| 标准编号 | SN/T 1626-2019 (SN/T1626-2019) | | 中文名称 | 出口肉及肉制品中甲硝唑、替硝唑、奥硝唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑、塞克硝唑残留量测定方法 液相色谱-质谱/质谱法法 | | 英文名称 | Determination of metronidazole, tinidazole, ornidazole, ronidazole, dimetridazole and secnidazole residues in meat and meat products for export -- LC-MS/MS method | | 行业 | 商检行业标准 (推荐) | | 中标分类 | C53 | | 国际标准分类 | | | 字数估计 | 14,189 | | 发布日期 | 2019-10-25 | | 实施日期 | 2020-05-01 | | 旧标准 (被替代) | SN/T 1626-2005 | | 标准依据 | 海关总署公告2019年第166号 | | 发布机构 | 海关总署 | SN/T 1626-2019: 出口肉及肉制品中甲硝唑、替硝唑、奥硝唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑、塞克硝唑残留量测定方法 液相色谱-质谱/质谱法法
SN/T 1626-2019 英文名称: Determination of metronidazole, tinidazole, ornidazole, ronidazole, dimetridazole and secnidazole residues in meat and meat products for export -- LC-MS/MS method
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
代替 SN/T 1626 2005
出口肉及肉制品中甲硝唑、替硝唑、奥硝唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑、塞克硝唑残留量测定方法 液相色谱-质谱/质谱法法
中华人民共和国海关总署发布
1 范围
本标准规定了出口肉及肉制品中甲硝唑、羟基甲硝唑(甲硝唑代谢物)、洛硝哒唑、二甲硝咪唑、1-甲
基-2-羟甲基-5-硝基咪唑(洛硝哒唑与二甲硝咪唑的共同代谢物，简写为HMMNI)、替硝唑、奥硝唑、塞
克硝唑8种硝基咪唑残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。
本标准适用于鸡肉、猪肉、牛肉、香肠、罐头、酱牛肉中甲硝唑、羟基甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑、HMMNI、替硝唑、奥硝唑、塞克硝唑8种硝基咪唑残留量的测定和确证。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改版)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
3 方法提要
试样中的硝基咪唑类药物采用乙酸乙酯提取，提取液经硅胶基质的强阳离子交换固相萃取柱净化，用液相色谱-质谱/质谱仪检测和确证，替硝唑、奥硝唑及塞克硝唑采用外标法定量，其余药物采用内标法定量。
4 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。
4.1 乙酸乙酯：液相色谱级。
4.2 甲醇：液相色谱级。
4.3 丙酮：液相色谱级。
4.4 乙腈：液相色谱级。
4.5 氨水：含量(质量分数浓度)为25%～28%。
4.6 甲酸：液相色谱级。
4.7 乙酸：液相色谱级。
4.8 无水硫酸钠：分析纯。
4.9 乙酸-乙酸乙酯(5+95,体积比):量取5mL乙酸，加入95mL乙酸乙酯，混匀备用。
4.10 氨水-乙腈(5+95,体积比):量取5mL氨水，加入95mL乙腈，混匀备用。
4.110.1%甲酸水溶液：量取1mL甲酸(4.6),用水稀释至1000 mL。
4.128种硝基咪唑及代谢物标准物质：标准品纯度均≥98.0%。各化合物基本信息参见附录A表A.1。
4.13 标准储备溶液：准确称取硝基咪唑标准品10mg(准确至0.1 mg),分别用甲醇溶解，并定容到10mL棕色容量瓶中，配制溶液最终浓度为1mg/mL,置于冰箱中1℃～4℃下避光保存。
4.14 混合标准中间液I:取羟基甲硝唑和HMMNI标准储备液(4.13)各2mL,其余标准储备液
(4.13)各1mL,移入100mL棕色容量瓶中，用甲醇定容。配制混和标液中的羟基甲硝唑和HMMNI终浓度为20μg/mL,其余药物终浓度为10μg/mL,置于冰箱中1℃～4℃下避光保存。
