| 标准编号 | SN/T 1223-2003 (SN/T1223-2003) | | 中文名称 | 绵羊进行性肺炎抗体检测方法. 琼脂免疫扩散试验 | | 英文名称 | The detection of antibodies against ovine progressive pneumonia virus. Protocol of agar gel immuno-diffusion test | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | B41 | | 国际标准分类 | 11.220 | | 字数估计 | 8,866 | | 发布日期 | 2003-05-28 | | 实施日期 | 2003-12-01 | | 发布机构 | 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 | SN/T 1223-2003
The detection of antibodies against ovine progressive pneumonia virus.Protocol of agar gel immuno-diffusion test
书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN／T１２２３-２００３
绵羊进行性肺炎抗体检测方法 琼脂
免疫扩散试验
２００３-０５-２８发布
２００３-１２-０１实施
中 华 人 民 共 和 国
国家质量监督检验检疫总局 发 布
前言
本标准的附录Ａ是规范性附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。
本标准主要起草人：黄运生、李永学、罗卫、石迎新。
SN／T１２２３-２００３
引 言
绵羊进行性肺炎（ＯｖｉｎｅＰｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅＰｎｅｕｍｏｎｉａ，ＯＰＰ）或绵羊梅迪-维斯纳病（Ｍａｅｄｉ-ＶｉGB ａＤｉｓ-
ｅａｓｅ，ＭＶＤ）是由 ＭＶ／ＯＰＰ病毒引起的绵羊的一种持续性病毒感染，其特征为病程缓慢、进行性消瘦和
呼吸困难，多表现间质性肺炎和脑脊髓炎症状。感染动物是主要传染源，目前已知仅有绵羊和山羊对本
病易感，而且绵羊和山羊之间有交叉感染性。本病主要通过初乳传给新生羔羊，通过呼吸道水平传播，
或通过污染的饮水、饲料和牧草传播。本病的潜伏期特别长，动物在接触病毒１年～３年或更长时间后
才出现临床症状，继之呈进行性临床经过。感染动物可终身带毒，多数羊可出现临床症状和病变。在
ＭＶ／ＯＰＰ病毒感染中，中和抗体没有阻止病毒在血液中传播的作用。目前该病在饲养绵羊的多数国家
已确定存在。ＭＶ／ＯＰＰ临床和亚临床症状为在肺、乳房、中枢神经系统表现进行性单核细胞炎性病灶
和硬结性乳腺炎。ＭＶ／ＯＰＰ对绵羊的繁育和改良及绵羊的贸易造成了严重的影响，所造成的经济损失
不能低估，该病已被国际兽疫局（ＯＩＥ）列入Ｂ类疾病和我国农业部公布的二类传染病。由于多数感染
病毒的绵羊和山羊呈现无症状，但能持续带毒并且通过初乳或哺乳、甚至通过呼吸道分泌物传播病毒，
因此通过建立快速可靠的诊断方法来检疫该病是控制该病的重要手段。
SN／T１２２３-２００３
绵羊进行性肺炎抗体检测方法 琼脂
免疫扩散试验
１ 范围
本标准规定了绵羊进行性肺炎（梅迪-维斯纳病）抗体检测的操作方法和步骤。
本标准用于检测绵羊进行性肺炎（梅迪-维斯纳病）病毒抗体，适用于本病的检疫、诊断、疫情监测和
流行病学调查。
２ 原理
琼脂是一种含有硫酸基的多糖体，形成凝胶后呈多孔结构，孔径的大小取决于琼脂浓度。抗原和抗
体的分子量一般都在２０万以下，抗原及其特异性抗体在凝胶中从高浓度区域向低浓度区域扩散时受阻
力很小，基本上呈自由扩散形式。由于不同抗原分子的分子量、结构、形状和电荷量不同，因此其扩散系
数不同，在凝胶中的扩散速度也就不同。当抗原与相应抗体经扩散后在凝胶中相遇，形成抗原抗体复合
物。若两者在相遇处比例适当，则形成最大的复合物。由于复合物的分子量增大，颗粒增大，因而不再
继续扩散而产生沉淀，呈现出线状或带状的“特异性屏障”，称为免疫沉淀线或免疫沉淀带，因此，可根据
抗原与标准阳性血清之间出现的这种沉淀线或沉淀带和抗原与被检血清之间是否出现沉淀线或沉淀带
来判定被检血清中是否存在抗体。
ＭＶ／ＯＰＰ病毒最重要的抗原有两种，一种是病毒的囊膜糖蛋白，通常称为ｇＰ１３５；另一种为核心蛋
白Ｐ２８，制备这两种蛋白时收取感染细胞的培养液，经聚乙二醇透析浓缩５０倍左右后获得的一种抗原
制剂。以此抗原检测 ＭＶ／ＯＰＰ病毒抗体，特异性强，重复性好。从理论上讲，这两种抗原蛋白与其相
应的阳性血清应该成两条沉淀线，但试验结果证明，几乎所有的被检阳性血清只形成一条明显的沉
淀线。
３ 材料准备
３．１ 试剂：琼脂糖、氯化钠、叠氮钠、Ｔｒｉｓ碱、盐酸。
３．２ ＭＶ／ＯＰＰ琼脂扩散试验抗原、标准阳性血清：由ＯＩＥ参考实验室或国家有关部门指定生产厂家
或指定实验室提供，按说明书使用。
３．３ 被检绵羊血清：按常规方法采血，分离血清，５６℃水浴灭能３０ｍｉｎ。血清应无溶血、无细菌污染，
保存于４℃。
３．４ 器材：天平、吸管、量筒、平皿（规格为９０．０ｍｍ×１５．０ｍｍ）、三角瓶、外径为５．３ｍｍ的七孔梅花
样金属打孔器、微量移液器和微量吸头、观察灯、水浴锅、高压灭菌锅等。
４ 操作方法和步骤
４．１ １％琼脂板的制备。
４．１．１ Ｔｒｉｓ-ＨＣｌ缓冲液的配制：见附录Ａ。
４．１．２ １％琼脂......
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