HJ 1001-2018 相关标准英文版PDF
| 标准号码 | 价格美元 | 第2步(购买) | 交付天数 | 标准名称 |
| HJ 1001-2018 | 879 | HJ 1001-2018 | [PDF]天数 <=6 | 水质 总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法 |
| 基本信息 | |
|---|---|
| 标准编号 | HJ 1001-2018 (HJ1001-2018) |
| 中文名称 | 水质 总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法 |
| 英文名称 | Water quality - Determination of total coliforms, fecal coliforms and Escherichia coli - Enzyme substrate method |
| 行业 | 环保行业标准 |
| 中标分类 | Z16 |
| 字数估计 | 38,39 |
| 发布日期 | 2018-12-26 |
| 实施日期 | 2019-06-01 |
| 标准依据 | 生态环境部公告2018年第73号 |
| 发布机构 | 生态环境部 |
HJ 1001-2018
Water quality-Determination of total coliforms, fecal coliforms and Escherichia coli-Enzyme substrate method
中华人民共和国国家环境保护标准
水质 总大肠菌群、 粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法
2018-12-26 发布
2019-06-01 实施
生 态 环 境 部 发 布
目次
前言...ii
1 适用范围...1
2 规范性引用文件...1
3 术语和定义...1
4 方法原理...2
5 干扰和消除...2
6 试剂和材料...2
7 仪器和设备...3
8 样品...3
9 分析步骤...4
10 结果计算与表示...6
11 精密度和准确度...6
12 质量保证和质量控制...8
13 废弃物处理...8
附录 A（资料性附录） 结果判定参考图片...9
附录 B（规范性附录） 97 孔定量盘法 MPN 表...12
附录 C（资料性附录） 97 孔定量盘法 MPN 表对应 95%置信区间...20
前言
为贯彻《中华人民共和国环境保护法》 和《中华人民共和国水污染防治法》 ， 保护生态
环境， 保障人体健康， 规范水中总大肠菌群、 粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定方法， 制定本标准。
本标准规定了测定地表水、 地下水、 生活污水和工业废水中总大肠菌群、 粪大肠菌群和
大肠埃希氏菌的酶底物法。
本标准的附录A为规范性附录， 附录B和附录C为资料性附录。
本标准为首次发布。
本标准由生态环境部生态环境监测司、 法规与标准司组织制订。
本标准起草单位： 上海市环境监测中心。
本标准验证单位江苏省环境监测中心、 浙江省环境监测中心、 常州市环境监测中心、 上
海市松江区环境监测站、 上海市长宁区环境监测站和上海市青浦区环境监测站。
本标准生态环境部2018年12月26日批准。
本标准自2019年6月1日起实施。
本标准由生态环境部解释。1
水质 总大肠菌群、 粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法
1 适用范围
本标准规定了测定水中总大肠菌群、 粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的酶底物法。
本标准适用于地表水、 地下水、 生活污水和工业废水中总大肠菌群、 粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定。
本方法的检出限为 10 MPN/L。
2 规范性引用文件
本标准引用了下列文件或其中的条款。 凡是不注日期的引用文件， 其有效版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验用水规格和实验方法
GB/T 14581 水质 湖泊和水库采样技术指导
HJ 494 水质 采样技术指导
HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
3.1
总大肠菌群 total coliforms
37℃培养 24 h， 能产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）， 分解选择性培养基中的邻硝