4.15 混合标准中间液Ⅱ:取1mL混合标准中间液I(4.14)于100mL棕色容量瓶中，用水稀释至刻度。该溶液羟基甲硝唑和HMMNI终浓度为200ng/mL,其余标准物质浓度为100ng/mL。置于冰箱中1℃～4℃下避光保存。
4.17 同位素内标储备液：准确称取同位素内标标准品10 mg(准确至0.1 mg),分别用甲醇溶解，并定容到50mL棕色容量瓶中，配制终浓度为200μg/mL储备液，置于冰箱中1℃～4℃下避光保存。
4.18同位素内标中间液：移取适当体积各同位素内标储备液(4.17)用甲醇稀释至1pg/mL,置于冰箱中1℃～4℃下避光保存。
4.19同位素内标工作液：移取适当体积同位素内标中间液(4.18)用水稀释至100 ng/mL,置于冰箱中1℃～4 ℃下避光保存。
4.20基质空白溶液：将不同基质的阴性空白样品除不添加内标工作液步骤外分别按照7.1和7.2净化处理后得到的溶液。
4.21基质标准工作溶液：根据实验需要吸取一定量的混合标准中间液Ⅱ(4.15)和同位素内标工作液
(4.19),用基质空白溶液(4.20)稀释成所需浓度。
4.22硅胶基质强阳离子交换固相萃取柱：分别用3mL甲醇和3mL乙酸-乙酸乙酯(4.9)预洗。整个过程应保持柱体湿润，最后柱上保留约1em溶液，关闭活塞，柱上端连接贮液器，贮液器底部塞小块脱脂棉，备用。
4.23微孔滤膜：0.22μm,有机相型。
5 仪器和设备
5.1 高效液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源(ESI)。
5.2 组织捣碎机。
5.3 分析天平：感量分别为0.1 mg和0.01 g。
5.4 离心机：转速不低于5000 r/min。
5.5 均质器，转速不小于10000 r/min。
5.6 涡旋混匀器。
5.7 氮气吹干仪。
5.8 固相萃取装置。
6 样品制备和保存
6.1 制样要求
在制样的过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。
6.2 试样制备
取代表性样品500g,将其可食部分切碎后，用组织捣碎机将样品充分捣碎均匀，装入洁净的盛样容器内，密封并标明标记，于-18℃以下冷冻存放。
7 测定步骤
7.1 提取
称取5.0g(精确至0.01g)试样，置于50mL具螺旋盖的聚丙烯离心管中，添加100μL同位素内标
工作液(4.19)离心管中，加入25mL乙酸乙酯(4.1),5g无水硫酸钠(4.8),10000 r/min均质1min,以5000 r/min离心5 min,所得上层清液转移至另一离心管中，加入0.5 mL乙酸(4.7)涡旋混合，待净化。
7.2 净化
将7.1所得上清液转移至已条件化的硅胶基质的阳离子交换柱(4.22)上的贮液器中，打开活塞，以小于2mL/min流速滴下。接着依次用3mL丙酮(4.3),3mL甲醇(4.2)淋洗，弃去淋洗液。最后用
6mL氨水乙腈(4.10)洗脱并收集(此过程流速小于2mL/min)。洗脱液在45℃下氮气吹至近干，用水定容至1mL,涡旋振荡或超声溶解，过0.22μm滤膜供液相色谱-质谱质谱仪测定。
7.3 测定
7.3.1 液相色谱参考条件
液相色谱参考条件如下：
a)色谱柱：C18柱，100mm×2.1 mm(内径),粒度1.7μm,或相当者；
b)流动相：梯度洗脱程序见表47
c) 流速：350μL/min;
d)柱温：40℃;
e)进样量：2μL。
7.3.2 质谱参数
质谱参数如下：
a) 离子化模式：电喷雾电离(ESI)正离子模式。
b) 质谱扫描方式：多反应监测(MRM)。
c) 其他质谱条件参见附录B。
7.3.3 定性测定
按照上述色谱和质谱条件下进行测定，试液中待测物色谱峰保留时间与基质标准工作溶液保留时
间偏差在±2.5%之内，各离子对的相对丰度应与标准品的相对丰度一致，且样品中各离子对的相对丰度与浓度接近的基质标准工作液中对应的离子对的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。
7.3.4 定量测定
本方法中甲硝唑及其代谢物羟基甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑及其共同代谢物HMMNI采用同位素内标法定量测定，替硝唑、奥硝唑、塞克硝唑采用基质外标法定量。根据样液中被测物的含量情况，选定响应值相近的混合标准工作液。标准工作溶液和样液中分析物的响应值均应在仪器的检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参差进样测定。在上述仪器条件下，各分析物的参考保留时间为：
羟基甲硝唑1.14 min、羟基甲......
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