| 标准编号 | GB/T 42470-2023 (GB/T42470-2023) | | 中文名称 | 纳米技术 基于斑马鱼胚胎的纳米材料毒性评价 | | 英文名称 | Nanotechnologies - Assessment of nanomaterial toxicity using dechorionated zebrafish embryo | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | C04 | | 国际标准分类 | 07.120 | | 字数估计 | 18,113 | | 发布日期 | 2023-03-17 | | 实施日期 | 2023-10-01 | | 发布机构 | 国家市场监督管理总局、中国国家标准化管理委员会 | ICS07.120
CCSC04
中华人民共和国国家标准
纳米技术 基于斑马鱼胚胎的
纳米材料毒性评价
(ISO/T S22082:2020,MOD)
2023-03-17发布
2023-10-01实施
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布
目次
前言 Ⅰ
引言 Ⅱ
1 范围 1
2 规范性引用文件 1
3 术语和定义 1
4 缩略语 2
5 材料 2
5.1 生物体(斑马鱼,Daniorerio) 2
5.2 储备液 3
5.3 阳性对照 3
6 设备 3
6.1 技术设备 3
6.2 分析仪器 3
7 步骤 4
7.1 养殖 4
7.2 产卵刺激 4
7.3 胚胎破膜 5
7.4 纳米材料储备液的制备 6
7.5 试验浓度 6
7.6 纳米材料的分散 6
7.7 阳性对照化学物:3,4-二氯苯胺 6
7.8 试验方法 7
7.9 数据分析 8
8 试验报告 8
8.1 试验步骤 8
8.2 报告中包含的信息 8
附录A(资料性) 机械破膜法 10
附录B(资料性) 斑马鱼胚胎产卵步骤 11
附录C(资料性) 结果验证 12
参考文献 13
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
本文件修改采用ISO/T S22082:2020《纳米技术 基于斑马鱼胚胎的纳米材料毒性评价》,文件类
型由ISO 的技术规范调整为我国的国家标准。
本文件与ISO/T S22082:2020的技术差异及其原因如下:
---原图1不符合5.1描述中雌鱼大雄鱼小的形态特征,因此更改了图1中雄性及雌性斑马鱼图
片(见图1);
---在5.2中增加了注释内容,引用国家标准对纯净水的质量做了说明(见5.2);
---在5.2中增加了对后文储备液配置方法部分的引用(见5.2);
---6.1.2中光照周期不符合常规实验及国内惯例,故引用相关国家标准,更改了光照周期的数值
(见6.1.2);
---按照国内惯例,在7.3.2增加了“分析纯”来界定化学品的纯度级别(见7.3.2);
---7.8.3中试验步骤需顺序进行,因此更改了各步骤前的“-”符号,将其修改为英文字母编号(见
7.8.3)。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由中国科学院提出。
本文件由全国纳米技术标准化技术委员会(SAC/TC279)归口。
本文件起草单位:首都医科大学、中国医学科学院基础医学研究所。
本文件主要起草人:孙志伟、李阳、段军超、陈月月、李艳博、许海燕、孟洁。
引 言
鱼类试验是广泛应用于评价水环境中化学物毒性的重要手段。然而,使用包括鱼在内的脊椎动物
对化学物进行测试存在动物福利问题。用已发育完全的幼鱼进行测试会给动物带来明显不适(如使用
OECDTG203),使用生命早期的鱼胚胎而不是成鱼或幼鱼进行测试是一种更符合动物福利的替代
方法。
纳米技术正在诸多领域发挥积极作用,但人们仍然对纳米产品的环境潜在危害有所担忧。经济合
作与发展组织(OECD)使用鱼胚胎评估急性毒性的试验指南(见OECDTG236)指出,有些化学物可能
不适用这一方法进行试验,如分子量≥3kDa的大分子结构物质和引起孵化延迟的物质。卵膜是鱼胚
胎最外层的非细胞包膜,其屏障作用会妨碍化学物或纳米材料生物活性的评价,目前尚无法预测哪些纳
米材料受到该屏障的影响。使用去卵膜胚胎进行毒性评估尽管不能提供直接的生态毒理学信息,但可
能有助于更好地识别具有潜在危害的纳米材料。因此,世界各国的研究人员已开发了很多方法,去除生
命早期阶段斑马鱼胚胎的卵膜[4][5]。去除胚胎卵膜有两种方法:酶破膜法和机械破膜法。与机械破膜
法相比,酶破膜法具有如下优点(见附录A):节省时间和劳动力、可避免胚胎的机械损伤,同时能提供大
量破膜胚胎进行高通量测试。但酶破膜法的一个不足之处在于链霉蛋白酶活性的变化可能影响卵膜去
除的成功率。许多研究小组已经使用去卵膜胚胎进行化学物和纳米材料的毒性评价[6]-[9],但方法尚未
完全标准化[10]-[13]。
去卵膜斑马鱼胚胎可作为其他脊椎动物系统的替代系统,用于检测纳米材料的潜在危害。随着高
等动物模型毒性试验的不断优化,对替代试验方法的需求在持续增加。生命早期阶段的斑马鱼(独立摄
食前,即受精后120h内)是一种非常好的体内毒性试验替代模型[23]-[28]。与其他动物模型相比,斑马鱼
模型有许多优势,包括相对容易饲养和繁殖、繁殖力强(体外受精、一条雌鱼可产200个~300个胚胎)、
发育周期短(约3个月成年)、基因组资源的可获得性(完整的斑马鱼基因组序列)以及基因与人类的相
似性。与人类基因组的比对表明,大约70%的人类基因在斑马鱼中存在至少一个同源基因[14],因此斑
马鱼已经越来越多地应用于化学物毒性评价。
本文件提供了使用去卵膜斑马鱼胚胎进行毒性评价的方法,推荐了去除斑马鱼胚胎卵膜的一种优
化程序,同时讨论了采用去卵膜胚胎进行鱼类毒性评价的优点。
纳米技术 基于斑马鱼胚胎的
纳米材料毒性评价
1 范围
本文件规定了一种快速评价纳米材料毒性的方法(鱼类生命早期阶段,0HPF~120HPF),包括
去除卵膜的详细操作步骤和使用去卵膜斑马鱼胚胎评价纳米材料毒性的完整方案。本文件的重点是测
试纳米材料的毒性。
本文件适用于商业化及非商业化纳米材料的毒性检测。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文
件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于
本文件。
GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法
ISO/T S12805 纳米技术 材料规范 纳米物体特征指南(Nanotechnologies-Materialsspecifi-
注:GB/T 37156-2018 纳米技术 材料规范 纳米物体特性指南(ISO/T S12805:2011,IDT)
ISO/T R13014 纳米技术 纳米材料毒理学评价前理化性质表征指南(Nanotechnologies-Guid-
ment)
注:GB/T 39261-2020 纳米技术 纳米材料毒理学评价前理化性质表征指南(ISO/T R13014:2012,IDT)
ISO/T S17200 纳米技术 粉体纳米颗粒表征和测量(Nanotechnology-Nanoparticlesin
ISO/T R18196 纳米技术 纳米物体表征用测量技术矩阵(Nanotechnologies-Measurement
注:GB/T 41204-2021 纳米技术 纳米物体表征用测量技术矩阵(ISO/T R18196:2016,MOD)
ISO/T S80004-1 纳米科技 术语 第1部分:核心术语(Nanotechnologies-Vocabulary-Part
1:Coreterms)
注:GB/T 30544.1-2014 纳米科技 术语 第1部分:核心术语(ISO/T S80004-1:2010,IDT)
ISO/T S80004-2 纳米科技 术语 第2部分:......
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