| 标准编号 | SN/T 1199-2010 (SN/T1199-2010) | | 中文名称 | 棉花中转基因成分定性PCR检验方法 | | 英文名称 | Protocol of the polymerase chain reaction for detecting genetically modified components in cotton | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B32 | | 国际标准分类 | 65.020 | | 字数估计 | 10,124 | | 发布日期 | 2010-05-27 | | 实施日期 | 2010-12-01 | | 旧标准 (被替代) | SN/T 1199-2003 | | 引用标准 | GB 5491; GB/T 6682; GB/T 10360; GB/T 19495.1; GB/T 19495.2; GB/T 19495.3-2004 | | 标准依据 | National Quality Inspection (2010) 290; industry standard filing Notice 2010 No. 10 (No. 130 overall) | | 发布机构 | 海关总署 | | 范围 | 本标准规定了棉籽中转基因成分的定性PCR检测方法。本标准适用于棉籽及粗加工产品中抗鳞翅目昆虫棉花SGK32l、SGK9708、GKl、GK2、GK3、GK5、GKl2、GKl9、GK22、GK95-J转基因成分普通PCR筛选检测和转基因棉花晶系MON531、MONl445和MONl5985实时荧光PCR的品系鉴定。 | SN/T 1199-2010
Protocol of the polymerase chain reaction for detecting genetically modified components in cotton
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
代替SN/T 1199-2003
棉花中转基因成分定性PCR检验方法
2010-05-27发布
2010-12-01实施
中 华 人 民 共 和 国
国家质量监督检验检疫总局 发 布
前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准代替SN/T 1199-2003《棉花中转基因成分定性PCR检测方法》。
本标准与SN/T 1199-2003相比,主要技术变化如下:
---规范了专业用语和表述方式;
---范围中增加“转基因棉花品系 MON531,MON1445和 MON15985实时荧光PCR的品系
鉴定”;
---术语和缩略语参照GB/T 19495.1《转基因产品检测 实验室技术要求》中的规定;
---对棉花中DNA的提取,采用CTAB法的部分(2003年版的6.4.1和6.4.2;本版的9.1.1)采
用GB/T 19495.3中规定的方法;增加了9.1.2凡不适用于9.2.1方法的样品可按照
GB/T 19495.3中规定相应的方法执行;
---对食品中核酸的定量(2003年版的6.5;本版的9.2)采用GB/T 19495.3中规定的方法;
---增加了实时荧光PCR方法,并在结果判断步骤中(2003年版的第7章;本版的9.5.2)相应增
加了实时荧光PCR检测结果判断方法;
---对常规PCR扩增反应体系,反应循环数及其结果判断(2003年版的6.6.1、6.6.2、6.6.3、表2
和表3;本版的8.5.1、表 A.1、表 A.3和表 A.4)的表述方式重新编排,并修改了确证实验
方法。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位:中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局。
本标准主要起草人:刘烜、刘伟、贺艳、潘良文、赵卫东、郑文杰、刘跃庭。
本标准于2003年首次发布,2010年第一次修订。
棉花中转基因成分定性PCR检验方法
1 范围
本标准规定了棉籽中转基因成分的定性PCR检测方法。
本标准适用于棉籽及粗加工产品中抗鳞翅目昆虫棉花SGK321、SGK9708、GK1、GK2、GK3、GK5、
GK12、GK19、GK22、GK95-1转基因成分普通PCR筛选检测和转基因棉花品系 MON531、MON1445
和 MON15985实时荧光PCR的品系鉴定。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
件,凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB 5491 粮食、油料检验 扦样、分样法
GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法
GB/T 10360 油料饼粕 扦样
GB/T 19495.1 转基因产品检测 通用要求和定义
GB/T 19495.2 转基因产品检测 实验室技术要求
GB/T 19495.3-2004 转基因产品检测 核酸提取纯化方法
3 术语和缩略语
GB/T 19495.1界定的术语和缩略语适用于本文件。
4 原理
样品经过提取DNA后,针对转基因棉籽内外源基因所设计的引物和探针序列,通过普通PCR,特
异性扩增内外源基因的DNA片段,并根据PCR判断该样品中是否含有转基因成分。如需进行品系鉴
定,则经过实时荧光PCR技术,判断样品中是否含有某品系。
5 仪器用具
5.1 基因扩增仪、电泳仪、电泳槽、凝胶分析成像系统、紫外可见分光光度计、天平(感量1mg和
0.1mg)、高压灭菌锅、超低温冰箱、冷冻离心机、水浴锅、微波炉、实时荧光定量PCR仪、超净工作台、
超纯水器、旋涡振荡器。
5.2 微量加样器(2.5μL,10μL,20μL,100μL,200μL,1000μL)、PCR反应管......
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