基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG） 生成黄色的邻硝基苯酚的肠杆菌科细菌。
3.2
粪大肠菌群 fecal coliforms
又称耐热大肠菌群（thermotolerant coliforms）。 44.5℃培养 24 h， 能产生β-半乳糖苷酶
（β-D-galactosidase）， 分解选择性培养基中的邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）
生成黄色的邻硝基苯酚的肠杆菌科细菌。
3.3
大肠埃希氏菌 Escherichia coli
俗称大肠杆菌。 37℃培养 24 h， 能产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）， 分解选择性
培养基中的邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG） 生成黄色的邻硝基苯酚， 同时产生β-葡萄
糖醛酸酶（ β-Glucuronidase）， 分解选择性培养基中的 4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷2
（ MUG） 释放出荧光物质（ 4-甲基伞形酮） 的肠杆菌科细菌。
3.4
最大可能数 most probable number（ MPN）
又称稀释培养计数， 是一种基于泊松分布的间接计数法。 利用统计学原理， 根据一定体
积不同稀释度样品经培养后产生的目标微生物阳性数， 查表估算一定体积样品中目标微生物
存在的数量（ 单位体积存在目标微生物的最大可能数）。
4 方法原理
在特定温度下培养特定的时间， 总大肠菌群、 粪大肠菌群、 大肠埃希氏菌能产生β-半乳
糖苷酶， 将选择性培养基中的无色底物邻硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ ONPG） 分解为黄色的
邻硝基苯酚（ ONP）； 大肠埃希氏菌同时又能产生β-葡萄糖醛酸酶， 将选择性培养基中的 4-
甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷（ MUG） 分解为 4-甲基伞形酮， 在紫外灯照射下产生荧光。
统计阳性反应出现数量， 查 MPN 表， 分别计算样品中总大肠菌群、 粪大肠菌群、 大肠埃希氏菌的浓度值。
5 干扰和消除
5.1 活性氯具有氧化性， 能破坏微生物细胞内的酶活性， 导致细胞死亡，
可在样品采集（ 8.1）时加入硫代硫酸钠溶液（ 6.4） 消除干扰。
5.2 重金属离子具有细胞毒性， 能破坏微生物细胞内的酶活性， 导致细胞死亡， 可在样品
采集（ 8.1） 时加入乙二胺四乙酸二钠溶液（ 6.5） 消除干扰。
6 试剂和材料
除非另有说明， 分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂， 实验用水应满足 GB/T 6682中三级水的要求。
6.1 培养基。
本标准采用 Minimal Medium ONPG-MUG 培养基。 每 100 ml 样品需使用培养基粉末
2.7 g± 0.5 g， 所含基本成分如下：
6.2 硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O）。
6.3 乙二胺四乙酸二钠（C10H14N2O8Na2·2H2O）。
6.4 硫代硫酸钠溶液： ρ（Na2S2O3） =0.10 g/ml。
称取 15.7 g 硫代硫酸钠（6.2） ， 溶于适量水中， 定容至 100 ml， 临用现配。
6.5 乙二胺四乙酸二钠溶液： ρ（C10H14N2O8Na2·2H2O） =0.15 g/ml。
称取 15 g 乙二胺四乙酸二钠（6.3） ， 溶于适量水中， 定容至 100 ml， 此溶液保质期为30 d。
6.6 97 孔定量盘： 含 49 个大孔， 48 个小孔。 其中， 每个小孔可容纳 0.186 ml 样品， 大孔
中 48 个大孔每个可容纳 1.86 ml 样品， 一个顶部大孔可容纳 11 ml 样品。 也可采用经环氧乙烷灭菌的市售商品化成品。
6.7 标准阳性比色盘。
6.8 无菌水： 取适量实验用水， 经 121℃高压蒸汽灭菌 20 min， 备用。
7 仪器和设备
7.1 采样瓶： 具螺旋帽或磨口塞的 100 ml、 250 ml、 500 ml 广口玻璃瓶。
注： 在采集不存在或不考虑余氧、 金属离子干扰的样品时， 可采用市售无菌采样瓶或无菌采样袋。
7.2 高压蒸汽灭菌器： 121℃可调。
7.3 恒温培养箱： 允许温度偏差 37℃± 1℃、 44.5℃± 0.5℃。
7.4 程控定量封口机： 用于 97 孔定量盘（6.6） 的封口。
