| 标准编号 | GB/T 28067-2011 (GB/T28067-2011) | | 中文名称 | 甘蔗黄叶病毒实时荧光RT-PCR检测方法 | | 英文名称 | Detection of sugarcane yellow leaf virus using the real-time RT-PCR | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | B16 | | 国际标准分类 | 65.020.01 | | 字数估计 | 10,135 | | 发布日期 | 2011-12-30 | | 实施日期 | 2012-06-01 | | 标准依据 | 国家标准批准发布公告2011年第23号 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会 | | 范围 | 本标准规定了甘蔗黄叶病毒实时荧光RT-PCR检测方法所需的仪器与试剂、样品的采集与前处理、操作方法以及结果判定。本标准适用于甘蔗植株、种苗及种茎中甘蔗黄叶病毒的快速检测、诊断。 | GB/T 28067-2011
Detection of sugarcane yellow leaf virus using the real-time RT-PCR
ICS 65.020.01
B16
中华人民共和国国家标准
甘蔗黄叶病毒实时荧光RT-PCR检测方法
2011-12-30发布
2012-06-01实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会发布
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。
本标准起草单位:福建农林大学甘蔗综合研究所、农业部甘蔗及制品质量监督检验测试中心、农业
部甘蔗遗传改良重点开放实验室。
本标准主要起草人:高三基、陈平华、陈如凯、郭晋隆、张华、许莉萍、王恒波、陈由强。
甘蔗黄叶病毒实时荧光RT-PCR检测方法
1 范围
本标准规定了甘蔗黄叶病毒实时荧光RT-PCR检测方法所需的仪器与试剂、样品的采集与前处
理、操作方法以及结果判定。
本标准适用于甘蔗植株、种苗及种茎中甘蔗黄叶病毒的快速检测、诊断。
2 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
2.1
反转录 reversetranscription
以RNA为模板合成DNA的过程,也称逆转录。
2.2
实时荧光RT-PCR realtimeRT-PCR
实时荧光反转录-聚合酶链式反应。
2.3
Ct值 cycletime
每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。
3 缩略语
下列缩略语适用于本文件。
RNA:核糖核酸
Taq酶:TaqDNA聚合酶
dNTPs:4种脱氧核苷5′-三磷酸混合液
RNase:RNA酶
FAM:6-羧基荧光素
TAMRA:6-羧基四甲基罗丹明
4 方法原理
在反转录酶作用下将RNA反转录成cDNA,再以cDNA为模板利用Taq酶进行实时荧光PCR扩
增反应(采用TaqMan探针方法)。在比对甘蔗黄叶病毒外壳蛋白基因的基础上,设计一对仅在甘蔗黄
叶病毒外壳蛋白基因间保守的特异性引物和一条特异性的荧光双标记探针。探针的5’端标记FAM荧
光素为报告荧光基团,3’端标记TAMRA荧光素为淬灭荧光基团,结合部位位于目的扩增片段内部。
当完整的......
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