| 标准编号 | GB/T 45243-2025 (GB/T45243-2025) | | 中文名称 | 保健食品中硫胺素、核黄素、吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定 | | 英文名称 | Determination of thiamine, riboflavin, pyridoxine, niacin, niacinamide and caffeine in health foods | | 行业 | 国家标准 (推荐) | | 中标分类 | X83 | | 国际标准分类 | 67.050 | | 字数估计 | 10,162 | | 发布日期 | 2025-01-24 | | 实施日期 | 2025-08-01 | | 发布机构 | 国家市场监督管理总局、中国国家标准化管理委员会 | GB/T 45243-2025: 保健食品中硫胺素、核黄素、吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定
ICS 67.050
CCSX83
中华人民共和国国家标准
代替GB/T 5009.197-2003
保健食品中硫胺素、核黄素、吡哆醇、烟酸、
烟酰胺和咖啡因的测定
2025-01-24发布
2025-08-01实施
国 家 市 场 监 督 管 理 总 局
国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布
前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
本文件规定了食品质量相关技术要求,食品安全相关要求见有关法律法规、政策和食品安全标准等
文件。
本文件代替GB/T 5009.197-2003《保健食品中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的
测定》,与GB/T 5009.197-2003相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下:
a) 更改了适用范围(见第1章,2003年版的第1章);
b) 增加了核黄素的测定(见5.3.2、5.4.2、7.4、7.5、第8章和附录A);
c) 更改了试样制备和处理方法(见7.1、7.2,2003年版的5.1);
d) 更改了液相色谱参考条件(见7.3,2003年版的5.2);
e) 更改了检出限、定量限(见第10章,2003年版的第1章)。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由全国特殊食品标准化技术委员会(SAC/TC466)提出并归口。
本文件起草单位:江中药业股份有限公司、杭州市疾病预防控制中心(杭州市卫生监督所)、江苏艾
兰得营养品有限公司、中轻技术创新中心有限公司、浙江新维士生物科技有限公司、健合(中国)有限公
司、中国食品发酵工业研究院有限公司、江苏华膳健康科技有限公司、东鹏饮料(集团)股份有限公司、
安利(中国)日用品有限公司、浙江养生堂天然药物研究所有限公司、通标标准技术服务有限公司、汤臣
倍健股份有限公司、河北晨光检测技术服务有限公司。
本文件主要起草人:陈芳、金铨、徐小明、武竹英、郑敏敏、严俊、钟其顶、安红梅、黎勇、迟华忠、王道兵、
胡海娥、彭先武、黄志明、潘敏尧、罗诗慧、张晓芳、徐浩然、刘洋、常俊、徐军、钟顺好、张沛霞、吴祥骞、
李学莉、刘春丽、王校冬、杨潞芳、黄正华、贺瑞坤、王文昌、岳红卫。
本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为:
---2003年首次发布为GB/T 5009.197-2003;
---本次为第一次修订。
保健食品中硫胺素、核黄素、吡哆醇、烟酸、
烟酰胺和咖啡因的测定
1 范围
本文件描述了保健食品中硫胺素、核黄素、吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的高效液相色谱测定
方法。
本文件适用于片剂、粉剂、硬胶囊、软胶囊、口服液、饮料、凝胶糖果等剂型形态保健食品中硫胺素、
核黄素、吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖啡因的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文
件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于
本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 原理
试样经20%甲醇-0.1%磷酸溶液提取和稀释后,经高效液相色谱柱分离、紫外检测器检测,以保留
时间定性,外标法定量。
5 试剂或材料
除非另有规定,仅使用色谱纯试剂。
5.1 试剂
5.1.1 水,按GB/T 6682规定的一级水。