7.5 紫外灯： 365～366 nm。
7.6 移液管： 1 ml± 0.01 ml、 10 ml±0.1 ml。 也可采用计量合格的可调式移液器。
7.7 三角瓶： 100 ml。
7.8 量筒： 100 ml± 1 ml。
7.9 一般实验室常用仪器和设备。
注： 三角瓶、 移液管、 采样瓶等玻璃器皿及采样器具要在试验前按无菌操作要求包扎， 121℃高压蒸汽灭菌 20 min， 烘干， 备用。
8 样品
8.1 样品采集
点位布设及采样频次按照 GB/T 14581、 HJ/T 494 和 HJ/T 91 的相关规定执行。
采集微生物样品时， 采样瓶（7.1） 不得用样品洗涤， 采集样品于灭菌的采样瓶中。4
采集河流、 湖库等地表水样品时， 可握住瓶子下部直接将带塞采样瓶插入水中， 约距水
面 10～15 cm 处， 瓶口朝水流方向， 拔瓶塞， 使样品灌入瓶内然后盖上瓶塞， 将采样瓶从水
中取出。 如果没有水流， 可握住瓶子水平往前推。 采样量一般为采样瓶容量的 80%左右。
样品采集完毕后， 迅速扎上无菌包装纸。
从龙头装置采集样品时， 不要选用漏水龙头， 采水前将龙头打开至最大， 放水 3～5 min，
然后将龙头关闭， 用火焰灼烧约 3 min 灭菌或用 70%～75%的酒精对龙头进行消毒， 开足龙头，
再放水 1 min， 以充分除去水管中的滞留杂质。 采样时控制水流速度， 小心接入瓶内。
采集地表水、 废水样品及一定深度的样品时， 也可使用灭菌过的专用采样装置采样。
在同一采样点进行分层采样时， 应自上而下进行， 以免不同层次的搅扰。
如果采集的是含有活性氯的样品， 需在采样瓶灭菌前加入硫代硫酸钠溶液（6.4）， 以除
去活性氯对细菌的抑制作用（每 125 ml 容积加入 0.1 ml 的硫代硫酸钠溶液）； 如果采集的是
重金属离子含量较高的样品， 则在采样瓶灭菌前加入乙二胺四乙酸二钠溶液（6.5）， 以消除
干扰（每 125 ml 容积加入 0.3 ml 的乙二胺四乙酸二钠溶液）。
注： 15.7 mg 硫代硫酸钠（6.2） 可去除样品中 1.5 mg 活性氯， 硫代硫酸钠用量可根据样品实际活性氯量调整。
8.2 样品保存
采样后应在 2 h 内检测， 否则， 应 10℃以下冷藏但不得超过 6 h。 实验室接样后， 不能
立即开展检测的， 将样品于 4℃以下冷藏并在 2 h 内检测。
9 分析步骤
9.1 样品稀释
根据样品污染程度确定接种量（见表 1） ， 避免接种样品培养后 97 孔定量盘（6.6） 出
现全部阳性或全部阴性。 接种量小于 100 ml 时， 应稀释样品后接种， 接种量为 10 ml 时，
取 10 ml 样品加入到盛有 90 ml 无菌水（6.8） 的三角瓶（7.7） 中混匀制成 1:10 的稀释样品，
其他接种量的稀释样品依次类推。 对于未知样品， 可选用多个接种量进行检测。
表 1 样品接种量参考表
9.2 接种
量取 100 ml 样品或稀释样品于灭菌后的三角瓶， 加入 2.7 g± 0.5 g 培养基（6.1） 粉末，
充分混匀， 完全溶解后， 全部倒入 97 孔定量盘（6.6） 内， 以手抚平 97 孔定量盘背面， 赶
除孔内气泡， 然后用程控定量封口机（7.4） 封口。 观察 97 孔定量盘颜色， 若出现类似或深
于标准阳性比色盘（6.7） 的颜色， 则需排查样品、 培养基、 无菌水等一系列因素后， 终止试验或重新操作。
注： 9.1、 9.2 步骤在野外操作时应避开明显局部污染源， 建议使用一次性手套、 口罩、 酒精灯等。
9.3 培养
测定总大肠菌群和大肠埃希氏菌时， 将封口后的 97 孔定量盘放入恒温培养箱（7.3） 中37℃± 1℃下培养 24 h。
测定粪大肠菌群时， 将封口后的 97 孔定量盘放入的恒温培养箱中 44.5℃±0.5℃下培养24 h。
9.4 对照试验
9.4.1 空白对照
每次试验都要用无菌水（6.8） 按照步骤 9.1～9.3 进行实验室空白测定。 培养后的 97 孔
定量盘不得有任何颜色反应， 否则， 该次样品测定结果无效， 应查明原因后重新测定。
9.4.2 阴性和阳性对照
总大肠菌群、 大肠埃希氏菌、 粪大肠菌群的阴性、 阳性菌株参考表 2。
表 2 阴性、 阳性菌株参考表
10 结果计算与表示
10.1 结果计算
从 97 孔定量盘法 MPN 表（见附录 B） 中查得每 100 ml 样品中总大肠菌群、 粪大肠菌
群数或大肠埃希氏菌的 MPN 值（置信区间参见附录 C） 后， 再根据样品不同的稀释度， 按
照公式（1） 换算样品中总大肠菌群、 粪大肠菌群数或大肠埃希氏菌浓度（MPN/L） ：
10.2 结果表示
测定结果保留两位有效数字， 当测定结果≥100 MPN/L 时， 以科学计数法表示； 若 97
孔均为阴性， 可报告为总大肠菌群、 粪大肠菌群数或大肠埃希氏菌未检出或＜10 ......