μL测试药液点滴于雄性成虫中足基节与后足基节间的腹板上,每个处理
点滴试虫10头。将处理后的试虫转入清洁容器内正常饲养。24h后记录死亡数。
8.2.2.1.2 每个浓度试验至少重复2次,以点滴相应溶剂为对照组。根据试虫死亡率调整测试药液浓
度,直至最低浓度药液组试虫死亡率在0%~20%,最高浓度药液组试虫死亡率在80%~100%,将其作
为正式试验的杀虫剂浓度范围。
8.2.2.2 正式测定
根据预试验确定的杀虫剂浓度范围,使用相应溶剂将杀虫剂母液按等比或等差系列稀释成5个~7
个浓度作为正式试验的测试药液。
每个浓度试验至少重复3次,以点滴相应溶剂为对照组,试虫处理的具体操作同预试验。
8.3 死亡判断
用解剖针等锐器轻触试虫,试虫完全不动或不能正常爬行判定为死亡。
8.4 数据处理
采用概率值分析法(probitanalysis),根据不同测试药剂浓度(剂量)对数值与相应死亡率的机率
值,求出毒力回归方程、计算致死中浓度(致死中量)[LC50(LD50)]和95%置信区间。
注:采用点滴法进行生物测定时,根据测试药液浓度和试虫受药量求测试药剂剂量,计算LD50;采用药膜法则计
算LC50。
8.5 结果表述
结果用抗性倍数表述,抗性倍数=待测种群LC50(LD50)值/敏感品系LC50(LD50)值,常用杀虫剂对
敏感品系德国小蠊的LC50/LD50见附录A中表A.1。
8.6 结果判定
敏感品系和待测种群LC50(LD50)的95%置信限不重叠,且抗性倍数大于或等于5倍为抗性种群。
9 诊断剂量法
9.1 原理
依据杀虫剂对敏感品系的毒力回归线,确定一个能区分敏感个体和抗性个体或抗性杂合子的剂量。
一般以2倍(或数倍)敏感品系的99%致死浓度(99%致死量)[LC99(LD99)]值作为诊断剂量。用该剂
量的杀虫剂处理待测种群一定数量的个体,通过死亡率来判断待测种群是否产生抗药性。
9.2 操作步骤
9.2.1 药膜法
用丙酮或其他适宜的溶剂将供试杀虫剂配成一定浓度的母液,再使用相应溶剂将母液稀释到诊断
剂量需要的浓度(常用杀虫剂对敏感品系德国小蠊的LC99见表A.1),取2.5mL药剂溶液加入500mL
广口瓶中,立即不断转动广口瓶或用滚瓶机滚瓶,使药液均匀分布于瓶口磨砂表面以下所有内壁,直至
肉眼看不到液体流动,置于通风橱中待溶剂完全挥发。瓶口磨砂玻璃处涂抹凡士林与液体石蜡混合物
(1∶1),每瓶放试虫10头,接触1h后,将试虫移入清洁容器内正常饲养。24h后记录死亡数。试验至
少重复10次,以相应溶剂处理为对照组。
9.2.2 点滴法
用丙酮或其他适宜的溶剂将供试杀虫剂配成一定浓度的母液,再使用相应溶剂将杀虫剂母液稀释
到诊断剂量需要的浓度(常用杀虫剂对敏感品系德国小蠊的LD99见表A......
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