5.1.2 甲醇(CH3OH)。
5.1.3 乙腈(CH3CN)。
5.1.4 1-癸烷磺酸钠(C10H21NaO3S)。
5.1.5 磷酸(H3PO4):分析纯。
5.1.6 盐酸(HCl):分析纯。
5.1.7 酸性磷酸酶:酶活力≥0.5U/mg。
5.2 试剂配制
5.2.1 20%甲醇-0.1%磷酸溶液:量取200mL甲醇(5.1.2),1mL磷酸(5.1.5),用水稀释至1000mL,超声
5min,混匀。
5.2.2 盐酸溶液(0.1mol/L):移取9mL的盐酸(5.1.6),用水稀释至1000mL,混匀。
5.2.3 盐酸溶液(1∶1体积比):量取100mL的盐酸(5.1.6),缓缓倒入100mL水中,混匀。
5.2.4 流动相A:5mmol/L1-癸烷磺酸钠溶液(含0.15%磷酸)。称取1.22g1-癸烷磺酸钠(5.1.4),用
950mL水溶解,加入1.5mL磷酸(5.1.5),用水稀释至1000mL,超声5min,混匀。
5.2.5 流动相B:5mmol/L1-癸烷磺酸钠-90%乙腈溶液(含0.15%磷酸)。称取1.22g1-癸烷磺酸钠
(5.1.4),用100mL水溶解,加入1.5mL磷酸(5.1.5),加入到900mL乙腈(5.1.3)中,超声5min,混匀。
5.3 标准样品或标准物质
5.3.1 盐酸硫胺素标准品(C12H17ClN4OS·HCl,CAS号:67-03-8):纯度不低于98%,或经国家认证并
授予证书的标准样品或标准物质。
5.3.2 核黄素标准品(C17H20N4O6,CAS号:83-88-5):纯度不低于98%,或经国家认证并授予证书的标
准样品或标准物质。
5.3.3 烟酸标准品(C6H5NO2,CAS号:59-67-6):纯度不低于98%,或经国家认证并授予证书的标准样
品或标准物质。
5.3.4 烟酰胺标准品(C6H6N2O,CAS号:98-92-0):纯度不低于98%,或经国家认证并授予证书的标准
样品或标准物质。
5.3.5 盐酸吡哆醇标准品(C8H11NO3·HCl,CAS号:58-56-0):纯度不低于98%,或经国家认证并授
予证书的标准样品或标准物质。
5.3.6 咖啡因标准品(C8H10N4O2,CAS号:58-08-2):纯度不低于99%,或经国家认证并授予证书的标
准样品或标准物质。
5.4 标准溶液配制
5.4.1 硫胺素标准储备溶液(1mg/mL):称取盐酸硫胺素标准品(5.3.1)12.7mg(精确至0.1mg,相当
于硫胺素10mg),用0.1mol/L盐酸溶液(5.2.2)溶解并定容至10mL容量瓶中,混匀后转移入棕色玻
璃容器中,在2℃~8℃冰箱中贮存,有效期3个月。
5.4.2 核黄素标准储备溶液(0.1mg/mL):称取核黄素标准品(5.3.2)10mg(精确至0.1mg),加入
2mL盐酸溶液(5.2.3),超声溶解后,立即用水定容至100mL容量瓶中,混匀后转移入棕色玻璃容器
中,在2℃~8℃冰箱中贮存,有效期3个月。
5.4.3 烟酸标准储备溶液(1mg/mL):称取烟酸标准品(5.3.3)10mg(精确至0.1mg),用0.1mol/L盐
酸溶液(5.2.2)溶解并定容至10mL容量瓶中,混匀后转移入棕色玻璃容器中,在2℃~8℃冰箱中贮
存,有效期3个月。
5.4.4 烟酰胺标准储备溶液(1mg/mL):称取烟酰胺标准品(5.3.4)10mg(精确至0.1mg),用
0.1mol/L盐酸溶液(5.2.2)溶解并定容至10mL容量瓶中,混匀后转移入棕色玻璃容器中,在2℃~8℃
冰箱中贮存,有效期3个月。
5.4.5 吡哆醇标准储备溶液(1mg/mL):称取盐酸吡哆醇标准品(5.3.5)12.2mg(精确至0.1mg,相当
于吡哆醇10mg),用0.1mol/L盐酸溶液(5.2.2)溶解并定容至10mL容量瓶中,混匀后转移入棕色玻
璃容器中,在2℃~8℃冰箱中贮存,有效期3个月。
5.4.6 咖啡因标准储备溶液(1mg/mL):称取咖啡因标准品(5.3.6)10mg(精确至0.1mg),用
0.1mol/L盐酸溶液(5.2.2)溶解并定容至10mL容量瓶中,混匀后转移入棕色玻璃容器中,在2℃~8℃
冰箱中贮存,有效期3个月。
5.4.7 混合标准中间溶液(50μg/mL):分别移取硫胺素标准储备溶液(5.4.1)、烟酸标准储备溶液
(5.4.3)、烟酰胺标准储备溶液(5.4.4)、吡哆醇标准储备溶液(5.4.5)、咖啡因标准储备溶液(5.4.6)各
2.5mL,核黄素标准储备溶液(5.4.2)25mL于50mL容量瓶中,以20%甲醇-0.1%磷酸溶液(5.2.1)定
容。混匀后转移入棕色玻璃容器中,临用现配。
5.5 系列标准工作溶液配制
分别移取混合标准中间溶液(5.4.7)0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL、2mL、5mL至5mL容量瓶
中,用20%甲醇-0.1%磷酸溶液(5.2.1)定容。该标准系列工作溶液浓度分别为1μg/mL、2μg/mL、
