| 标准编号 | GB/T 27517-2011 (GB/T27517-2011) | | 中文名称 | 鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性与经典毒株复合RT-PCR方法 | | 英文名称 | A multiplex RT-PCR method to differentiate the highly pathogenic and classical porcine reproductive and respiratory syndrome virus | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | B41 | | 国际标准分类 | 11.220 | | 字数估计 | 11,177 | | 发布日期 | 2011-11-21 | | 实施日期 | 2012-03-01 | | 标准依据 | 国家标准批准发布公告2011年第18号 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会 | | 范围 | 本标准规定了检测以基因组非结构蛋白Nsp2编码区缺失30个氨基酸为特征的猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性毒株与非缺失30个氨基酸的猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株复合RT-PCR鉴别诊断方法。本标准适用于疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染猪血清及临床病料等样品中的病毒核酸检测。 | GB/T 27517-2011
A multiplex RT-PCR method to differentiate the highly pathogenic and classical porcine reproductive and respiratory syndrome virus
ICS 11.220
B41
中华人民共和国国家标准
鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性
与经典毒株复合RT-PCR方法
2011-11-21发布
2012-03-01实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会发布
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。
本标准起草单位:河南省动物疫病预防控制中心。
本标准主要起草人:吴志明、闫若潜、张志凌、张健、荆汝顶、刘光辉、赵明军、曹杰伟、钱勇、程俊贞、
赵雪丽、张盼。
鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性
与经典毒株复合RT-PCR方法
1 范围
本标准规定了检测以基因组非结构蛋白Nsp2编码区缺失30个氨基酸为特征的猪繁殖与呼吸综
合征病毒高致病性毒株与非缺失30个氨基酸的猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株复合RT-PCR鉴别
诊断方法。
本标准适用于疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染猪血清及临床病料等样品中的病毒核
酸检测。
2 试剂和仪器设备
除另有规定外,所用生化试剂均为分析纯。提取RNA所用试剂均应使用无RNA酶的容器进行
分装。
2.1 试剂
2.1.1 拭子悬液(见附录A),组织悬液(见附录A),以上试剂常温保存。
2.1.2 阿氏液(见附录A),裂解液(TriZol),1×TAE核酸电泳缓冲液(见附录A),氯仿,0.01mol/L
(pH7.2)的PBS(见附录A),DEPC处理水(见附录A),以上试剂4℃保存。
2.1.3 异丙醇,75%乙醇,DNA分子量标准,6×电泳上样缓冲液,以上试剂-20℃保存。
2.1.4 阳性对照、阴性对照(见附录A)。
2.1.5 复合RT-PCR扩增用上、下游引物序列参见附录B。
2.1.6 鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性与经典毒株复合RT-PCR反应体系组成、说明及使用
注意事项参见附录C。
2.2 仪器设备
PCR扩增仪,高速冷冻离心机(离心力在12000g以上),核酸电泳仪和水平电泳槽,恒温水浴锅,
2℃~8℃冰箱,-20℃冰箱,单道微量移液器(0.5μL~10μL;2μL~20μL;20μL~200μL;100μL~
1000μL),组织匀浆器或研钵,凝胶成像系统(或紫外透射仪),真空干燥器(非必备)。
3 样品的采集、处理、存放及运输
3.1 样品采集及处理过程的注意事项
采样过程中样本不得交叉污染,采......
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