5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL。临用现配。
5.6 材料
滤膜:0.45μm,有机系。
6 仪器设备
6.1 高效液相色谱仪:配紫外检测器或相当者。
6.2 天平:感量0.1mg和0.01g。
6.3 超声波清洗器。
6.4 涡旋混合器。
6.5 恒温水浴锅。
6.6 高速粉碎机。
6.7 高速离心机:转速不低于8000r/min。
7 分析步骤
7.1 试样制备
不同剂型形态试样制备步骤如下:
a) 片剂:取不少于20片或不少于10g样品,经高速粉碎机或研钵磨成粉状,混匀,封存备用;
b) 粉剂:取不少于5袋或不少于10g样品,混匀,封存备用;
c) 硬胶囊:取不少于20粒或不少于5g样品,除去外壳经高速粉碎机或研钵磨成粉状,混匀,封
存备用;
d) 软胶囊:取不少于20粒或不少于5g样品,除去外壳取其内容物混匀,封存备用;
e) 口服液、饮料:取不少于20mL样品充分混匀,封存备用;
f) 凝胶糖果:取样品不少于20粒或不少于10g样品(对于不同色泽或风味混装的试样,则按色
泽或风味均匀取样),深度冷冻粉碎或剪碎,混匀,封存备用。
7.2 试样处理
7.2.1 固体或半固体试样
称取0.2g~2g(精确至0.01g)混合均匀的固体或半固体试样于50mL离心管中,加入20mL
20%甲醇-0.1%磷酸溶液(5.2.1),称重,涡旋混匀,于(98±2)℃水浴中加热30min,超声提取15min,冷
却后称重,用20%甲醇-0.1%磷酸溶液(5.2.1)补足失重,混匀后,取适量以8000r/min离心5min,上
清液经滤膜(5.6)过滤,待测。
7.2.2 液体试样
移取1.0mL或称取1g(精确至0.01g)混合均匀的液体试样于玻璃容器中,加20%甲醇-0.1%磷
酸溶液(5.2.1)适量,超声15min,放冷至室温,转移至10mL容量瓶中,加20%甲醇-0.1%磷酸溶液
(5.2.1)至刻度,摇匀。取适量以8000r/min离心5min,上清液经滤膜(5.6)过滤,待测。
注1:对于添加形式为核黄素磷酸钠的试样,称样后,加入10mg酸性磷酸酶(5.1.7)及20%甲醇-0.1%磷酸溶液
(5.2.1)20mL,pH调至4.5,45℃酶解16h后,离心、过滤膜(5.6)后待进样。
注2:根据试样中组分的含量,适当增加或减少稀释倍数f,使组分的质量浓度处于标准曲线测定范围内。
7.3 色谱参考条件
液相色谱参考条件如下:
a) 色谱柱:填料为含极性内嵌基团的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(粒径5μm,4.6mm×
150mm),或等效色谱柱;
b) 流动相:A相为5mmol/L1-癸烷磺酸钠溶液(含0.15%磷酸)(5.2.4),B相为5mmol/L1-癸烷
磺酸钠-90%乙腈溶液(含0.15%磷酸)(5.2.5),梯度洗脱程序见表1;
c) 流速:1.0mL/min;
d) 柱温:30℃;
e) 进样体积:10μL;
f) 检测波长:硫胺素、核黄素、烟酸和烟酰胺为260nm,咖啡因和吡哆醇为280nm。
表1 梯度洗脱程序
时间
min
0 85 15
11 85 15
20 50 50
20.5 20 80
25.5 20 80
26 85 15
41 85 15
7.4 标准曲线的制作
将系列标准工作溶液(5.5)分别注入高效液相色谱仪中,测定各组分的峰面积,以相应标准工作溶
液的质量浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。硫胺素、核黄素、吡哆醇、烟酸、烟酰胺和咖
啡因标准溶液(10μg/mL)高效液相色谱图见附录A中图A.1。
7.5 试样溶液的测定
将试样溶液注入高效液相色谱仪中,得到相应峰面积,根据标准曲线,以外标法计算待测试样溶液
中硫胺素、核黄素、吡哆醇、烟酸、烟酰胺、咖啡因的质量浓度。试样中硫胺素、核黄素、吡哆醇、烟酸、烟
酰胺和咖啡因高效液相色谱图见图A.2和图A.3。
平行做两份试验。
8 结果计算与表述
试样中硫胺素、核黄素、吡哆醇、烟酸、烟酰胺、咖啡因各组分的含量按公式(1)计算:
Xi=ρ
i×V×100
m×1000 ×f
(1)
式中:
Xi ---试样中单一组分的含量,固体或半固体试样单位为毫克每百克(mg/100g),液体试
样单位为毫克每百毫升(mg/100mL);
ρi ---由标准曲线得到的试样溶液中单一组分的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);
V ---试样的稀释体积,单位为毫升(mL);
m ---试样取样量,单位为克或毫升(g或mL);
f ---试样溶液的稀释倍数;
100、1000---单位换算系数。
结果保留三位有效数字。
注:试样中测定的硫胺素含量乘以换算系数1.271、1.234,分别得......
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